Tellen en differentieren van Tellen en differentieren van WBC in liquor met de LH 750WBC in liquor met de LH 750

• Dr G.J.J. Beukeveld

Leukocytendiff in Liquor met de LH Leukocytendiff in Liquor met de LH 750750

• Klinische relevantie

• Differentiatie

• LH-750 instellingen

• Metingen

• Resultaten

• Conclusie

Klinische relevantieKlinische relevantie

• Meningitis is de ontsteking van de meninges

• Meninges zijn de membranen rond de hersenen en ruggenmerg

• Ontsteking door virus of bacterie

• Virale ontsteking geneest vanzelf zonder restschade

• Bacteriële infectie leidt tot hersenschade, leerproblemen, gehoorverlies of de dood.

MeningitisMeningitis

• 12.500 gevallen virale meningitis in US/jaar

• 25.000 gevallen van bacteriële meningitis

• 2.200 mensen per jaar overlijden hieraan.

• 100 personen per jaar in Nederland

Schimmels, tuberculose en chemicaliën

Typen WBC bij meningitisTypen WBC bij meningitis

• Abces mixed glucose n

• Bacterieel neutrofielen glucose

• Viraal lymfocyten glucose n

• Schimmel lymfocyten glucose

• Tuberculose lymfocyten glucose

• Neurosyphilis lymfocyten glucose n

• Parasieten lymfocyten glucose n of

Typen WBC bij meningitisTypen WBC bij meningitis

• Abces mixed glucose n

• Bacterieel neutrofielen glucose

• Viraal lymfocyten glucose n

• Schimmel lymfocyten glucose

• Tuberculose lymfocyten glucose

• Neurosyphilis lymfocyten glucose n

• Parasieten lymfocyten glucose n of

MeningitisMeningitis

• Snel onderscheid maken tussen:– bacteriële (neutrofielen in liquor)– en– de anderen (lymfocyten in liquor)

– Pas op: bij een beginnende bacteriële meningitis kunnen eerst de lymfocyten verhoogd zijn!

Uitdaging Uitdaging Klinisch Chemisch LaboratoriumKlinisch Chemisch Laboratorium

• In liquor:• snel én betrouwbaar leukocyten tellen en

differentiëren.• 24 uur per dag • 7 dagen in de week • door alle dienstdoende analisten

Kan dat in het CITO pakket

én met routine apparatuur? JA

LH-750 hematologie LH-750 hematologie analyzeranalyzer

• CBC mode (counting blood cells)

• WBC mode (white bloodcell counting)

• Retic mode

WBC via volume, vorm en inhoud (drie dimensioneel)

Body Fluid mode

Body Fluid mode is de CBC mode met software om extra gevoelig te tellen.

Body Fluid mode en WBC mode gaan nog niet samen

Body Fluid mode geen differentiatie mogelijk (twee metingen?)

CBC instellingen op de LH 750 en het CBC instellingen op de LH 750 en het LISLIS

• 0,1 oo o 10^9/l LIS 0,1

• 0,01 o o 10^9/l LIS 0,1

10,0 /ul LIS 10,0

LH-750 in de normale CBC mode

Bij liquor-differentiatie geen instellingen veranderen

De gevoeligheid blijft een probleem

Liquordiff op de LH 750Liquordiff op de LH 750

De LH 750 heeft problemen met de allocatie van de WBC!

Liquordiff op de LH 750Liquordiff op de LH 750

Met plasma

50% v/v

WBC in liquor met en zonder WBC in liquor met en zonder plasmaplasma

Zonder plasma Met plasma (50% v/v)

RobustheidRobustheid

Plasma

50% v/v

AfkapwaardeAfkapwaarde

Afkapwaarde WBC in liquor

0

5

10

15

20

25

30

0 20 40 60 80 100 120

cellen per ul

V.C

. %

AfkapwaardeAfkapwaarde

Verdunning WBC telling LH 750 is 251 keer

Nodig 28 ul voor de differentiatie.

Bij 30 cellen/ul worden meer dan 500 cellen gedifferentieerd.

(30 * 28 is 840)

De telkamer telt dan totaal 90 cellen.

Interne variatieInterne variatie

Leuko Neutro Lymfo % Neut

Gemid. 314 233 56 74,5

S.D. 7,0 4,8 9,7 2,5

V.C. 2,2 2,1 17,2 3,3

Carry overCarry over

• Na blanco is de absolute carry over < 0,9%

(9000 cellen/ul)

Resultaten patientenResultaten patienten

• 50 liquoren onderzocht:

– 45 negatief• in de telkamer < 5 cellen/ul• LH 750 uitslag < 0,03 10^9/l • PA Lab.: alles bloedcellenarm

– 5 positief (allen neutrofielen als hoofdcomponent)

Positieve patiëntPositieve patiënt

50% plasma v/v

Telkamer 9600 cellen/µl

Patiënt 1Patiënt 1

PraktijkPraktijk

• Minimaal 1 ml liquor– 500 ul voor de telkamer, uitslag naar LIS– 500 ul centrifugeren (5 min bij 950 g)

• 400 ul afpitteren (naar de Chemie)

• 400 ul AB plasma erbij en mengen

• Blanco meting op de handmethode

• Een of twee maal meten op de LH 750

• Bij uitslag leukocyten > 0,03 diff naar LIS

Liquor hoeft niet meer CITO naar PA laboratorium

ConclusieConclusie

• Liquoren met verhoogde bloedcellen zijn routinematig in de WBC mode op de LH 750 te meten.

• Daarvoor de bloedcellen in plasma oplossen• Vooraf een blanco run.• Vanaf 30 cellen/ul is betrouwbare differentiatie mogelijk.• Een Cytospin voor de WBC diff is dan niet nodig• Body Fluid mode gekoppeld met de WBC mode kan de

detectielimiet verlagen. • Dit dient nader te worden onderzocht

Met dank aanMet dank aan

• Danny de Busser

• Henny Heijnen

• Martin Kan

• Barbara Leen

• Jan van Rijn

• Jolanda Werkhoven-Crezee