SPOT er maar mee !

“STIP naar SPOT”Redding voor Zorg en Lab apotheek?

1:Welke methodieken voor spot analyse!

-STIP methodiek die door bijna 100% bekend en toegepast wordt in de Lab apotheek wereld.

-Bekendheid, herkenbaarheid en vertrouwen geeft snelheid voor ontwikkeling en toepasbaarheid.

-Naast STIP voor serum onderzoek ook STIPdoa voor drugsonderzoek. Bestand van 500 stoffen geeft mogelijkheid om snelle grote stappen te maken.

-De chromatografie zou aangepast moeten worden voor lcms. Aanpassing heeft plaatsgevonden door fosfaatbuffer te vervangen door de ammoniumformiaat buffer met formic acid.

-Dit is gelukt met behoud van spectrum en retentietijd bestand van STIP.

-Er is wel nieuwe SPOT chromatografie ontwikkeld naast de STIP en STIPdoa chromatografie.

-Echter wel bestaand “vooroorlogse “lichrospher kolom.

2: Welke extractie voor SPOT analyse :

-SPE extractie met 100% recoveries , selectiviteit , zeer goede reproduceerbaarheid en robuustheid.

-Deze voordelen biedt mogelijkheiden voor labs met traditionele HPLC. bv .anti epileptica, concentraties van 1mg/l

-Of labs die door willen groeien naar UHPLC. bv Clozapines , 250-1000 ug/l , of naar ………………

-LCMS die waarschijnlijk noodzakelijk is gezien kleine hoeveelheid monster en lage concentraties , haloperidol, 1-10 ug/l

-Biedt perspectief voor automatisering en high-through put?????

-Een eenvoudige gestandaardiseerde extractie voor het hele STIP bestand wat bestaat uit ? , ja noem maar iets.

3: Hoe en waarmee te beginnen .

-Ons enthousiasme moest opgewekt worden door resultaten en niet alleen door de woorden van de heer Jac Bloedspot.

-Komen geneesmiddelen vrij uit bloedspot?

-Hoeveel tijd kost dit?

-Hoe hoog recovery ?

-Reproduceerbaar?

-Ontleding op bloedspot

-Hoe gedraagt bepaling zich na extractie uit bloedspot(extra A1)

-Methodiek: SPOTS gespiked met STIP testmengsel worden op bovenstaand punten Onderzocht, let wel, het traditionele Whatman en Ahlstrom.

-Het was en is nog steeds wachten op het goede materiaal of is dat er al ??

Chromatogram standaard en A1 en A2

A1 bloedspot ,Storing voorin minder door spoelstap extra!

StandaardLaatste piek is I.St

A2 bloedspot. Kleine piek voorinIs ontleding Chloorpromazine

Oplossen in buffer pH:3 in ultra sonic , dan spe extractieResultaten A1 werden uitgezet t.o.v de tijd in US.

Oplossen in buffer pH:3 in ultra sonic , dan spe extractieResultaten A2 werden uitgezet t.o.v de tijd in US.

Chloorpromazine lager door ontleding van stock oplossing en spikes.GEDACHTE?

Spots A1 worden geanalyseerd van eind 2010-half 2011

Onderste lijnen zijn inweeg : laag gewicht laag conc

Spots A2 worden geanalyseerd van eind 2010-half 2011

Onderste lijnen zijn inweeg : laag gewicht laag conc

Chloorpromazine ontleedt

SPOT en STIP………….

-Door de noodzakelijke aanpassingen lijkt spot tox screening mogelijk.Door UHPLC en LCMS kan terug gegaan worden naar de ca 20 ul bloed

-Met de Shimadzu LCMS 8040 met UHPLC en PDA lijkt en de STIP software is screening op DAD-spectrum ,retentietijd met een extra bevestiging door de moedermassa eenvoudig .

-Traditionele STIP ca 25 ug/l STIPums gaat naar 5 ug/l

-De vraag of iemand en bepaald geneesmiddel gebruikt heeft is snel onderzocht met STIPums.

Clozapine en metaboliet van Spot met STIPu

Exel file patienten ,gemeten t.o.v. Serum standaard

dd kkgt gem ZanobST ZanobCO komjen spruyt koes henke Komjen Opmerking

ther dcl 433 cl 502 dcl 90 cl 600 dcl 150 cl 1000 dcl 233 cl 372 dcl 171 cl 400 dcl 256 cl 298 dcl 316 cl 267 dcl260 cl379 20 ul in 3 ml Ist SPotsetc.

  190 180 90 600 150 1000 233 372 171 400 256 298 316 267 260 379 oplossen 110 ul , 100 ul inj.

  hght/100 hght/100                              

                                   

                                   

230312 204 190 80 536 126 835                 161 310  

        576                     166 308  

                              176 321  

                              130 349  

                              170 366  

                              175 372  

30412 153 149 120 561 181 982     202 392 337 312        

30412 126 126 106 548 173 1009     236 436 329 382         min 200 ul lcms

                  178 318 341 393          

                  220 417 265 281          

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

                                   

letop counts counts                              

GEM 161 155 102 555 160 942 ##### ###### 209 391 318 342 ###### ##### 163 338  

%stdev 20,1 17,1 18,4 2,5 16,2 7,6 ##### ###### 12,6 11,2 12,1 15,8 ###### ##### 6,1 8,7  

%gehalt85 86 113 93 107 94 ##### ###### 122 98 124 115 ###### ##### 63 89  

Let op: bloedspots bepaald tov 20 ul serum.

Anti-epileptica spots ook met SPOT chromatografie

Exel file patienten gemeten t.o.v. serum standaard

Pys-1 spots op lcms: Geen STIPums maar TDM/lcms

Psychofarmica en metabolieten op spots niveau met STIPums

TOXEN:Geen spot maar op spot niveau, met STIPums, paroxetine, alprazolamen Ist trimipramine

MDMA en spoor midazolam met I.St, geen spot maar wel spotniveau

Stand van zaken “SPOT er maar mee”

-Stoffen vrijmaken uit spot mbv buffer pH:3 gaat prima, Temp 40C gaat sneller

-Spe extractie werkt prima, het oplossen van spot is tijdrovende stap. Optimalisatie door kleinere spe kolommen of zelfs in systeem Tijdwinst als a1 of a2 fase direct in lcms wordt geinjecteerd.

-Traditionele chromatografie goed bruikbaar voor de hogere concentraties. Hoe lagere de concentraties hoe hoger de eisen voor chromatografie en detectie.

-Ieder lab kan SPOT analyses met HPLC/Dad uitvoeren, AE/ schimmel/HIV etc Het lab kan doorgroeien in de analyse met behoud van chromatografie

-TDM en toxicologie lijken mogelijk -ZANOB zou monsters kunnen testen uit ZKH, KCL zal niet graag meewerken !!!

-Testen op dit moment , AE en Clozapines, moeten nog wel spots zelfs maken.

-Patienten die maandelijks bloed geven om zetten naar 1x per maand bloedbuis andere maanden als bloedspot…..Jac rekent kostenbesparing uit !

Voordelen

• De verhalen van Jac Bloedspot hebben toekomst wat de ZANOB betreft.

• Analytisch is het te doen op allerlei gebied• TDM, toxicologie,forensisch, Farmaceutical• ZANOB kan promoten door databank• Shimadzu die een leen LCMS geplaatst hebben• Dit in combi met Spots voor posters

Nadelen

• Een hele cultuur omslag op een KCL• Waar ze niet op zitten te wachten(centjes)• Steun van Apotheker (project matig!)• Steun van Zorg(hoe overtuigen!)• Investering , tijd, geld, enthousiasme…• Jac zijn spotlab………..• Nieuw dragermateriaal?

ACTIES……………..

• Opbouwen bestand met analyses voor lab:• SPOT chromatografie(traditionele TDM)• STIP/STIPdoa chromatografie(TOX+forensic)• SPOTums chromatografie(TDM lcms)• Steun van hele groep om bloedspots te krijgen• “Bloedspotters” die spots maakt.• BLOEDSPOT lab die analyses doet.

Eindresultaat 2013

“SPOTS meten is BLOEDBUIZEN vergeten”