âESKÁSPOLEâNOSTPRO BIOCHEMIIAMOLEKULÁRNÍBIOLOGII · Z PRÁVY SPOLEČNOSTI 64 Bulletin 3...
37
âESKÁ SPOLEâNOST PRO BIOCHEMII A MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII ROâNÍK 32 (2004), âÍSLO 3 ISSN 1211-2526 3
Transcript of âESKÁSPOLEâNOSTPRO BIOCHEMIIAMOLEKULÁRNÍBIOLOGII · Z PRÁVY SPOLEČNOSTI 64 Bulletin 3...
âESKÁ SPOLEâNOST PROBIOCHEMII A MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII
R O â N Í K 3 2 ( 2 0 0 4 ) , â Í S L O 3
ISSN 1211-25263
BULLETINČ E S K É S P O L E Č N O S T I P RO
B I O C H E M I I A M O L E K U L Á R N Í B I O L O G I I
http://CSBMB.vscht.cz
TOMISLAV BARTH - VÝKONNÝ REDAKTOR
Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, Flemingovo nám. 2, 166 10 Praha 6
IRENA KRUMLOVÁ- ZÁSTUPCE VÝKONNÉHO REDAKTORA
Česká společnost pro biochemii a molekulární biologii, Kladenská 48,
160 00 Praha 6, tel. 224 355 166
nebo Ústav biochemie a mikrobiologie VŠCHT, 166 28 Praha 6,Technická 5
tel.: 224 355 166, fax: 224 355 167, e-mail <[email protected]>
REDAKČNÍ RADA
T. Barth, J. Barthová, I. Krumlová,V. Kašička
Příspěvky na disketě 3,5“, zpracované v textovém procesoru Word, zasílejte, spolu s vytištěným textem,
kterémukoli z redaktorů nebo do sekretariátu společnosti. Prosíme, abyste do textu nemontovali
ani obrázky, ani tabulky. Připojte je v originále, případně na disketě ve zvláštních souborech,
v textu označte, prosím, jen jejich umístění.
Adresa ČSBMB: Kladenská 48, 160 00 Praha 6
tel.: 235 360 057 – záznamník
ISSN 1211-2526
http://CSBMB.vscht.cz
http://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.czhttp://CSBMB.vscht.cz
ZPRÁVY SPOLEČNOSTI
Oznámení. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64
Vznik nové sekce . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
J. Káš: XIX. Biochemický sjezd. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66
Z. Dvořák: Primary cultures of human hepatocytes as a model for the study
of biological activity of natural compounds . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68
ODBORNÉ ČLÁNKY
M. Flegel a L. Sedlák: Carbetocin, Carba-analog oxytocinu
Vývoj, výroba a použití. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 70
ZPRÁVY ZE SEKCÍ
Peptidová sekce
J. Šebestík: Summer Neuropeptides 2004 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
J. Slaninová: 3. Mezinárodní a 28. Evropské peptidové symposium . . . . . . . . . . . 77
L. Žáková: 3. Mezinárodní a 28. Evropské peptidové symposium . . . . . . . . . . . . . 80
A. Ciencialová: 28. EPS a 3. IPS v Praze 2004 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
Gratulace pro L. Žákovou . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
Sekce separačních metod
V. Kašička: Zpráva o symposiu ITP 2004. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
Proteomická sekce
H. Kovářová: 1. Česká proteomická konference, Mělník, 15.–16. 6. 2004 . . . . . . 86
RŮZNÉ
Biosafety – nová pracovní skupina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88
Z.Tuháčková: 12th International Conference on Second Messengers
and Phosphoproteins. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89
Rada Učené společnosti ČR: Veřejná přednáška předsedkyně AV ČR . . . . . . . . 92
Pozvánka na IX. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biochemiků . . . . 93
Nabídka nové publikace. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94
FEBS Congress. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
O B S A H
ZP R ÁV Y S P O L E Č N O S T I
64 � Bulletin 3
Kolegyně a kolegové,
nedávno provedená analýza ukázala, že naši biochemici málo využívají možností čerpat finanční prostředky z různých, zejména evropských, organizací. Jsou to např. krátkodobé a dlouhodobé fellowshipy, podpora pořádání workshopů a konferencí a i různé typugrantů (cestovních aj.). O všech možnostech se můžete informovat na internetových stránkách těchto organizací:
FEBS http://www.febs.unibe.org
EMBO http://www.embo.org
ESF http://www.esf.org
IUBMB http://www.iubmb.unibe.ch
EU http://www.tc.cas.cz ([email protected])
Václav Pačes
VZ N I K N OV É S E K C E
Bulletin 3 � 65
V září t.r. byla založena sekce bioinformatiky (FOBIA, Free & OpenBioinformatics Association) naší Společnosti. Ustavení sekce je výsled-kem již déletrvající spolupráce nejprve několika, dnes již mnoha bioinformatiků a lidí bioinformatiku používajících. Sekce má umožnit sdílení zkušeností, znalostí a zdrojů v oblasti bioinformatiky.
Zájemci o činnost této sekce se mohou spojit s výborem prostřednic-tvím internetu přes adresu
http://fobia.img.cas.cz.Členství předpokládá aktivní účast a přednesení odborné
přednášky. Vstupní přednáška má sloužit k tomu, aby se členové vzájemně poznali a věděli o svých odborných zaměřeních a zájmech.Součástí činnosti sekce je i stálá internetová konference a zabezpe-čování přednášek.
XIX. BI O C H E M I C K Ý S J E Z D
Již tradičně společný sjezd České společnosti pro biochemii a molekulární biologii a Slovenské spoločnosti pre bioché-miu a molekulárnu biológiu se konal v nád-herném prostředí Uměleckého centra Uni-verzity Palackého v Olomouci ve dnech31.srpna – 3.září 2004.Všichni účastníci sjez-du vysoce ocenili jak vědecký, tak společen-ský program připravený organizačním výborem pod vedením vedoucího katedrybiochemie UP p. Prof. RNDr. Pavla Peče,CSc. Podporu sjezdu vyjádřili jak představi-telé University Palackého, tak kraje i městaOlomouce, kteří přijali místo v čestnémpředsednictvu sjezdu a přednesli zdravicepři jeho slavnostním zahájení. Slavnostní atmosféru zahájení sjezdu umocnilo uvítáníčestných hostů sjezdu i plenární přednáškypozvaných zahraničních hostů.
Vědecký program sjezdu byl zahájentřemi plenárními přednáškami v anglickémjazyce. První přednášku přednesl Walter Neupert, delegát EMBO (Ludwig MaxmiliansUniversität Műnchen) na téma „Biogenesemitochondrií: cesty a mechanismy zahrnutév importu bílkovin“. Druhá přednáška Jean-Daniela Tissota, předsedy Švýcarské proteo-mické společnosti nesla název „Proteomika:Klinické perspektivy“. Třetí plenární před-nášku přednesl nositel Koštířovy ceny Zde-něk Dvořák a týkala se kultur lidských hepa-tocytů používaných jako model ke studiu biologické aktivity přírodních látek.
Další program byl tematicky rozdělendo osmi přednáškových sekcí (Proteomikaa enzymologie, Biochemie sacharidů a lipidů,Molekulární procesy v buňce, regulace a signalizace, Bioenergetika, biomembránya fotosyntéza, Biotechnologie a potravinář-ská biochemie, Klinická biochemie, pathobi-ochemie a immunochemie, Biochemie pří-rodních látek a xenobiochemie, Bioinforma-tika, strukturní biologie a proteinovéinženýrství).V těchto sekcích bylo přednese-
no 65 půlhodinových přednášek. Přednáško-vý program byl doplněn 132 plakátovými sděleními, které byly vystaveny po celou dobu sjezdu. Z posterů nominovanýchv rámci jednotlivých sekcí byly vyhodnocenytři nejlepší postery sjezdu.Vyhlášení výsled-ků této soutěže se uskutečnilo během spo-lečenského večera a vítězové byli odměněnidárky od sponzorů.
V programu sjezdu bylo tedy presento-váno na 200 původních vědeckých sdělení,které přinesly obraz o současné vysokéúrovni české a slovenské biochemie a mole-kulární biologie.Abstrakta všech těchto sdě-lení v anglickém jazyce byla vydána Vydava-telstvím University Palackého pod názvem„Acta UPOL Facultas Rerum NaturaliumChemica (2004), Vol. 43S“. Záznam jednánísjezdu je tedy k disposici nejen českýma slovenským biochemikům, ale i zahranič-ním spolupracovníků a ostatním zájemcům.
Při hodnocení vědeckého programusjezdu nesmíme zapomenout na presentacefirem, které ve valné většině seznámili přítomné s novou laboratorní instrumentacía novými technikami. O tyto přednášky bylvelký zájem a je třeba poděkovat pořadate-lům, že tento nový seriál přednášek do programu zařadili. Účast více jak 40 firema institucí (adresy zúčastněných jsou vedenyve sjezdových materiálech) presentačnímistánky po celou dobu trvání sjezdu byla nesporným přínosem pro účastníky i vysta-vovatele. Byl čas na diskusi a podrobnější seznámení s vystavovanými přístroji, pro-dukty i firemní literaturou i na navázání nových kontaktů. Ocenit je třeba i ochotuřady podniků, zejména potravinářských, zpří-jemnit účastníkům jejich jednání svými chut-nými výrobky.
Jak již bylo v úvodu naznačeno byloprostředí Uměleckého centra Univerzity Palackého ideálním místem nejen pro sjez-dová jednání (auditorium pro plenární zase-
66 � Bulletin 3
dání, dostatek sálů pro jednání v souběžnýchsekcích, dostatek prostoru pro plakátovásdělení a firemní presentace, sociální zázemí,atd.), ale i pro společenské akce (Kaple Božího těla pro koncert, atrium pro před-stavení barokní opery, atrium se zahradoupro společenský večer). Organizátoři téžpřipravili pro účastníky sjezdu výběr ze třípůldenních výletů (Loštice, Litovel a Kromě-říž). Perfektně připravená historická infor-mace o Olomouci a o uvedených třech vý-letních místech, jež byla součástí sjezdovýchmateriálů, umožnila všem rozšířit si své zna-losti i mimo oblast biochemie a molekulárníbiologie a zamilovat si tuto část Moravy.
Příprava sjezdu však neobnáší jen vědecký a kulturní program, ale i mnohomravenčí práce se zajištěním sjezdových materálů, zajištěním ubytování, stravovánía dalších činností na jejichž realizaci se podí-leli členové Konferenčního servisu UP.
Závěrem bych rád, snad i jménemostatních asi 250 účastníků XIX. Biochemic-kého sjezdu, poděkoval všem, kteří se na organizaci sjezdu podíleli za skvělý pro-fesní zážitek, přijemné společenské prostře-dí a vytvoření ideálních podmínek pro krás-né prožití čtyř hezkých dnů v Olomoucia okolí.
Jan Káš
Bulletin 3 � 67
DR Ž I T E L C E N Y J . V. KO Š T Í Ř E
XIX. BI O C H E M I C K Ý S J E Z D
PR I M A RY C U LT U R E S O F H U M A N H E PATO C Y T E S
A S A M O D E L F O R T H E S T U DY O F B I O L O G I C A L
AC T I V I T Y O F N AT U R A L C O M P O U N D S
Zdeněk Dvořák
Institute of Medical Chemistry and Biochemistry, Faculty of Medicine, Palacky University Olomouc, Hnevotinska 3,
77515 Olomouc, Czech Republic
E-mail: [email protected]
The biological effects of natural sub-stances are the object of multidisciplinaryinterest from time immemorial. Followingthe boom of synthesis of new compounds,drugs in particular, the attention is drawnagain to substances of natural origin. Thesesubstances are nowadays used in both pre-vention and therapy for variety of diseases.The knowledge on biotransformation ofa particular compound is an indispensablepre-requisite for the approval of the drug inhuman therapy, with regard to drug absorp-tion, organ distribution, metabolism and eli-mination (ADME) but also with regard toadverse effects of the drug such as interac-tion with bio-macromolecules, intrinsic toxi-city etc. Primary cultures of human hepato-cytes are considered to be one of the mostsuitable models for the studies mentionedabove.
This presentation demonstrates theuse of primary cultures of human hepatocy-tes (PCHH) as a model for the study of bi-ological activity of natural substances.As thefirst group of studied compounds, we selec-ted flavonolignans from silymarin, a fractionfrom Silybum marianum seeds.The cytotoxi-city of studied flavonolignans together withtheir cytoprotectivity against the cellular da-mage by model toxins were evaluated usingthe PCHH model. All compounds tested
exhibited dose-dependent cytoprotectivityagainst oxidative damage to the cells by car-bon tetrachloride and allyl alcohol, whilethey were ineffective against drug-induceddamage by paracetamol and metabolic da-mage by D-galactosamine. The feasible me-chanism of the protection observed couldbe free radicals quenching by tested flavo-nolignans. Furthermore, the effects of testedflavonolignans on specific activities of cyto-chrome P450 were studied in isolated hu-man liver microsomes, a sub-cellular fracti-on, which consists of endoplasmatic reticu-lum fragments where P450 enzymes areanchored. The inhibition of cytochromeP450 isoforms CYP2D6, 2E1 and 3A4 by si-lybine, silychristine and silydianine was ob-served, where IC50 values were in micromo-lar range. In the second group of naturalsubstances, tropolone alkaloids from Colchi-cum autumnale, the effect of drug metaboli-zing enzymes was investigated.The effect ofcolchicine and its derivatives on the expres-sion, regulation and activity of cytochromeP450 was tested in the PCHH model. Tro-polone alkaloids showing no antimitotic ac-tivity (colchicein) did not affect CYP1A2,2C9, 2C19, 2E1, and 3A4 enzymes expressi-on and activity in the PCHH model. On thecontrary, potent antimitotic agent colchicinestrongly inhibited both basal and inducible
68 � Bulletin 3
expression of CYP2B6, 2C8/9 and 3A4 en-zymes at the level of protein and mRNAcontents. Additionally, it was demonstratedthat the suppression of particular CYPs wasdue to the disruption of the regulatory cas-cade cytochrome P450 – pregnane X recep-tor/constitutive androstane receptor – glu-cocorticoid receptor (GR).The transcriptio-nal inhibition of GR activity andconsequently the down-regulation of recep-tors PXR and CAR and the targetP450s suppression were observed as the re-sult of microtubules depolymeration inPCHH. In two distinct models i.e. PCHHand human embryonic kidney cells(HEK293) transiently transfected with a gre-en fluorescent protein – GR chimera con-struct, the inhibition of hormone-dependentnucleo-cytoplasmic trafficking of GR by mic-rotubules disarray was confirmed. The re-
sults reached further suggest, that GR inac-tivation by microtubule disrupting com-pounds is mediated by c-jun N-terminal ki-nase, which is concomitantly activated bythese compounds.
In conclusion, the experimental modelof primary cultures of human hepatocytesproved its worth in studies of cytotoxicity,cytoprotectivity, enzyme kinetics, cell signali-zation, and interactions in biological systemswhen investigating activity of substances ofplant origin.
AcknowledgementThis research was supported by grant MSM151100003 from the Ministry of Education,Youth and Sports of the Czech Republic,and by grant GACR 303/04/P074 from theGrant Agency of the Czech Republic.
Bulletin 3 � 69
OD B O R N É Č L Á N K Y
Krátce po zahájení synthetické výrobyoxytocinu v roce 1959 v n. p. Léčiva, bylv rámci studií struktury a účinku v laborato-ři peptidů prof. Rudingera na Ústavu orga-nické chemie a biochemie ČSAV studovánjeden z jeho prvních „analogů“ 2-O-metylty-rosinoxytocin1. Hydroxylová skupina na aro-matickém jádře tyrosinu byla jedna z funkč-ních skupin, které upoutaly pozornost na samém počátku výzkumu a odpovídajícíderiváty tyrosinu (metyl a etyl ether) bylypoužity pro přípravu analogů modifikova-ných v poloze 2 molekuly oxytocinu .
V roce 1966 byl „Metyloxytocinový výrobní předpis“ převzat v n. p. Léčiva a léči-vá látka byla vyráběna v laboratoři peptidů n. p. Léčiva do devadesátých let minuléhostoletí.
Hlavní výhoda Metyloxytocinu při po-užití v porodnictví byla jeho relativně nízkáuterotonická aktivita (viz tab. 1). Při použitípřírodního oxytocinu u dlouhého porodudochází při intenzivní svalové práci ke sníže-ní pH krve a k omezení schopnosti hemog-lobinu přenášet kyslík do mozku matkyi plodu což v důsledcích může vézt k anoxiia poškození mozku. 2
Tento problém nebyl pozorován u me-tyloxytocinu a mezi laborantkami ve fertil-ním věku v Rudingerově laboratoři se říkalo:„Dámy chcete-li mít zdravé a chytré dítě,
žádejte při porodu náš Metyloxytocin a bez-cenné padělky odmítejte“.
Další výzkum topografie oxytocinu sezaměřil na jeho dvacetičlenný cyklus uzavře-ný disulfidickým můstkem. Isosterní záměnaatomu (ů) síry za methylenovou skupinuvedla k tzv. „karba“ analogům. Nejprve bylypřipraveny deamino-karba1 analogy, pozdějideamino-karba6 a teprve později byly připra-veny syntheticky obtížněji přístupné aminokarba1 a karba6 peptidy. Při záměně obou sir-ných atomů u látek s disulfidickým můstkembyly získány také „dikarba“ analogy peptidů3.
Logickým krokem při výzkumu struktu-ra – účinek byla kombinace strukturníchzměn a hledámí vhodných „kooperativních“modifikací. Realizace strukturních změn vycházela mimo jiné ze studia působení en-zymů exo- a endoproteáz případně oxidore-duktáz na molekulu oxytocinu. Obecně lzeříci, že všechny modifikace struktury pepti-du neproteinogenními aminokyselinami,modifikace funkčních skupin a tvaru (kon-formace) molekuly vedly k zpomalení enzy-matického štěpení a k získání látek s delší – protrahovanou biologickou aktivitou.Strukturní změny se na profilu různých biologických účinků projevovaly odlišnýmzpůsobem, což vedlo k disociaci či eliminaciněkteré z aktivit. Interpretace získaných vý-sledků byla ovšem dosti obtížná s ohledem
CA R B E TO C I N (CAS 37025-55-1) ,CA R B A-A N A L O G OX Y TO C I N U.VÝ VO J , V Ý RO B A A P O U Ž I T Í .
M. Flegela a L. Sedlákb
a PolyPeptide Laboratories spol s r.o., 1027 Praha 10 Radiová 1b Biopharm, Výzkumný ústav biopharmacie a veterinárních léčiv, a.s., 25449 Jílové u Prahy
70 � Bulletin 3
na složitý model receptoru a jeho okolí a také s ohledem na obtížně reprodukova-telné výsledky biologických aktivit navíc zatížené relativně vysokými statistickými odchylkami.
Deamino-karba1-oxytocin (2 strukturnízměny)4 a deamino-karba1-2-O-metyltyrosi-noxytocin (3 strukturní změny)5 se odsebe liší zejména v uterotonické aktivitěa v jejím charakteru – protrahovanosti účinku. (viz tab. 1)
Příprava Carbetocinu byla vypracovánaDr. Joštem a spolupracovníky v laboratořipeptidů v Ústavu organické chemie a bio-chemie ČSAV v šedesátých letech minuléhostoletí. Na obr.1 je schematicky znázorněnajeho syntheza v roztoku.
Fragment oxytocinu –heptapeptid amid byl nejprve prodloužen derivátem Z-Tyr(Me)-N3.
V následné redukci sodíkem v kapalnémamoniaku byly odštěpeny chránící skupinybenzylového typu a thiolová skupina cystei-nu byla pak alkylována tert.butyl esterem 4-jodmáselné kyseliny. Po odštěpení tertbu-tylové esterové skupiny byl vytvořen karbamůstek spojením uvolněné karboxylovéa primární aminoskupiny N-ethyl-5-fenyliso-oxazolium-3_-sulfonátem.
Obr. 2. V˘robní postup vyvinut˘ pro v˘robu Carbeto-cin v n.p. Léãiva (1979)
Fragment oxytocinu byl zbaven chrání-cích skupin a etylester of 4-brommáselnékyseliny byl použit pro alkylaci cysteinu.Po hydrolýze esteru byl připojen zbytekNps-Tyr(Me) methodou aktivních esterů,karba můstek byl uzavřen dicyklohexylkar-bodiimidem a produkt byl vyčistěn gelovoufiltrací. S ohledem na tvorbu dimeru jakohlavního vedlejšího produktu poskytl tentozpůsob čištění dobré výsledky.
Později v roce 1987 byl tento způsob vý-roby dále modifikován. Oxytocinový hepta-peptidamid byl připravován synthesou v pevnéfázi na Merrifieldově polymeru a Boc-Tyr(Me)byl připojován pomocí in situ připravenéhoN-hydroxysukcinimidového aktivního esteru.
Biologické activity analogů oxytocinu3
Oxytocin 486 450 507 533 2.7
Metyloxytocin pA26.7 40 8 67 0.01
Deamino-803 975 541 19
oxytocin
Deaminometyl-Inhib. x inhib x
oxytocin
Deaminokarba1-60 125 84 1.8
oxytocin
Deaminokarba1-10 40 x 67 0.9
metyloxytocin
*zkrácené označení analogů
Peptid*
Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-NH2
Z-Tyr(Me)-N3
Z-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-NH2
1. Na/NH3, I-(CH2)3-CO2-But
2. CF3COOH
Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2
HOOC-CH2-CH2-CH2
N-ethyl-5-phenylisooxazolium-3‘-sulfonate
Carbetocin
Obr. 1 Pfiíprava Carbetocinu v roztoku z roku 1964
Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-NH2
1. Na/NH3, Br-(CH2)3-CO2-Et
2.1N NaOH, Dowex 50W,10%py
Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2
HOOC-CH2-CH2-CH2
Nps-Tyr(Me)-ONp, HOBt
Nps-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2
1. 2N HCl/ether
2.DCC,HOBt,
triethylamin/py
3.Sephadex G15
Carbetocin
HOOC-CH2-CH2-CH2
Biologické účinky
Uterotonická
in vitro in vivo
Depre-sorická
Galakto-gogická
(in vitro)
Antidiu-retická
Bulletin 3 � 71
V sedmdesátých letech byla prodánaČeskoslovenská licence na výrobu Carbeto-cinu firmě Ferring. Synthesa látky byla vyvi-nuta ve Švédském závodě firmy v Malmöa látka byla relativně krátkou dobu vyráběnapod názvem Duratocin postupem v roztoku.Zájem firmy Ferring o veterinární přípravkybyl však omezený.
V roce 1993 byla česká peptidová výro-ba převedena do nově vzniklé firmy Ferring-Léčiva, kde byl v roce 1997 zahájen vývojnové synthesy Carbetocinu podle pravidelrespektujících zásady správné výrobní praxe.Výroba podle tohoto postupu, jež je sou-částí nové registrační dokumentace Carbe-tocinu6 byla zahájena v PolyPeptide Labora-tories spol s r.o v roce 1998-1999.
Příprava klíčového derivátu cysteinu(Boc-Cys(C3-COOAll)-OH) předchází synt-hesu v pevné fázi.
Chráněný (Boc, Allyl) oktapeptid bylpřipraven na Merrifieldově pryskyřici.Z peptidu vázaného na polymerní nosič bylanejprve odštěpena allylesterová skupinaa po eliminaci aminokoncové Boc skupinybyla provedena cyklizace přímo na pryskyři-ci za vzniku karba můstku. Hotovým cyklic-ký peptid byl pak odštěpen v tlakové nádo-bě plynným amoniakem z polymerního nosi-če a vyčistěn.
Výroba Carbetocinu se v současnostiprovádí v PolyPeptide Laboratories spols r.o. podle pravidel správné výrobní praxe.Součástí dokumentace je velmi důkladný vý-
Obr 3. Postup v˘roby Carbetocinu v PolyPeptide Laboratories spol s r.o. ( 1999)6.
72 � Bulletin 3
robní předpis a analytická dokumentace. By-ly isolovány a identifikovány všechny pod-statnější vedlejší produkty. Příklad studia jed-noho z nich D-Asn5Carbetocinu7 je pro ilus-traci uveden na obr. 4.
Šipka označuje vznikající D-Asn diaste-reomerní peptid. Kinetika jeho vzniku je vi-dět na obrázku dole.
I pokles koncentrace Carbetocinu,II vznik [D-Asn5]Carbetocinu,III vznik [D-Asp5]Carbetocinu-hydrolýzaamidu,IV vznik [D-Glu4, D-Asp5]Carbetocinu hyd-rolýzou amidu u Gln a Asn.
Snadná inverze konfigurace L-Asn naD-Asn a vysoká stabilita D diastereomerní-ho peptidu naznačuje, že tato reakce by mo-hla probíhat také spontáně či enzymatickýmpůsobením isomeráz za podmínek in vivoa umožňovat tak biologickou inaktivaci oxy-tocinových a vasopresinových látek. Je dob-ře známo, že zbytek Asn v molekule neuro-hypofysárních hormonů je značně citlivýna strukturní modifikace a změna v této oblasti molekuly hormonů vede téměřvždy k eliminaci biologických účinků.
Čistota Carbetocinu vyráběnéhopro veterinární potřebu jako léčivá látka mu-sí být vyšší než 95% (dle HPLC). Látka jepoužívána ve veterinární medicině jako vý-hodné uterotonikum v injekční formě s kon-centací 70 μg/ml pod názvem Depotocin.Firma VetCom Gmbh vlastní registracepro jeho použití ve všech státech Evropskéunie.
V současnosti již také proběhla jeho re-gistrace v Kanadě (Ferring ) v porodnickýchindikacích lidské mediciny.
Uterotonika Oxytocin, Carbetocin a jiná jsou látky hormonální povahy stimulu-jící tonus a kontraktilitu dělohy. Používají se v terapii a profylaxi gynekologických po-ruch (slabé kontrakce dělohy, atonie dělohy, protrahované porody, retence se-kundin, patologický obsah dělohy, puer-perální záněty dělohy, urychlení involuce dělohy, MMA syndrom, vybavení reflexuejekce mléka).
V následujících tabulkách jsou pre-zentovány výsledky použití Carbetocinu (Depotocinu) inj. v různých indikačních oblastech.
Obr. 4. Tvorba [D-Asn5]Carbetocinu pfii pH roztoku>7
Tab. 2.: Biotechnologické užití přípravku Depotocin inj. ad us. vet. u krav
ošetřeno/dávka
počet zvířat
puerperiumbez
komplik.
zabřezlo po inseminaci
I. II. III.
průměr-ná SP (dny)
průměr-ný inter-val (dny)
Depotocin 348 76.1 % 65.2 26.1 2.9 76.9 62.0
5 ml
Kontrola 303 64.4 % 63.0 26.1 2.6 79.7 66.6
puerperium zabřezlo poošetření/dávka počet zvířat bez komplikací I. inseminaci
(%) (%)
Depotocin 3 ml 804 88.7 73.8
Kontrola 631 99.8 59.1
početvyléčeno prů- prů-
indikace dávka léče-bez zabřezlo měrná měrný
nýchkomplik. (%) SP interval
(%) (dny) (dny)
Retence 2.5 40 55 85.9 82.4 67.1
sekundin
Endometritis 5 38 63.2 76.4 101.6 64.4
puer. infekce
Patologický 5 80 75.0 75.0 80.3 69.5
obsah dělohy
Tab. 3:Terapeutické užití přípravku Depotocin inj. ad us. vet. u krav
Tab.4.: Biotechnologické užití přípravku Depotocin inj. ad us. vet. u prasnic
Bulletin 3 � 73
Je zřejmé, že v případě zvýšeného vý-skytu porodních a poporodních komplikací
hospodářských zvířat může Carbetocin
pomoci při řešení reprodukčních potíží.
Jeho výroba jako léčivé látky v PolyPeptide
Laboratories spol. s r.o má vzrůstající ten-
denci, což svědčí mimo jiné o přednostech
tohoto přípravku a o tom, že se Carbetocin
již velmi dobře osvědčil ve veterinární praxi.
Lze, jak doufáme, očekávat stálý vzrůst jeho
používání a tím také nárůst jeho výroby.
LITERATURA:
1. Jošt K., Rudinger J., Šorm F.: Coll. Czech. Chem. Commun 28,1706 (1963)2. Hodr J., Brotánek V., Štembera Z. K., Česk. Gynekol., 33, 127, (1968)3. Jošt K., v knize: Handbook of Neurohypophyseal Hormone Analogues Vol I, Part 2 str. 144,
CRC Press Inc. 1987 (editoři K. Jošt, M. Lebl, F. Brtník).4. Rudinger J., Jošt K., : Experientia 20, 570, (1964).5. Frič I., Kodiček M., Procházka Z., Jošt K., Bláha K.: Coll. Czech. Chem. Commun, 39, 1290,
(1974).6. Firemní dokumentace PolyPeptide Laboratories.7. Pánek Z., Pavlik M., Flegel M., v knize: Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis
str. 365 Mayflower Scientific 1998 (editor R. Epton).8. Sedláková J., Sedlák L.,: Info 1/2004 str. 12 Biopharm, Výzkumný ústav biopharmacie
a veterinárních léčiv.
MMA syndrom 1.5 25 72 16 12
Agalakcie 3.0 46 60.9 13.0 26.1
Protrahovaný porod 3.0 18 94.4 5.6 0
Retence mléka 1.5 30 100 0 0
Tab. 5:Terapeutické užití přípravku Depotocin inj. ad us. vet. u prasnic
indikacedávka
mlpočetzvířat
vyléčeno (%)
s komp-lik.
bezkomplik.
nevylé-čeno(%)
74 � Bulletin 3
Sekce
peptidováBiologicky aktivní peptidy
ZP R ÁV Y Z E S E K C Í
V červenci roku 2004 proběhla konfe-rence „Letní neuropeptidy“ v Miami-Beach,USA. Byly zde diskutovány problémyod ukládání amyloidních plaků v CNS, neu-roprotektivních vlastností různých neuro-peptidů a proteinů, regulace exprese těchtopeptidů a peptidových receptorů. Přidruže-ná byla také konference o vlivu neuropepti-dů na epilepsii a autismus.
Dále se pokusím vybrat některé výsled-ky z různých prezentací, zájemce o bližší po-rozumění odkazuji na časopis J. Mol. Neu-rosci., ve kterém by měl vyjít seznam ab-straktů tohoto mini-symposia.
Nejprve se zmíním o proteinech a pep-tidech podléhajících agregaci, jako jsou Abeta a alfa-synuklein. Bylo zdůrazněno,že za toxicitu neodpovídají samotné amylo-idní plaky, ale tzv. protofibrily – oligomeryv počátečních stádiích aggregace. Při experi-mentech s alfa-synukleinem autoři (Lashuel,H.A.) prokázali pórovou hypotézu poškoze-ní umělých micel naplněných fluorescenčnímbarvivem, t.j. barvivo mohlo opouštět mice-ly jen když mělo určitou velikost což odpo-vídalo velikosti póru. V případě alternativníkobercové hypotézy by na velikosti moleku-ly barviva nezáleželo. Na konferenci jsemměl opět možnost potkat Gala Bitana, který,jak už jsem loni psal, objasnil význam amino-kyselin Ile41 a Ala42 při asociaci Abeta1-42.Jeho nejnovější výsledky ukázaly, významMet35 na schopnost peptidu agregovat, t.j.oxidace methioninu zabrání vzniku asociátů.Jeho výsledky korelovaly s laboratoří Zagor-
skeho, M. G. jehož doktorantka předvedlakrásnou NMR studii demonstrující význam oxidace methioninu. Asociaci jde pozorovatjako změnu v signálech histidinu, který vy-tváří solný můstek v agregátech. Studie májednu přidanou hodnotu, kterou je fakt, žeoxidace methioninu v již vzniklých placích,vede k jejich rozpadnutí. Dá se tedy speku-lovat, že látky uvolňující kyslík v CNS, mo-hou mít příznivý vliv na progresivní Alzhei-merovu chorobu. Z této laboratoře vyšloi další pozoruhodné zjištění, kterým je vlivalkoholů na rychlost asociace. Ukázalo se,že například asociace v 17.5 % vodném met-hanolu probíhá během desítek hodin, zatím-co v jeho nepřítomnosti se jedná o desítkydnů. Možná, že zde bude vysvětlení ve zhor-šení kognitivních funkcí pijáků alkoholu (alkohol má podobný efekt jako methanol).Poslední za zmínku stojící příspěvek v tétooblasti je práce Hershe, L. B., který ukázal,že Insulin Degradující Enzym (IDE) je scho-pen štěpit Abeta1-42 a bránit tím vzniku pla-ků.Aktivita IDE při štěpení Abeta je snižová-na oxidačním stresem tak jako toxicita Abe-ta, tedy vliv oxidace na zdraví organismu jeprotichůdný. Pozoruhodné je, že IDE můžebýt aktivována k štěpení Abeta pomocí dynorfinu v koncentracích řádově nižších,než je potřeba k degradaci insulinu.
Další významnou oblastí zájmu bylyneuroprotektivní Proteiny a Peptidy. Hlavnívýznam byl kladen na Activity-dependentneuroprotective protein (ADNP) a od nějodvozený aktivní peptid NAP. Tuto proble-
SU M M E R NE U RO P E P T I D E S 2004
Jaroslav Šebestík
Bulletin 3 � 75
matiku prezentoval tým organizátorky kon-ference Illany Gozes. Povedlo se jim proká-zat, že zmíněný peptid i protein zabraňujíapoptóze nervových buněk jak vlivem pero-xidu vodíku tak Abeta1-42. Při blotování zji-stili, že tyto protektivní peptidy snižují hladi-nu p53 v nervových buňkách při poškození.Dále NAP reguluje samoorganizaci tubulinu.Kromě těchto neuroprotektivních nálezůtým potvrdil, že peptid není toxický po pro-vedení spousty biologických testů jako jemutace savčích buněk, Amesův test a další.Dále byl ukázan skupinou Gonzalese B. J.protektivní vliv Pituitary Adenylate Cyclase-Activating Polypeptide (PACAP) v průběhumozkové příhody skupinou. A taky, že ago-nisté tohoto peptidu jsou vhodný terapeu-tický cíl. Další skupiny také prokázali, že neu-roprotektivní jsou i jiné peptidy VIP rodiny(Vasoactive Intestinal Peptide). Skupina ně-meckého Novozélanďana Franka Siegehoobjevila rodinu Neuronal Regeneration Protein (NRP), která má podobné chemoa-traktivní chování jako chemokine stromalcell derived factor (SDF-1) během neu-rogeneze a neuronální migrace. Dále pak interagují s CXCR4 receptorem a iniciují přežití neuronů a migraci jeho fosforylací.
Byl ukázan vliv vasopresinu a oxytocinuna vnímání úzkosti. Bylo zjištěno, že jedno-bodová mutace u myši vede ke zvýšené vnímavosti k úzkosti-stresu. Vysvětlení bylopodáno jako nedostatečná interakce s re-presorem pro vasopresinový receptor vedoucí k jeho over-expresi a nadměrné stimulaci neuronů endogením vasopresinemv hypothalamu. Antagonisté vasopresino-vých receptorů byly vyzdviženy jako novýdruh anxiolytik.
Jak se ukazuje, jak oxytocin, tak jeho an-tagonisté i VIP peptid mohou mít neblahénásledky na vývoj sociálních funkcí jedincepokud byli podány v embryonálním či peri-natálním období. Změny sociálního chováníhlodavců mohou být jak v tvorbě partner-ských vztahů až k totální neinterakci se so-ciálním okolím, které se v lidském světě říkáautismus.
Velká část konference byla věnovánaepilepsii a její léčbě pomocí neuropeptidů,zde došlo ke sporu mezi japonskými a ame-rickými lékaři ohledně dětské epilepsie. Ja-ponci doporučují léčbu pomocí TRH, kterámá minimum vedlejších účinků, kdežto ame-ričané preferují ACTH, o kterém Japoncitvrdí, že způsobuje smrštění mozku u dítěte.TRH se dnes mimo jiné dá dávkovat jakonosní sprej. Skvělých výsledků dosáhli takéitalští vědci v oblasti experimentální epilep-sie, kde prokázali pozitivní vliv na myšipři použití či overexpresi Neuropeptidu Ya také somatostatinu jako inhibitoru hipo-campu. Shanon, H.E. poukázal na pozoru-hodný fakt, a to že po experimentálně vyvo-laném záchvatu elektrickým proudem v hi-pocampu záchvat vždy u normálního jedincenáhle odezní. Prohlásil, že znát odpověďna otázku co dokáže záchvat tak snadno za-stavit má cenu 6 mil. USD. Sám se pokusilprokázat, že významnou roli hraje neuro-peptid Y.
A jako perlu na závěr jsem vybral pre-zentaci Koh, S., která pomocí microarray čipu dokázala objevit významnou expresivětšiny již zmíněných neuropeptidů při epi-leptickém záchvatu. Zde je vidět, že jednotli-vec vybavený dobrou technikou může získatvýsledky během měsíce, které celým týmůmtrvají několik měsíců či let.
76 � Bulletin 3
3. ME Z I N Á RO D N Í A 28.EV RO P S K É P E P T I D OV É
S Y M P O S I U M
Konalo se druhý zářijový týden v pro-storách Pražského kongresového centraa bylo organizováno společně israelskýmia českými peptidáři (předsedy byli za israel-skou stranu M. Fridkin a C. Gilon, za českoustranu M. Flegel a J. Slaninová). Slavnostnímuzahájení v neděli v podvečer předchá-zelo Minisymposium mladých výzkumníků,kteří se ucházeli o jednu ze dvou cen „Dr. Bert L. Schrama o nejlepší ústní sdělenímladého výzkumníka“, které byly dotoványkaždá sumou 1000 US dolarů. V této sekcibylo proneseno celkem 17 15ti minutovýchpřednášek, které všechny měly velmi vyso-kou úroveň a porota ve složení (A. David,M. Mehldal a A. M. Papini) měla těžkou roli.V soutěži nakonec zvítězili Gali Golan z Israele a Youhei Sohma z Japonska.Všichniřečnící byly vyzváni, aby své příspěvky uve-řejnili in extenso v časopise Evropské pepti-dové společnosti Journal of Peptide Science.
Slavnostního zahájení symposia seúčastnili čestní hosté velvyslanec RepublikyIsrael v České republice, jeho excelence A. Avnon, předsedkyně Akademie věd České republiky Doc. Helena Illnerová,zástupce proslulého Weizmannova ústavuv Rehovotu Prof. Michael Sela, prorek-tor Vysoké školy chemicko-technologické Prof. Jan Staněk a ředitel Ústavu organickéchemie a biochemie Akademie věd Českérepubliky Dr. Zdeněk Havlas. Po krátkýchpříspěvcích čestných hostů a uvítání účastníků zástupci organizačního výboruProf. M. Fridkinem a Dr. M. Flegelem zaznělgong a symposium tím bylo zahájeno.Prvním bodem programu bylo předání me-dailí za zásluhy o Evropskou peptidovouspolečnost bývalým předsedům společnosti,G. T.Youngovi, D. Brandenburgovi a R. Roc-chimu, bývalým sekretářům A. Loffetovi a J. Daviesovi, a bývalým vědeckým sekretá-
řům G. Jungovi a H. Graas-Maase (bývalý pokladník R. C. Sheppard bohužel nebyl pří-tomen). Medaili jim předal současný předse-da společnosti Prof. J. Martinez spolu s sesoučasným sekretářem prof. F. Hudczem.Poté byla oznámena jména letošních laureá-tů prestižních cen předávaných na Evrop-ských symposiích, t.j. Ceny Leonidase Zer-vase, dotované firmou Bachem, Prof. HeleněS.Gras-Masse z Francie a Pamětní ceny Josef Rudingera, kterou dotuje společnostPolyPeptides a.s., Prof. Luisovi Moroderoviz Německa. Poté následovaly vynikající přednášky obou oceněných na téma „Synt-hetic Lipopeptides: A Viable Approach forthe Therapeutic HIV Vaccines of the Future“a „Disulfides in Peptides and Proteins:A Per-sonal Challenge from Past to Present.“Po skončení přednášek se otevřely prostoryfoyer a firemní výstavní plochy pro uvítacírecepci. K tomu hrála účastníkům cimbálov-ka. Dle reakcí účastníků se úvodní partyvšem velmi líbila.
V pondělí ráno v půl deváté pak začalmaraton přednášek. První dopolední částbyla věnována památce nedávno zesnuléhovynikajícího amerického peptidáře MurrayGoodmana, který byl pravidelným účastní-kem evropských a amerických peptidovýchsymposií. Krátký medailon o jeho životěpronesl jeho blízký spolupracovník F. Naider.Další přednášky pak byly věnovány „mos-tům“ v peptidech, jejich syntéze a důsled-kům pro biologickou aktivitu. Další 2 před-náškové bloky byly věnovány foldingu a agre-gaci a syntéze a průmyslové výrobě.
V úterý, 3tí den symposia, pokračovalintensivní vědecký program až do 7 hodinvečer. Tři přednáškové bloky Imunopepti-dy/Lipopeptidy, Strukturně aktivitní vztahya Bioaktivní konformace přilákaly velmimnoho badatelů navzdory panujícímu krás-
Bulletin 3 � 77
nému počasí, které lákalo k procházcea k obdivovaní krás Prahy.
Konala se také malá oslava, neboť Journal of Peptide Science, oficiální časopisEvropské peptidové společnosti, měl své desáté výročí. Vydavatelé, členové poradní-ho sboru a další účastníci se radovali z úspě-chu časopisu při skleničce zlatistého moku („Journal of Peptide Science Beerfest“).
Středeční dopoledne bylo velmi vý-znamné pro všechny české peptidáře,neboť bylo věnováno vzpomínce na slavné-ho českého chemika – peptidáře, zakladate-le tradice evropských symposií - prof. JosefaRudingera, na nedožité výročí jeho 80týchnarozenin a zároveň k 50tému výročí prvnísyntézy biologicky aktivních peptidů oxyto-cinu a vasopresinu, jejichž studiem se dr. Rudinger zabýval. Byli pozváni (a slav-nostního zasedaní se účastnili) všichni žijícíúčastnící prvního Symposia v Praze v roce1958 (Dr. a prof. M. Brenner, I. Červená,B. Liberek, K. Medzihradszky, M. Roth,E. Wuensch, G. T. Young, M. Zaoral) i man-želka prof. Rudingera, Edita. První část bylapřevážně vzpomínková a promluvili zde dr. A. Holý, prof. G. T. Young, prof. J. Jones,Dr. Vl. Gut, prof. M. Manning, prof. V. Pliškaa Dr. M. Zaoral. Druhá část shrnula naše dosavadní znalosti o neurohypofyzárníchhormonech od syntézy, po nejnovější výz-kumy v oblasti centrálního nervového systé-mu (vynikající přednáška prof. R. Landgrafaz Mnichova).
Středeční odpoledne bylo tradičně volné, aby si delegáti odpočinuli a poroz-hlédli se po Praze a jejím okolí. Mohli si takézasportovat či zafandit, neboť se konal tra-diční fotbalový zápas na blízkém stadionuna Vyšehradě. Večer se pak mohli účastnícipřipravit na čtvrteční slavnostní večer a naučit se základům některých národníchtanců v kurzu, který pro ně připravili israel-ští taneční mistři.
Čtvrtek patřil opět ke vědou nabitýmdnům. První ranní přednáškový blok vyplnily
příspěvky o neuroprotektivních peptidech,další patřil peptidovým knihovnám. Po obě-dě následovaly přednášky zabývající se antimikrobiálními a do buněk pronikajícímipeptidy.
Paralelně přednáškám probíhaly plaká-tové sekce, kde bylo presentováno téměř700 příspěvků, přičemž autory více než čtvr-tiny z nich byli mladí výzkumníci pod 35 let,neboť více než 150 jich přihlásilo své přís-pěvky do soutěže o nejlepší plakátové sdě-lení pro mladé badatele. Porota složená z 25 posuzovatelů a vedená Prof. W. Lubel-lem z Montrealu po prvním kole hodnoceníkonstatovala, ze výborných plakátů je vícea tak po poradě s organizačním výborem by-lo dohodnuto, že ke 2 cenám udělovanýmspolečností ESCOM (cena Dr. Bert L. Schra-ma á 500 US $) přibudou ještě 3 další oce-nění a 10 čestných uznání.
Slavnostní předávání cen mladým vý-zkumníkům se konalo na slavnostní večeři ve čtvrtek večer. Následující mladí badatelézískali čestné uznání za své plakáty a výsled-ky: D. Grillo Bosch, Španělsko, K. Weller,Švýcarsko, I. Spalovska Valachova, Slovens-ko, M. Vila Perello, Španělsko, J. Farrera-Sintreu, Španělsko, M. Mano, Portugalsko,M. Ryadnov,Velká Británie, L. Palivec, ČeskáRepublika, N. E. Shepard,Austrálie a M.Teixi-do, Španělsko. Ceny Dr. Bert L. Schrama získali Tomas Nielsen z Dánska a Daniel Va-ron-Silva z Německa. Druhou a třetí cenuv soutěži o nejlepší plakátové sdělení pakzískali Pradip Chakraborty z Německaa Marta De Zotti z Itálie.K naší velké radostibyla první cena udělena Dr. Lence Žákovéz Ústavu organické chemie a biochemieAVČR z Prahy za její výsledky týkající sezkrácených analogů insulinu. Gratulujeme!
Pátek začal přednáškami o peptidechpronikajících do buněk a peptido-nukleo-vých kyselinách. Diskutovalo se o pepti-dech v regulaci genů a o amphipathických na prolin bohatých peptidech jako potenciál-ních transportérech léčiv. Před obědem pak se diskutovalo o interakcích mezi pro-
78 � Bulletin 3
teiny a peptidy. Páteční odpoledne před slavnostním zakončením patřilo fyzikálněchemickým studiím peptidů, zejména NMR,MS a CD.
Slavnostní zakončení tak jako zahájenímoderovala předsedkyně Symposia za Čes-kou stranu, Dr. Jiřina Slaninová. Poděkovalavšem účastníkům za vytvoření tvůrčí a přá-telské atmosféry během symposia a vyjádři-la díky své i ostatních organisátorů všem,kdo přispěli k zdárnému průběhu symposia.Prof. Gilon poté prohlásil symposium za ofi-cielně ukončené. Jak je zvykem, moderátor-ka poté představila předsedy nadcházejícíchnejbližších velkých peptidářských akcí a vy-zvala je ke krátké presentaci. Prof. K. Rolkapředstavil Gdaňsk, dějiště 29. Evropskéhopeptidového symposia v roce 2006,Prof. I. Smith představil Cairns, Quens-land v Austrálii, dějiště 4. Mezinárodního
peptidového symposia v roce 2007 a prof. R. M. Freidinger představil San Diego,dějiště 19. Amerického peptidového sym-posia v roce 2005. Poté Dr. Slaninová poděkovala všem účastníkům, kteří vydrželiaž do konce a s přáním mnoha úspěchůdo další práce Symposium zakončila.
Celkem se Symposia účastnilo 1154účastníků ze 40 zemí celého světa, nejvícez Německa (132), USA (102) a Japonska(80). Formou přednášek nebo plakátů bylopresentováno 758 sdělení. Všichni účastnícivelice chválili Pražské kongresové centrumna Vyšehradě, které je prostorné, vzdušnéa je z něj nádherný výhled na Prahu. K úspě-chu Symposia samozřejmě také přispělo po-časí, které během celé akce bylo prostěbez chyby.
J. Slaninová,ÚOCHB,AV ČR, Praha
Bulletin 3 � 79
3. ME Z I N Á RO D N Í A 28. EV RO P S K É P E P T I D OV É
S Y M P O S I U M
Letošní setkání peptidářů z celého svě-ta se konalo na začátku září v Praze. Původ-ní místo konání mělo být v Jeruzalémě,ale vzhledem k bezpečnostní situaci v Izrae-li se česká a izraelská peptidová společnostdohodli, že 3. Mezinárodní a 28. Evropsképeptidové symposium bude v našem hlavnímměstě. Peptidovou historii Izraele a Českérepubliky spojuje i osoba vynikajícího chemi-ka Josefa Rudingera, jemuž byla i část sym-posia věnována.
Jako vždy se velká část z téměř osmi setpříspěvků věnovala syntéze peptidů. Rokod roku větší část tvořily také příspěvky tý-kající se konformace, foldingu peptidů a proteinů, strukturálně aktivitních vztahůa receptorových studií. Na toto téma patři-ly k nejzajímavějším přednášky V.J. Hrubého:„Utilizing genomics and proteomics for pep-tide based drug design“ a A. Levitzkého:„Development of agents targeting EGF re-ceptor and PDGF receptor“. Z více než 250posterů s touto tématikou by se mohli vy-brat poster G. Floureta: „Bicyclic analoguesof a potent oxytocin antagonist“ či posteryE. Birona: „Synthesis and conformationalanalysis of highly N-methylated somatosta-tin analogues“ a M.Wheatleyho: „The N-ter-minus of neurohypophysial peptide hormo-ne receptors: its role in hormone binding,ligand selectivity and receptor activation“.
Naše pozornost byla samozřejmě za-měřena na příspěvky týkající se hormonu insulinu, na kterém pracuje naše skupina.Na symposiu se objevilo několik zajímavýchpříspěvků. K nejzajímavějším patřila beze-sporu přednáška D. Brandenburga: „Bridgesin peptides: semisynthetic pathways andstructural/biological consequences“, kdeprofesor Brandenburg shrnuje problematikuinsulinu od jeho první přípravy až po nejno-vější objevy. Dva příspěvky se týkaly tako-
vých modifikací molekuly insulinu, které bymohly zlepšit farmakokinetické vlastnostihormonu. T. Hoeg-Jensen s S. Havelundem(Novo Nordisk, Dánsko) s posterem „Insu-lin hexamer-hexamer bridging with borona-te-carbohydrate links for carbohydrate-res-ponsive insulin release“ modifikovali hexa-mer insulinu boronáty, které mohouumožňovat pomalejší uvolňování insulinuz moderních polymerních kapsulí. Zapouz-dření insulinu do polymerních kapsulí je výhodné z několika důvodů, např. zvyšuje bi-okompatibilitu, schopnost biologické degra-dace, stabilitu léku a možnost zvýšení inje-kovaného objemu. K. Barlos s kolegy na dru-hém posteru „Studies on the Synthesis ofPegylated Insulin Derivatives“ navrhoval zvý-šit stabilitu insulinu neselektivní modifikacípolyethylenglykolem na třech dostupnýchamino skupinách insulinu. S. Zórad ze Slo-venska měl velice zajímavý poster s názvem„Rapid inhibition of insulin binding by gluco-se in rat liver plasma membranes“, kde pre-sentoval jak vysoká hladina krevní glukosymůže ovlivňovat proteiny a také překvapivěinhibovat vazbu insulinu na jeho receptor.Vedle dvou posterů týkajících se insulinupresentovaných naším ústavem („Shortenedinsulin analogues“ a „Iodinated desoctapep-tide insulin“) a výše zmiňovaných příspěvků,se insulinu nebo insulinu podobným hormo-nům věnovali další 3 příspěvky, které ale ves-měs popisovaly jejich syntézu.
Na závěr by bylo vhodné říci, že sym-posium bylo až na drobné organizační nedostatky velice pěkné a také velice pří-nosné kvůli pracovním inspiracím, naváza-ným kontaktům a možným budoucím spolupracím.
Lenka ŽákováÚOCHB AV ČR
80 � Bulletin 3
28. EPS A 3. IPS V PR A Z E 2004
3. Mezinárodní a 28. Evropskou pepti-dovou konferenci, která se konala začátkemzáří v kongresovém centru v Praze, pořádalive spolupráci izraelští a čeští peptidoví nadšenci. Hlavním motem celé konferencebyla věta „Peptides-bridges between discipli-nes“.V neděli před oficiálním zahájením kon-ference se konaly přednášky mladých pepti-dářů, tzv. „Young-Investigators‘ Mini-sympo-sium“.
První sekce přednášek v pondělí ránonesla název „Houben-Weyl Goodman memorial session“.V této sekci jsem si ne-mohla nechat ujít přednášku profesoraBrandenburga s názvem „Bridges in pepti-des: Semisynthetic pathways and structu-ral/biological consequences“. Dále mě hodně zaujaly některé přednášky v sekcích„Structure activity relationship“, „Protein-peptide interaction“ a „Antimicrobial andCell Penetrating Peptides“. V poslední zmi-ňované sekci byla pro mě hodně zajímavápřednáška „Antimicrobal peptides: a lessonfrom nature for future antibiotics“ IzraelceYechiela Shaie. Shai stručně shrnul historiiantimikrobialních peptidů, mechanismy jejichúčinků, způsoby vazby těchto peptidůna membrány a také výsledky pokusů s dia-stereoizomerními analogy různých antimik-robiálních peptidů atd. Velmi kvalitní před-nášku měla rovněž Francouzka Sylvie Rebuf-fat: „Posttranslationally modified MicrocinE492, a siderophore-peptide with potent an-tibacterial activity“.
Padesátému výročí syntézy neurohypo-fyzárních hormonů byla vyhrazena samo-statná sekce s názvem „The Josef RudingerMemorial Session“. V této sekci jednotlivípřednášející vzpomínali na úplně první pep-tidové sympozium v Praze organizované Jo-sefem Rudingerem (1924-1974) a také na ži-vot a vědeckou činnost Rudingera, kterýv padesátých a šedesátých letech působilna ÚOCHB AV ČR.
Velmi hojná byla plakátová část konfe-rence s 678 postery. Samozřejmě také zdejsem se zaměřila na zhruba 40 posterů týka-jících se problematiky antimikrobiálníchpeptidů. Obsahem těchto posterů byla izo-lace antimikrobiálních peptidů z různýchzdrojů nebo syntéza analogů již známých an-timikrobiálních peptidů. Dále také sledovánínejen jejich antimikrobiálních, ale také cyto-toxických nebo protirakoviných účinkůa měření interakcí těchto peptidů s mem-bránovými systémy použitím kalorimetrienebo fluorescenční spektrospopie. Zajímavýbyl například poster Paula Gomese z Portu-galska s názvem „Calorimetric studies of theInteraction of two hybrid peptides (Cecro-pin/Melittin) with liposomes“ a Izraelce Niva Papo s názvem „Antiprostate tumoractivity detected in vitro and in vivo by a cellselective membrane-active D,L-amino acidcontaining peptide“.
Alice Ciencialová,ÚOCHB,AV ČR
Bulletin 3 � 81
Spoluautoři posteru P 566: Shortened Insulin Analogs: Marked Changes in Biological Activity Resulting from
Replacement of Tyrosin and N-Methylation of Peptide Bonds (3rd IPS and 28th EPS, Prague 2004)
gratulují
Dr. L. Žákové k vítěznému umístění v soutěži.
82 � Bulletin 3
Sekce
separaãních metod
ZP R ÁV Y Z E S E K C Í
ZP R ÁVA O S Y M P O S I U ITP 2004
14. Mezinárodní symposium o kapilár-ních elektroseparačních technikách (14th International Symposium on Capillary Elect-roseparation Techniques, ITP 2004) se kona-lo ve dnech 12-15. září 2004 v Římě. Tato série symposií je nejstarší z několika sériísymposií věnovaných kapilárním elektromig-račním metodám, první symposium této řady se konalo již v roce 1979 v Baconfayv Belgii. Až do roku 1986 se symposium věnovalo pouze kapilární izotachoforéze,neboť izotachoforéza (ITP) byla první elekt-romigrační metodou, jež byla prováděnav kapilárním formátu.V následujících letechbyla tématika symposia rozšiřována o dalšíelektromigrační metody, od roku 1998 nesesymposium současný název a jeho izotacho-foretický původ připomíná již jen zkratkaITP užívaná jako logo. Symposium této sériese ve „věčném městě Římě“ konalo již po-druhé, pro kapilární elektroforetiky „všech-ny cesty vedly do Říma“ poprvé již před dva-nácti lety na 8. symposium této série, ITP’92.Itálie je vůbec pro tuto sérii symposií jednouze „zaslíbených zemí“, neboť její 11. pokra-čování, ITP 1998, se konalo v Benátkách.Vícekrát, v součtu čtyřikrát, se toto sym-posium konalo jen v Československu resp.Česku a Slovensku.
Letošního symposia se zúčastnilo vícenež 190 účastníků ze 23 zemí, většinou evropských, ale kvalitně byly zastoupenyi mimoevropské velmoci v oblasti elektrose-paračních metod, USA a Japonsko. Potěši-telná byla vysoká účast českých odborníků (33 účastníků), kteří tvořili nejpočetnějšíčást zahraničních účastníků a jejichž význam-
ný přínos k úspěšnému průběhu symposiavysoce ocenil i předseda symposia, Dr. Salva-tore Fanali (Institute of Chemical Methodo-logies, Consiglio Nazionale delle Ricerche –CNR, Rome).
Vědecký program symposia zahrnoval 2 plenární přednášky, 25 hlavních přednášek(keynote lecture), 20 kratších ústních sděle-ní a 120 plakátových příspěvků. Plenárnípřednášky byly prezentovány na počátkua na konci symposia.V úvodní plenární před-nášce doyen italských elektroforetiků, prof.Pier Giorgio Righetti (University of Verona),podal podrobný přehled o modifikacíchvnitřního povrchu křemenných kapilárza účelem potlačení adsorpce peptidů a bílkovin i jiných biomolekul a regulacea stabilizace elektroosmotického toku.V závěrečné plenární přednášce Dr. Franti-šek Foret z Ústavu analytické chemie AV ČRv Brně demonstroval prudký rozvoj mikrof-luidních zařízení (čipů) on-line spojenýchs hmotnostně spektrometrickou detekcía jejich obrovský perspektivní aplikační potenciál pro (elektro)separaci a nano- ažpikoanalýzu komplexních směsí biopoly-merů i malých biomolekul v proteomice,genomice a metabolomice.
Slavnostní zahájení symposia a úvodníplenární přednáška se konaly ve velké auleUniversity „La Sapienza“, uvítací večírek pakna terase této auly, téměř pod palmami uni-versitní zahrady. Další jednání symposia pro-bíhalo v nové přednáškové síni Národníhostřediska výzkumu (CNR). První sekce bylavěnována kapilární elektroforéze (CE) bílko-vin a peptidů, které stále patří mezi nejvý-
Bulletin 3 � 83
znamnější a nejčastěji analyzované látky.V původně plánované úvodní, z technickýchdůvodů závěrečné přednášce této sekce „ži-vá legenda“ kapilárních elektroseparačníchmetod, prof. Stellan Hjertén (University ofUppsala), který zkonstruoval první prototyprotující trubičkové „kapilární“ (vnitřní prů-měr 3 mm) elektroforézy již v r. 1958, před-vedl, že při optimalizaci experimentálníchpodmínek, zejména při potlačení sorpcena vnitřní stěnu kapiláry, lze při CE analýzebílkovin dosáhnout mimořádně vysoké sepa-rační účinnosti – více než milión teoretic-kých pater. Ve druhé přednášce autor tétozprávy referoval o kapilární zónové elektro-foréze (CZE) v silně kyselých základníchelektrolytech a o jejím využití pro charakte-rizaci peptidů, konkrétně pro stanovení pKahodnot skupiny kyseliny fosforné ve fosfiná-tových pseudopeptidech a pro určení limit-ních iontových pohyblivostí těchto pseudo-peptidů. Podobné problematice, využití CEpro charakterizaci interakcí peptidů s kovo-vými ionty a pro studium kinetiky i termo-dynamiky interakcí peptidů a bílkovin s oli-go- a polynukleotidy (aptamery), byly věno-vány další dvě zajímavé přednášky tétosekce, M. Castagnoly (Catholic Univ. of Ro-me) a S. Krylova (York Univ., Toronto). Vlivsložení základního elektrolytu na separacibílkovin a na velikost a stabilitu elektroos-motického toku diskutoval D. Corradini(Inst. Chem. Methodol., CNR, Rome).Analý-ze bílkovin a peptidů byla věnována řadapřednášek i v dalších sekcích, např. v jednéz nejzajímavějších a nejlépe prezentovanýchpřednášek celého symposia N. Guzman(Johnson & Johnson, Raritan, USA) poukázalna obrovský potenciál multidimenzionálníimunoafinitní kapilární elektroforézy v pro-teomice a při vývoji nových bílkovinných léčiv, zvláště pro včasnou předpověď imuno-genicity a autoimunity. S. Terabe (Universityof Hyogo) se sice tentokrát nevěnoval své-mu vynálezu, nejmladšímu módu kapilárníchelektromigračních metod, elektrokinetickéchromatografii, od jejíhož prvního prezento-
vání v Analytical Chemistry letos uplynulo20 let, ale jeho ukázka dvoutisícinásobnéhoon-line zakoncentrování vzorku umožňující-ho vysoce citlivou analýzu fosfopeptidův komplexních směsích peptidů a bílkovinkapilární elektroforézou s hmotnostněspektrometrickou detekcí byla rovněž velmipůsobivá.
V krátké sekci „CE mikroorganismů“ E. Kenndler (Univ. of Vienna) ukázal využitíCE s vysoce citlivou laserem indukovanoufluorescenční (LIF) detekcí pro sledování infekční cesty virů a F. Kilár (Univ. of Pécs)hovořil o aplikaci této technologie (CE-LIF)pro analýzu bakteriálních endotoxinů. Natuto problematiku navázala v další sekcii přednáška A. Bossi (Univ. of Verona) o vyu-žití CE při studiu bílkovin a komplexů bílko-vin s taniny u bakterií využívaných při výro-bě vína.
Tři sekce byly věnovány kombinovanýmkapilárním elektrochromatografickým tech-nikám, elektrokinetické chromatografii(EKC) a elektrochromatografii (CEC), a ka-pilární kapalinové chromatografii (CLC ne-boli též nano-LC). Příprava monolitickýchkolon pro náročné separace biomolekulv kapilárně elektrochromatografickém mó-du a pro dvourozměrné HPLC separacekomplexních směsí bílkovin byla námětempřednášek F. Švece (Univ. of California,Berkeley) a N. Tanaky (Inst. of Technology,Kyoto). Z. El Rassi (Oklahoma State Univ.,Stillwater) referoval o využití CEC a nano-LC v glykomice, tj. při studiu složení a funk-cí cukerných složek glykopeptidů a glyko-proteinů.
Široce byla na symposiu zastoupena téžproblematika chirálních separací. Ilustrativnípřehled o využití afinitních interakcí v CECa nano-LC pro chirální analýzu léčiv a jinýchbiomolekul podal předseda symposia, S. Fa-nali. Nové chirální stacionární fáze založenéna totálně syntetizovaných i přírodních se-lektorech pro enantioselektivní HPLC před-stavil F. Gasparrini (Universita „La Sapienza“,Rome). Nové chirální fáze pro CEC na bázi
84 � Bulletin 3
monolitických kolon s kovalentně imobilizo-vanými polysacharidy resp. alkaloidy ukázalirovněž B. Chankvetadze (Tbilisi State Univ.)a M. Lämmerhofer (Univ. of Vienna). Neko-nečného rozlišení enantiomerů léčiva tra-madolu dosáhl pomocí CE s vysoce sulfáto-vanými cyclodextriny S. Rudaz (Univ. of Ge-neva). O CE separaci a charakteristickýchprofilech píků vzájemně se přeměňujících,konfiguračně labilních enantiomerů hovořilV. Schurig (Univ. of Tübingen).
Velmi užitečným nástrojem při volběa optimalizaci elektrolytových systémů sestávají počítačové simulátory elektrosepa-račních procesů, což ve svých přednáškáchpřesvědčivě demonstrovali B. Gaš (Přírodo-vědecká fakulta UK, Praha) a W. Thormann(University of Bern).
Instrumentální vývoj elektromigračníchmetod směřuje k jejich další miniaturizaci,tj. k převodu elektroseparací z kapilárdo mikrokanálků vytvářených na křemen-ných nebo plastových mikročipech techno-logiemi obdobnými postupům při výroběelektronických integrovaných obvodů. On-line spojení CITP s CZE v mikročipovémuspořádání předvedl D. Kaniansky (Universi-ta Komenského, Bratislava) a o studiu lipo-somů čipovou elektroforézou referovalapředsedkyně minulého symposia, ITP2002, M.-L. Riekkola (Univ. of Helsinky).Výrazně se rovněž rozšiřuje on-line spojeníkapilární a čipové elektroforézy s hmotnost-ně spektrometrickou detekcí (CE-MS), cožbylo dokumentováno nejen v již citovanéplenární přednášce F. Foreta, ale i v přednáš-kách S. Shamsiho (Georgia State Univ.,Atlanta), C. Neusüsse (Bruker Daltonik, Le-ipzig) a C.W. Klampfla (Johannes KeplerUniv., Linz). A. Zemann (Leopold FranzensUniv., Innsbruck) a P.C. Hauser (Univ. of Ba-sel) seznámili účastníky s novými konstruk-cemi bezkontaktních vodivostních detekto-rů. Poslední vývoj v preparativní izoelektric-ké fokusaci přiblížil G. Vigh (Texas Univ.,College Station), o modelování transport-ních jevů ve volné průtokové elektroforéze
přednášel K. Klepárník (Ústav analytickéchemie AV ČR, Brno) a o použití nevodnýchrozpouštědel pro zvýšení selektivity CE separací hovořil J.-L. Veuthey (Univ.of Geneva).
Řada přednášek byla věnována praktic-kým aplikacím CE a CEC, např. v soudním lékařství (F.Tagliaro, Univ. of Verona), při ana-lýze anorganických iontů v biologických te-kutinách kombinací transientní ITP-CZE (T. Hirokawa, Hiroshima Univ.), při stanove-ní anorganických aniontů v mořské vodě (K. Fukushi, Kobe Univ.), při vývoji léčiv ve farmaceutickém průmyslu (T. Meissner,Novartis Pharma, Basel) a při analýzách flavonoidů ve šťávách citrusových plodů respektive vitamínu E v rostlinných olejích (C. Desiderio a Z.Aturki, obě z Inst. Chem.Methodol., CNR, Rome).
120 plakátových sdělení pokrývajícíchstejné oblasti problematiky kapilárních elek-troseparačních metod jako přednášky byloprezentováno ve dvou relativně krátkých,60 minutových sekcích, ale díky tomu, že ta-to sdělení byla vyvěšena po celou dobu sym-posia, bylo možné seznámit se s jejich obsa-hem a podiskutovat s jejich autory i mimooficiální čas těchto sekcí. Úplný programsymposia je dostupný na internetové adrese:http://www.itp2004.mlib.cnr.it/.
Symposium probíhalo ve velmi příjem-né, přátelské atmosféře, typické pro tuto sérii symposií, a bylo vydařeným setkánímstarých i nových členů „izotachoforetickérodiny“. Příjemným zážitkem byl i druhý bodspolečenského programu, slavnostní večeřev klasickém italském stylu v romantickémšlechtickém paláci (Palazzo Ferrajoli) nedale-ko známé Fontany di Trevi.
Symposium bylo zakončeno pozvánímna příští setkání této série, ITP 2006, kterése bude konat v září 2006 v Paříži.
Václav Kašička,Ústav organické chemie
a biochemie AV ČR, Praha
Bulletin 3 � 85
Sekce
proteomická
ZP R ÁV Y Z E S E K C Í
1. Č E S K Á P ROT E O M I C K Á KO N F E R E N C E,MĚ L N Í K 15.-16.6. 2004
Ve dnech 15. – 16. června 2004, necelýrok po založení Proteomické sekce Českéspolečnosti pro biochemii a molekulární biologii, se v příjemném prostředí hoteluLudmila v Mělníku konalo první setkání čes-kých proteomiků.
Rozlustění sekvence lidského genomupodnítilo rychlý rozvoj řady klíčových tech-nologií a metodologií pro studium proteomu,tj proteinového komplementu genomu.V průběhu posledních 10 let je tento techno-logický rozvoj nezbytný pro dynamický pro-teomický výzkum. Před mnoha proteomický-mi pracovišti leží nyní výzva k využití těchtomoderních technologií k poznání mechanis-mů a funkcí, které prostřednictvím proteinůřídí chování složitých biologických systémů.
Od uspořádání 1. České proteomickékonference jsme očekávali, že poskytne jasný obraz současného stavu a budoucíhozaměření proteomického výzkumu provádě-ného v českých institucích a bude příleži-tostí k setkání lidí se zájmem o proteomiku.Organizační výbor složený ze členů výboruProteomické sekce, za účelné pomoci Ústa-vu živočišné fyziologie a genetiky AV ČRv Liběchově, připravil jak odborný tak i spo-lečenský program. Přihlášené příspěvky bylyvýborem uspořádány do tří okruhů: I. Prote-omové technologie (2 sekce), II. Biomedicín-ské aplikace (2 sekce), III. Bioinformatika (1 sekce). Přednášky byly navíc doplněné řadou plakátových sdělení. Bylo potěšitelné,že z celkového počtu téměř 70 účastníků sevětšina zúčastnila aktivně vlastní presentací.
Přínosem 1. České proteomické konfe-rence byla kvalitní odborná úroveň presen-tovaných příspěvků. Neocenitelná byla rov-něž příležitost k osobní výměně odbornýchzkušeností s celou řadou nových a neustálese rozvíjejících metodologických i přístrojo-vých přístupů. Za zmínku stojí užitečné propojení odborných presentací vědeckýchpracovníků a zástupců obchodních společ-ností s produkty mířícími do oblasti proteo-mického výzkumu. Právě v této oblasti je intenzivní komunikace oboustranně pro-spěšná a zastoupení firem ( Bio-Rad, BrukerDaltonics, BioTech, Genetica, HPST, Immu-notech, KRD, Roche Diagnostics, Schimadzu,Sigma-Aldrich, Spectronex a Waters), kterépodpořili toto setkaní patří poděkování Proteomické sekce.
Konferenci zahájil Doc. Ivan Míšek,ředitel Ústavu živočišné fyziologie a genetiky AV ČR v Liběchově a po krátkém Úvodudo proteomiky předneseném Dr. Hanou Kovářovou se naplno rozeběhl program.První sekce, Proteomové technologie I,přesvědčivě ukázala sílu metod hmotnostníspektrometrie pro řešení problémů struktu-ry a modifikací proteinů (P. Halada, P. Pom-pach a M. Šulc, MBÚ AVČR, H. Konečná MUBrno). Druhá sekce Proteomových techno-logií byla zaměřena na další techniky, kterése význačně uplatňují v analýze proteomůa na tomto místě je nutné vyzvednout před-nášku Dr. J. Novotné z MBÚ AVČR, která sezabývala srovnáním způsobů detekce pro-teinů postelektroforetickým fluorescenčním
86 � Bulletin 3
barvením. Obě sekce věnované biomedicín-ské aplikaci pokrývaly celý rozsah prokaryo-tické i eukaryotické proteomiky od studiadiferenciace a syntézy antibiotik v bakteriích(Dr. J. Weiser, MBÚ AVČR), proteomu ječ-mene (Dr. J. Chmelík ÚACH AVČR) či A. tha-liana (Dr. G. Böhmová MU Brno) , savčíchoocytů (Dr. H. Kovářová, ÚŽFG AVČR), NKbuněk imunitního systému (Dr. K. BezouškaPřF UK a ÚMG AVČR, P. Man MBÚ AVČR)až k problematice onkologické (Dr. M. Haj-dúch LF a FN UP Olomouc, Dr. Z. HrkalUHKT Praha). Závěrečná sekce o bioinfor-matice zatím jen nastínila, jak mohou býtproteomická data využita pro identifikaci re-gulačních okruhů (ing. J. Vohradský, MBÚAVČR). Bylo zřejmé, že bioinformatika včet-ně in silico přístupů modelování zatím zůstá-vá „dírou“ proteomiky v České republice.Příjemným zakončením konference byl vtip-ně presentovaný kvíz o interpretaci dat zís-kaných hmotnostní spektrometrií (kolektivMBÚ AVČR).
O účastníky konference bylo pečovánoi z hlediska společenského vyžití. Pro zájem-ce byl připraven výlet na romantický hradKokořín, včetně pěšího výšlapu ke hraduskalním terénem a prohlídky interiéru hra-du. Příjemné odpoledne bylo zakončeno
návštěvou ÚŽFG AVČR v Liběchově spoje-nou s ochutnávkou vín a společnou večeří v hotelu Ludmila v Mělníku.
Poděkování za bezchybný průběh 1.České proteomické konference, přípravua vydání abstraktů presentovaných příspěv-ků patří především organizátorům akce,výboru Proteomické sekce (H. Kovářová,K. Bezouška, J. Chmelík, J. Vohradský a J. Weiser) a ÚŽFG AVČR (sekretariát konference – J. Urychová aJ. Zásmětová).U sekretariátu konference ([email protected], tel. 315 639 554) je k dispo-zici CD s příspěvky, které byly presentová-ny. K rychlé orientaci může také posloužitsekce aktualit na www.iapg.cas.cz.
Na závěr si dovolím vyjádřit přesvědče-ní, že konání proteomických konferencív České republice bude pokračovat a najdesvé rozšíření o účast zahraničních odborníkůči organizování společných konferencí s např.Švýcarskou proteomickou společností.
Hana KovářováÚstav živočišné fyziologie
a genetiky AVČRLiběchov
President Proteomické sekce ČSBMB
Bulletin 3 � 87
RŮ Z N É
Během 19. sjezdu České a Slovenskéspolečnosti pro biochemii a molekulární biologii ve dnech 31. 8. až 3. 9. 2004 došlopři zasedání výboru k projednání návrhuna ustavení samostatné sekce věnovanébiologické bezpečnosti, neboli „biosafe-ty“. Hlavním úkolem této odborné skupinyby měla být výměna informací o bezpečnémnakládání se všemi typy biologických materiá-lů, jejich přípravě a likvidaci. Geneticky modi-fikované organismy (GMO) jsou pouze jed-nou součástí tohoto problému.
Nové poznání a objevy v oblasti biolo-gie přinesly velké množství užitečných infor-mací pro každodenní život. Genetické testyke zdravotním účelům, genetické inženýrstvív potravinářském průmyslu, příprava novýchtypů léčiv, zavedení metody „otisku prstu“při analýze DNA využívané např. u soudníchřízení dostatečně vyvažují možná rizika.Jsou tu ale také pathogenní organismy a viry,které jsou užívány a diagnostikovány jakv rutinních klinických laboratořích, takpři výzkumu. Součástí této problematiky jetaké bezpečná likvidace různých druhů biologických odpadů, včetně jednorázovýchpomůcek kontaminovaných suspektní krví.Pokud se podaří ustanovit naší „biosafety“skupinu prvním úkolem bude navázání kon-taktů s Mezinárodní pracovní skupinoupro biologickou bezpečnost – Internati-onal Biosafety Working Group (IBWG),která má za úkol koordinovat spolupráci národních a regionálních organizací zabývají-cích se biologickou bezpečností. V rámci této skupiny pracuje řada profesionálníchpracovníků z různých národních organizacína globálních úkolech biologické bezpečnos-ti, mezi které náleží harmonizace předpisů,
výměna informací, práce v řídících skupináchregulujících vývoj a pokrok v expertize národních biologických bezpečnostních pra-videl.
Když se někdo pročetl až na toto mís-to, a neměl dosud osobní zkušenosti např.s přihláškou o nakládání s GMO, pomyslí sicosi o zbytečném přemílání známých pravi-del bezpečné práce. Jelikož jsme od letošní-ho roku plnoprávnými členy Evropské Unie,platí pro nás stejná pravidla i v oblasti biolo-gické bezpečnosti. Ta je právě předmětemkoordinace „European Biosafety Asso-ciation“ (EBSA), která sdružuje odborní-ky z této oblasti, bdí nad rozumnými pravi-dly, a pořádá každý rok konference věnova-né vždy aktuálním problémům. Nedílnousoučástí práce EBSA je příprava expertůschopných provádět kvalifikovaný odhad ri-zika v nových oblastech jakými jsou např.:přeprava pathogenních organismů, bezpečnápráce s pokusnými zvířaty, genové therapie,xenotransplantace a pod.
Ta nejhorší věc, která by mohla vědec-kou oblast potkat, by byla situace, ve kteréby se libovolný úřední orgán prohlásil za autoritu v oblasti biologické bezpečnostia začal „neuvědomělé“ biochemiky, gene-tiky a mikrobiology prověřovat a školit. Pro-to aby tato situace nenastala, vznikl podnětna ustavení sekce biologické bezpečnosti.Rádi bychom oslovili všechny členy společ-nosti, kteří souhlasí s užitečností této skupi-ny a jsou ochotni obětovat trochu časuna práci v oblasti biologické bezpečnosti,aby se přihlásili do práce této sekce.
Prof. Ing. Kateřina Demnerová, CSc.Doc. RNDr. Jarmila Pazlarová, CSc.
BIOSAFETY – N OVÁ P R AC OV N Í S K U P I N A
88 � Bulletin 3
12T H IN T E R N AT I O N A L CO N F E R E N C E
O N SE C O N D ME S S E N G E R S
A N D PH O S P H O P ROT E I N S
Ve dnech 3. – 7. srpna 2004 se v Kon-gresovém paláci Montrealu, v Kanadě, ko-nala 12. mezinárodní konference „SecondMessengers and Phosphoproteins“. Konfe-rence umožnila celosvětové setkání pracov-níků, kteří se zabývají základním i klinickýmvýzkumem fosfoproteinové signalizace vezdraví a nemoci s těmi, kteří se věnují vyví-jení jak nových metod na bázi genomikya proteomiky, tak léčebných postupůpro něž jsou druhé posly a fosfoproteiny žádaným místem zásahu.
Vědecký program byl sestaven z plenár-ních a sympoziálních přednášek a z plakáto-vých sdělení. Program byl velmi kvalitní, vět-šina příspěvků informovala z různých hledi-sek o nejnovějších poznatcích učiněnýchbádáním na poli druhých poslů a fosfoprote-inů. Kategorie plakátových sdělení mohouukázat oblasti, ve kterých fosforylace prote-inů má své nezastupitelné místo. Apoptóza,kardiovaskulární signalizace, imunitní signali-zace, lipidová signalizace, internalizace re-ceptorů, signalizace v nemoci, signální proteom, strukturní základy signalizace, ty-rosinové proteinkinázy, signalizace cyklic-kých nukleotidů, fosfatázy v nemoci, degra-dace proteinů, serinové proteinkinázy, signál-ní buněčná síť, tyrosinové fosfatázy, buněčnýcyklus, terapeutická modulace signalizace,serinové/treoninové proteinkinázy, recep-tory a nemoci, kalcium a fosfodiesterázy,adhesivní signalizace, adaptory, zobrazování.signálních procesů.
Témata plenárních přednášek byla: bu-něčné mechanismy pro specificitu signaliza-ce; chemická biologie a signalizace; buněčnýcyklus a přežití buněk; genetické a struktur-ní analýzy signálních dějů; signalizace v ne-
moci.V rámci jednotlivých témat byly větši-nou předneseny tři plenární přednášky.Dr.T. Pawson (Toronto, Kanada) byl prvnímpřednášejícím, jehož zahajující plenární před-náška „Modular Protein-Protein Interacti-ons in Signal Transduction“ byla přehledeminformací o proteinových interakcích selek-tivně umožněných doménami, které rozpo-znávají specifické fosfolipidy, nukleové kyseliny, druhé posly a peptidové motivyi posttranslačně modifikované, například fos-forylací.Velký počet kopií těchto domén bylzjištěn v lidském proteomu, a tak existujemožnost, že se novými kombinacemi vytvo-ří nové biologické funkce a signální dráhy.Také kontrola buněčné polarity je umožněnavytvářením multiproteinových signálníchkomplexů a rozvětvenou regulační sítí vy-tvořenou pomocí interakčních domén.
Jiná brilantní plenární přednáška „App-roaches for Elucidating Protein Kinase andPhosphoinositide Kinase Signalling Path-ways“ (L.C. Cantley, Boston, USA) představi-la nové přístupy k objasnění a vysvětlení regulačních signálních sítí, založené na sub-strátové specificitě proteinkináz a vazebnéspecificitě fosfoproteinových a fosfolipido-vých interakčních vazebných domén. Tentotým identifikoval optimální motivy pro fosfo-rylaci katalyzovanou některými proteinkiná-zami použitím peptidové knihovny a progra-mu Scansite.Také hmotová spektrofotomet-rie se ukázala být velmi cennou metodoupři určení optimální substrátové specificityproteinkináz.
Velmi zajímavá byla plenární přednáška„Signaling by Tyrosine Phosphorylation“ (T. Hunter, San Diego, USA), která s širokýmpřehledem informovala, že ze 31 000 genů
Bulletin 3 � 89
lidského genomu kolem 500 genů kódujeproteinkinázy, z nichž tyrosinové proteinki-názy jsou reprezentovány 90 geny, z tohonereceptorové tyrosinové proteinkinázyjsou kódovány 32 geny. Členy čtyř rodin ty-rosinových fosfatáz v lidském genomu kódu-je 107 genů.Vzhledem k tomu, že abnorma-lity v tyrosinové fosforylaci hrají roli v pat-hogenesi řady dědičných i získaných lidskýchnemocí, od rakoviny až po imunitní nedosta-tečnost, je důležitá rovnováha mezi aktivitoutyrosinových proteinkináz a tyrosinovýchfosfatáz.. Mezi nejzajímavější nereceptorovétyrosinové proteinkinázy, patří rodina Srcproteinkináz, která má známých 11 členů,z nichž 8 se vyskytuje u člověka. Src proteina jeho substráty byly námětem také sympo-ziální přednášky „The Roles of Src and itsSubstrate Fish in Invasion“ (S. Courtneidge,Grand Rapids, USA), která představila nověidentifikované proteiny, obsahující ve svýchmolekulách SH2 a SH3 domény. Patří mezině adaptorový protein Fish s pěti SH3 do-ménami, který evidentně hraje důležitou roli v invazivitě karcinomů.
Tyrosinkinázovým receptorům byla vě-nována sympoziální přednáška „OncogenicReceptor Tyrosine Kinases: Signaling Mecha-nisms and Opportunities for Cancer Thera-py“(Y.Yarden, (Rehovot, Israel) a symposiálnípřednáška „Disecting the Mechanisms ofClathrin-Mediated Internalization of EGFReceptors by RNA Interference“ (A. Sorkin,Denver, USA). Vysoká aktivita signálníhokomplexu, tvořeného několika ErbB recep-tory s mnoha jejich ligandy, která byla zjiště-na v některých karcinomech a nádorechmozku a fakt, že odstranění ErbB proteinůz buněčného povrchu inhibuje jejich onko-genní aktivitu, vedlo k navržení protinádoro-vé terapie, která je zaměřena na tyto tyro-sinkinázové receptory.
Na deregulaci translace jako možný cílpro terapii nádorů, upozornil ve své sympo-ziální přednášce „Inducing the Selective Death of Cancer Cells in Vitro and in Vivo“
A. Levitzki (Jeruzalem, Izrael). Fosforylaceiniciačního faktoru eIF2 katalyzovaná prote-inkinázou PKR, která je aktivovaná dvouvlák-nitou RNA, může hrát významnou rolipři terapii nádorů, například vyvolaných zvýšenou expresí EGF receptorů. Podobněinformoval ve své přednášce „Sensitizationof Tumor Cells to Cisplatin-Induced Apo-ptosis by mTOR Dependent Inhibition ofGlobal Translation“ G. Thomas (Basel, Švý-carsko), jehož tým ve spolupráci s ústavempro biomedicínský výzkum firmy Novartiszjistil, že derivát inhibitoru mTOR, rapamyci-nu, RAD001, který je v klinickém testování,zvyšuje účinek chemoterapeutika, cisplatiny,provázený celkovou inhibicí translacemRNA.
Sympoziální přednáška „Regulation ofcell growth and division through the inte-gration of mTOR, PI3-kinase and Ras signa-ling (J. Blenis, Boston, USA) rovněž poukáza-la na důležité zapojení translačních regulač-ních efektorů signální dráhy mTOR,S6 kinázy a iniciačního faktoru eIF4E,do koordinace signálů pro buněčný růsta dělení.
Vědecký program vhodně doplňovalasymposia sponsorovaná firmami Biosourcea BD Biosciences na téma „Protein Phosp-horylation and Models of Disease“ a „Ana-lysis of Protein Phosphorylation and Cellu-lar Signalling Events by Flow Cytometry“,v nichž přednášející upozornili na možné vy-užití některých technik v klinice. Prostoryvýstavní haly byly vyhrazené nejen proplakátová sdělení (kolem 150 plakátů vysta-vených každý ze tří dnů), ale byly také obsa-zeny vystavovateli ze 26 firem, které se presentovaly na konferenci. Mezi jinými zde byly přítomni zástupci firem Alexis,Biochemicals, Bethyl Laboratories, Biacore,Biomol, Cell Signalling Technology, MolecularProbes, Qiagen, Sigma-RB1, Sigma-Aldrich,Upstate.
Na programu konference bylo také odměnění presentace deseti nejlepších mla-
90 � Bulletin 3
dých badatelů cenou, kterou sponsorovalčasopis Biochemical Journal.
V Montrealu bylo v době konání konfe-rence velmi příjemné počasí, a tak jsem mě-la možnost se seznámit také se zajímavýmmístním zvykem, a to pořádání koncertů po-pulární hudby, většinou šansonů (Montreal jenejvětším frankofonním městem Severní
Ameriky) přímo v ulicích města. Za tímtoúčelem se jednoduše v pozdních odpoled-ních hodinách uzavřelo pro dopravu několikulic a takto dočasně vytvořená pěší zóna by-la střežena samotnými organizátory těchtoletních akcí.
Zdena Tuháčková
Bulletin 3 � 91
Učená společnost České republiky
si Vás dovoluje pozvat na přednášku
doc. RNDr. Heleny Illnerové, DrSc.
„Zkracování dnů, podzimní blues
a biologické hodiny“Přednášku uvede a diskusi bude řídit prof. RNDr. Blanka Říhová, DrSc.,
místopředsedkyně Učené společnosti ČR
Přednáška se koná dne 9. listopadu 2004od 15.00 hod.
v místnosti č. 206 Kanceláře AV ČR, Národní tř. 3, Praha 1
Rada Učené společnosti ČR
92 � Bulletin 3
P O Z V Á N K AMasarykova univerzita v Brně
– Přírodovědecká fakultaČeská společnost pro biochemii
a molekulární biologii
Vás již tradičně zvou do Brna na pravidelné
IX. PRACOVNÍ SETKÁNÍ BIOCHEMIKŮ A MOLEKULÁRNÍCH BIOLOGŮ
jehož každoroční součástí je Sekce mladých– konference PGS v angličtině
Termín konání akce: 9. – 10. února 2005
Zájemci o bližší informace se mohou registrovat na http://orion.chemi.muni.cz/setkani
nebo e-mailem: [email protected]í informace a závazné přihlášky budou rozesílány v průběhu měsíce října.
Koordinátoři konference:
Dr. Michaela Wimmerová – Katedra biochemie, PřF MU, Kotlářská 2, 611 37 Brno,
tel.: 549498166, fax: 549492690, e-mail: [email protected]
Doc. Libuše Trnková – Katedra teoretické a fyzikální chemie, PřF MU, Kotlářská 2,
611 37 Brno,
tel.: 54497754, fax: 541211214, e-mail: [email protected]
Dr. Petr Beneš – Katedra genetiky a molekulární biologie, PřF MU, Kotlářská 2,
611 37 Brno,
tel.: 549493125, fax: 541211214,e-mail: [email protected]
Doc. Petr Zbořil – Katedra biochemie, PřF MU, Kotlářská 2, 611 37 Brno,
tel.: 549498249, fax: 549492690, e-mail: [email protected]
Bulletin 3 � 93
Katedra organické chemie PřF UP v Olomouci ve spolupráci
s Ústavem organické chemie a biochemie AV ČR
a Vydavatelstvím UP Olomouc
vydávají knihu
Doc. RNDr. Antonína Holého, Dr.Sc., Dr.h.c.
PRINCIPY BIOORGANICKÉ CHEMIE VE VÝVOJI ANTIVIROTIK A CY TOSTATIK
Kniha je určena jak studentům chemie, biologieči medicíny, tak i odborným pracovníkům v těch-to odvětvích. Na více než 400 stranách autorpopisuje nejen chemické reakce vedoucí k účin-ným cytostatikům či virostatikům, ale věnuje serovněž metabolismu normální, nádorové či virem zasažené buňky a principům účinku ak-tivních látek v těchto buňkách. Kniha je doplně-na více než 350 obrázky struktur účinných láteka schémat obsahujících jejich syntézy a dokres-lujících některé metabolické děje v normálníchi transformovaných buňkách.
Zájemci mohou získat podrobnější informacena http://studium.orgchem.upol.cz
94 � Bulletin 3
Bulletin 3 � 95
Dear Colleague,
It is my pleasure to announce the 31st FEBS Congress,
“Molecules in Health and Disease”,
that will be held between June 24 and 29, 2006 in Istanbul,Turkey. The Congress will be composed of five parallel
symposia (Signal Transduction, Enzyme, Gene and Stem CellTherapy, Molecular Basis of Disease, New Analytical and Diagnostic Tools, Challenges to Human Health).
There will be Young Scientist Forum, Women in Science, Ethics in Science, Biochemical Education Sessions
and Public Awareness Programs. The final program will be available soon.
The official website of the Congress is athttp://www.febs2006.org. We kindly ask you to visit
this address and pass this infofrmation to your members another colleaques whom you think might be interested.
We also would appreciate if you direct a link to the Congress website from your Society’s home page.
Yours faithfully,
Chairperson of the 31st FEBS Congress
Nazmi Ozer, Ph. D.
Urãeno pro vnitfiní potfiebu âSBMBV˘konn˘ redaktor: Tomislav Barth ÚOCHB, AVâR
tel.: 220 183 268Vychází 3 x roãnû
Sazba a tisk: grafické studio Venice Praha s.r.o.Bulletin ã. 3/2004 ze dne 22. 10. 2004
Evid. ãíslo: MK âR E 10260Toto ãíslo je hrazeno
z projektu RVS AVâR a âSBMBISSN 1211-2526
EMBL: http://www.embl-heidelberg.de/EMBO: http://www.embo.org/
FEBS: http://www.febs.unibe.ch/âSBMB: http://CSBMB.vscht.cz/
