LEUKOCYT DIFFERENTIATIE: INDICATIES VOOR MICROSCOPISCHE REVIEW.

LEUKOCYT DIFFERENTIATIE:LEUKOCYT DIFFERENTIATIE:

INDICATIES VOORINDICATIES VOOR

MICROSCOPISCHE REVIEWMICROSCOPISCHE REVIEW

SYSMEX-XE-2100SYSMEX-XE-2100TMTM


• Analyse van PLT en RBC: elektrische impedantiemeting

• Leukocyten worden behandeld met fluorochroom dat DNA en RNA bindt.

• Via hydrodynamische focussing worden WBC één voor één in eenmeetcel aangevoerd, waar lichtverstrooiing onder kleine hoek en onder hoek van 90° wordt gemeten evenals fluorescentie.Op een dotplot onderscheidt men 5 puntenwolken: debris van RBC - lymfo’s - mono’s - neutro’s + baso’s - eos

• Basofielen worden bepaald na specifieke lysis van de WBC in licht zuur midden, waarbij de basofielen als enige intacte cellen overblijven. Door lichtverstrooiingsmetingen onder kleine hoek en over 90° treft men de baso’s als een duidelijk afgescheiden populatie aan op de dotplot

DIFF-KANAALDIFF-KANAAL


• Analyse van PLT en RBC: elektrische impedantiemeting

• Leukocyten worden behandeld met fluorochroom dat DNA en RNA bindt.

• Via hydrodynamische focussing worden WBC één voor één in eenmeetcel aangevoerd, waar lichtverstrooiing onder kleine hoek en onder hoek van 90° wordt gemeten evenals fluorescentie.Op een dotplot onderscheidt men 5 puntenwolken: debris van RBC - lymfo’s - mono’s - neutro’s + baso’s - eos

• Basofielen worden bepaald na specifieke lysis van de WBC in licht zuur midden, waarbij de basofielen als enige intacte cellen overblijven. Door lichtverstrooiingsmetingen onder kleine hoek en over 90° treft men de baso’s als een duidelijk afgescheiden populatie aan op de dotplot

WBC / BASO- KANAALWBC / BASO- KANAAL

DIFF-KANAALDIFF-KANAAL

IMI-KANAALIMI-KANAAL

NRBC-KANAALNRBC-KANAAL

• lysis van RBC en NRBC lysis van RBC en NRBC d.m.v. surfactansd.m.v. surfactans

• geen lysis van WBCgeen lysis van WBC• fluorochroom kleurt fluorochroom kleurt

nucleïnezuren in WBC en nucleïnezuren in WBC en NRBCNRBC

• meting van lichtverstrooiing meting van lichtverstrooiing en fluorescentieen fluorescentie

• apart scattergramapart scattergram

SISSISdata management + validationdata management + validation

LISLIS

XE-2100XE-2100SP-100SP-100smear/stainsmear/stain

XE-2100XE-2100SP-100SP-100smear/stainsmear/stain

……

requestrequest

validatedvalidatedresultresult

requestrequest

requestrequest

resultresult

TRANSPORTING BELTTRANSPORTING BELT

reflexreflex

resultresult

EDTA-bloedEDTA-bloed

SYSMEX XE-2100SYSMEX XE-2100

validatiecriteriavalidatiecriteria

voldaanvoldaan

automatische validatieautomatische validatie

« data check fail »« data check fail »

FLOW-CHARTFLOW-CHART

VALIDATIECRITERIAVALIDATIECRITERIA

• Controle op referentie- en alertwaardenControle op referentie- en alertwaarden

• IP- flagging (interpretatieve flagging)IP- flagging (interpretatieve flagging)

• Validation rulesValidation rules

REFERENTIE- EN ALERTWAARDENREFERENTIE- EN ALERTWAARDEN

• Elk automatisch resultaat wordt getoetst, met uitsluiting van hemato-onco-eenhedenElk automatisch resultaat wordt getoetst, met uitsluiting van hemato-onco-eenheden

• ACTIES:ACTIES:- vergelijk met recent voorgaand resultaat indien beschikbaar- vergelijk met recent voorgaand resultaat indien beschikbaar- één enkele parameter?- één enkele parameter?- logische samenhang tussen correlerende parameters - logische samenhang tussen correlerende parameters behouden?behouden?- alleenstaand feit of niet-patiëntgebonden?- alleenstaand feit of niet-patiëntgebonden?- doorbelwaarden overschreden?- doorbelwaarden overschreden?

IP-FLAGGINGIP-FLAGGING• Parameters worden door SYSMEX XE-2100 hetzij niet beschikbaar gesteld, hetzij gemerkt als zijnde onbetrouwbaar Parameters worden door SYSMEX XE-2100 hetzij niet beschikbaar gesteld, hetzij gemerkt als zijnde onbetrouwbaar

• Op grond van mogelijke morfologische afwijkingenOp grond van mogelijke morfologische afwijkingen(interpretatie van gecombineerde meetgegevens)(interpretatie van gecombineerde meetgegevens)

• Instelling van gevoeligheid van IP-flagging gebaseerd op performantiestudie in labo Instelling van gevoeligheid van IP-flagging gebaseerd op performantiestudie in labo UZLEUVEN:UZLEUVEN:

« minimaal aantal vals positieven zonder pathologie te missen »« minimaal aantal vals positieven zonder pathologie te missen »

• In UZLEUVEN: RBC-IP-vlaggen niet geactiveerdIn UZLEUVEN: RBC-IP-vlaggen niet geactiveerd

• ACTIES:ACTIES:IP-gevlagde stalen worden automatisch uitgestreken en worden vervolgens microscopisch bekekenIP-gevlagde stalen worden automatisch uitgestreken en worden vervolgens microscopisch bekeken

VALIDATIE-RULESVALIDATIE-RULES• 13 supplementaire regels ingesteld in SIS13 supplementaire regels ingesteld in SIS

• Indien niet voldaan aan deze regels wordt het resultaat weerhouden van autovalidatieIndien niet voldaan aan deze regels wordt het resultaat weerhouden van autovalidatie

• Met betrekking tot:Met betrekking tot:- onwaarschijnlijke waarde voor MCV-MCH-MCHC- onwaarschijnlijke waarde voor MCV-MCH-MCHC- coherentie Hb & Hct- coherentie Hb & Hct- extreme waarden voor Hb, Hct of RBC- extreme waarden voor Hb, Hct of RBC- aanwezigheid van koude agglutinines (MCH – MCHC)- aanwezigheid van koude agglutinines (MCH – MCHC)- interferentie tussen PLT en RBC (MPV - #PLT)- interferentie tussen PLT en RBC (MPV - #PLT)- extreme waarden voor WBC of WBC differentiatie- extreme waarden voor WBC of WBC differentiatie- resultaten buiten gevalideerd meetbereik- resultaten buiten gevalideerd meetbereik

IS EEN EFFICIËNTERE WORKFLOW MOGELIJK?IS EEN EFFICIËNTERE WORKFLOW MOGELIJK?KUNNEN TIJD EN KOSTEN GESPAARD WORDEN?KUNNEN TIJD EN KOSTEN GESPAARD WORDEN?

Welke zijn de indicaties voor herhaalde WBC-differentiatie?Welke zijn de indicaties voor herhaalde WBC-differentiatie?(interval < 10d)(interval < 10d)

In welke gevallen heeft microscopische review van de door deIn welke gevallen heeft microscopische review van de door deanalyser bekomen (al dan niet gevlagde) resultaten meerwaarde?analyser bekomen (al dan niet gevlagde) resultaten meerwaarde?

Is er een plaats voor « smear scanning » i.p.v. manuele « herdiff »?Is er een plaats voor « smear scanning » i.p.v. manuele « herdiff »?

Is het voorschrijven van een minimaal tijdsinterval tussen 2 Is het voorschrijven van een minimaal tijdsinterval tussen 2 opeenvolgende manuele differentiaties verantwoord?opeenvolgende manuele differentiaties verantwoord?

1. INDICATIES VOOR HERHAALDE DIFF1. INDICATIES VOOR HERHAALDE DIFF

• Follow-up patiënten onder en na chemotherapieFollow-up patiënten onder en na chemotherapie

• Follow-up na stamceltransplantatieFollow-up na stamceltransplantatie

• Follow-up hematologische maligniteitFollow-up hematologische maligniteit

• Follow-up van HIV-patiëntenFollow-up van HIV-patiënten

• Monitoring van patiënten onder beenmergtoxische therapieMonitoring van patiënten onder beenmergtoxische therapie

• Follow-up van inflammatiereacties of infectiesFollow-up van inflammatiereacties of infecties

2. REVIEW CRITERIA2. REVIEW CRITERIA

• Geen gouden standaard of guideline, geen concrete literatuurgegevens

• Voornaamste beslissingsfactor: aard van patiëntenpopulatie / pathologie

• Pierre et al., 2002:- geen automatisch resultaat beschikbaar- analyser signaleert een mogelijke analytische fout (stolsel, …)- analyser vlag suggereert aanwezigheid van blasten, NRBC, atypische lymfocyten, immature granulocyten of linksverschuiving- laboratoriumspecifieke criteria (referentiewaarden)- klinische criteria (vb. patiënten van bepaalde eenheid)


• Blasts?Blasts?• Immature granulocytes?Immature granulocytes?• Atypical Lymphocytes?Atypical Lymphocytes?• Abnormal Lymphocytes / Abnormal Lymphocytes /

lymphoblasts?lymphoblasts?• NRBC?NRBC?• RBC agglutination?RBC agglutination?• RBC lyse resistanceRBC lyse resistance• Fragments?Fragments?• Platelet clumps?Platelet clumps?

• WBC Abnormal scattergramWBC Abnormal scattergram• RBC Abnormal scattergramRBC Abnormal scattergram• NRBC Abnormal scattergramNRBC Abnormal scattergram• PLT Abnormal scattergramPLT Abnormal scattergram• RET Abnormal scattergramRET Abnormal scattergram• Dimorphic populationDimorphic population• RBC Abnormal distributionRBC Abnormal distribution• PLT Abnormal distributionPLT Abnormal distribution• WBC < 2000/µlWBC < 2000/µl• DIFF %DIFF %

RULESRULES

46

31

1913

10 9 9 8 7 6 3 10,50,20,1

0

10

20

30

40

50

%

IMGRA

N

DIF

F%

WBC<2

WBCA

B

NRBC?

ABN

LYB

ATYPL

Y

PLT

CLS

BLA

STS

LEFTSH

FRA

GM

RBCA

BN

PLT

ABN

DIM

POP

RBCA

GG

REVI EW CRI TERI A


Blasts?Blasts?- pertinent: gevoelige flagging noodzakelijk (zelfs 1% mag niet gemist pertinent: gevoelige flagging noodzakelijk (zelfs 1% mag niet gemist

worden)worden)- manuele herdifferentiatiemanuele herdifferentiatie

Immature granulocytes?Immature granulocytes?

-- promyelocyten, myelocyten en metamyelocytenpromyelocyten, myelocyten en metamyelocyten- solitaire flag IMGRAN = 23.8 % van microscopische reviews - solitaire flag IMGRAN = 23.8 % van microscopische reviews - zeer subjectieve identificatie: grote inter-observer variabiliteit- zeer subjectieve identificatie: grote inter-observer variabiliteit- manuele differentiatie is aangewezenmanuele differentiatie is aangewezen

- - MaarMaar, mogelijkheid tot kwantificatie van IG a.h.v. XE-2100 IG Master , mogelijkheid tot kwantificatie van IG a.h.v. XE-2100 IG Master

softwaresoftware

IG-MASTER-MODULEIG-MASTER-MODULE


Atypical lymphocytes?Atypical lymphocytes?- geen objectief gedefinieerde celpopulatie (i.t.t. eosinofielen)geen objectief gedefinieerde celpopulatie (i.t.t. eosinofielen)- - geeft aanleiding tot grote inter-observer variabiliteitgeeft aanleiding tot grote inter-observer variabiliteit- - belangrijke bias van resultaat (kwantitatief) bij inzage van de reden belangrijke bias van resultaat (kwantitatief) bij inzage van de reden

van flaggingvan flagging manuele herdifferentiatie waarbij atypische lymfo’s tot de manuele herdifferentiatie waarbij atypische lymfo’s tot de

lymfopopulatie worden gerekend met semi-kwantitatieve rapportering lymfopopulatie worden gerekend met semi-kwantitatieve rapportering

Abnormal lymphocytes / lymphoblasts?Abnormal lymphocytes / lymphoblasts?

- - gevoelige flagging noodzakelijkgevoelige flagging noodzakelijk- - gebrekkige herkenning van lymfoblasten gebrekkige herkenning van lymfoblasten

door Sysmex XE-2100 is gekend probleemdoor Sysmex XE-2100 is gekend probleem- - manuele herdifferentiatiemanuele herdifferentiatie

2. REVIEW CRITERIA2. REVIEW CRITERIA NRBC?NRBC?

- Cave betrouwbaarheid van deze vlag: vals positieven + vals negatievenCave betrouwbaarheid van deze vlag: vals positieven + vals negatieven- - mogelijkheid tot kwantificatie op Sysmex XE-2100mogelijkheid tot kwantificatie op Sysmex XE-2100 reflextesting voor kwantificatie van NRBC op XE-2100 reflextesting voor kwantificatie van NRBC op XE-2100

NRBC Abnormal scattergram?NRBC Abnormal scattergram?

- - manuele differentiatie is aangewezen ter uitsluiting van NRBC – WBC-manuele differentiatie is aangewezen ter uitsluiting van NRBC – WBC-interferentieinterferentie

RBC Lyse resistanceRBC Lyse resistance-- Manuele differentiatie is aangewezen, niet-gelyseerde RBC kunnen Manuele differentiatie is aangewezen, niet-gelyseerde RBC kunnen

interfereren met het WBC scattergraminterfereren met het WBC scattergram

2. REVIEW CRITERIA2. REVIEW CRITERIA RBC agglutination?RBC agglutination?

- geen argumenten voor manuele herdifferentiatiegeen argumenten voor manuele herdifferentiatie-- ongeldige RBC parametersongeldige RBC parameters- - slide scanning + rapportering « RBC agglutinatie »slide scanning + rapportering « RBC agglutinatie »

Fragments?Fragments?

- - geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen interferentie geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen interferentie met met WBC-scattergramWBC-scattergram-- mogelijkheid tot automatische kwantificatie d.m.v. extra software modulemogelijkheid tot automatische kwantificatie d.m.v. extra software module

-- cave betrouwbaarheid van deze vlagcave betrouwbaarheid van deze vlag- - slide scanning: uitsluiten van interferentie met PLT-telling + eventueleslide scanning: uitsluiten van interferentie met PLT-telling + eventuele

rapportering « fragmentocytenexces »rapportering « fragmentocytenexces »- - werkpost cytologie beantwoordt gerichte vraag naar « opvolging werkpost cytologie beantwoordt gerichte vraag naar « opvolging fragmentocyten »fragmentocyten »

2. REVIEW CRITERIA2. REVIEW CRITERIA PLT clumps? / PLT abn scattergram? / PLT abn distribution?PLT clumps? / PLT abn scattergram? / PLT abn distribution?

- geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen interferentie geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen interferentie met met WBC-scattergram WBC-scattergram -- slide scanning ter uitsluiting van interferentie met RBC-telling + slide scanning ter uitsluiting van interferentie met RBC-telling +

eventuele rapportering « aanwezigheid van trombocytenaggregaten »eventuele rapportering « aanwezigheid van trombocytenaggregaten »

WBC Abnormal scattergramWBC Abnormal scattergram

- - manuele differentiatie is aangewezen, vermits celpopulaties mogelijks manuele differentiatie is aangewezen, vermits celpopulaties mogelijks verkeerd verkeerd werden geïdentificeerdwerden geïdentificeerd

RET Abnormal scattergramRET Abnormal scattergram- enkel indien reticulocytentelling werd aangevraagd (zeldzaam)- enkel indien reticulocytentelling werd aangevraagd (zeldzaam)- manuele differentiatie is aangewezenmanuele differentiatie is aangewezen

2. REVIEW CRITERIA2. REVIEW CRITERIA Dimorphic populationDimorphic population?

- geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen interferentie interferentie met WBC-scattergrammet WBC-scattergram-- belang? andere afwijkingen in RBC-morfologie belang? andere afwijkingen in RBC-morfologie (traancellen, Howel-jolly (traancellen, Howel-jolly

bodies, …)bodies, …) worden ook niet gerapporteerd worden ook niet gerapporteerd-- slide scanning ter uitsluiting van interferentie met PLT-tellingslide scanning ter uitsluiting van interferentie met PLT-telling

RBC abnormal distributionRBC abnormal distribution

- - geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen geen argumenten voor manuele differentiatie, vermits geen interferentie interferentie met WBC-scattergrammet WBC-scattergram- slide scanning ter uitsluiting van interferentie met PLT-tellingslide scanning ter uitsluiting van interferentie met PLT-telling

2. REVIEW CRITERIA2. REVIEW CRITERIAWBC < 2000/µl ?WBC < 2000/µl ? (solitaire vlag = 4.6 % van reviews)

- Wanneer een automatisch resultaat kan worden bekomen, is zeker bij Wanneer een automatisch resultaat kan worden bekomen, is zeker bij zulke cytose, deze differentiatie de meest precieze, accurate en zulke cytose, deze differentiatie de meest precieze, accurate en

reproduceerbare.reproduceerbare.« Automated differential counts are underutilized to assess samples with « Automated differential counts are underutilized to assess samples with low leukocyte counts; optimising the use of the automated method should low leukocyte counts; optimising the use of the automated method should solve many problems » solve many problems » (W. Finn, professor of pathology, Michigan)(W. Finn, professor of pathology, Michigan)

- - Systematisch schrappen van microscopische differentiatie bij stalen Systematisch schrappen van microscopische differentiatie bij stalen onder een bepaalde cytose, gaat ongetwijfeld gepaard met verlies aan onder een bepaalde cytose, gaat ongetwijfeld gepaard met verlies aan waardevolle informatie, zoals « zijn er aberrante cellen aanwezig? »waardevolle informatie, zoals « zijn er aberrante cellen aanwezig? »(cfr. Mayo Clinic: no manual differentials on samples with < 500 WBC/µl)(cfr. Mayo Clinic: no manual differentials on samples with < 500 WBC/µl)

- - Manuele differentiatie bij zeer lage cytose gebeurt op een dermate klein Manuele differentiatie bij zeer lage cytose gebeurt op een dermate klein aantal cellen dat kwantitatieve gegevens misleidend kunnen zijnaantal cellen dat kwantitatieve gegevens misleidend kunnen zijn(statistische imprecisie)(statistische imprecisie)

WBC PER SLI DE

y = 138,19x - 16,814

R2 = 0,9154

0102030405060708090

100110120

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1cytose (x103/ µl)

te d

iffer

enti

ëren

WB

C

WBC PER SLI DE

y = 138,19x - 16,814

R2 = 0,9154

0102030405060708090

100110120

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1cytose (x103/ µl)

te d

iffer

enti

ëren

WB

C

0.48

STATISTISCHE IMPRECISIE STATISTISCHE IMPRECISIE

RÜMKE, C.L.RÜMKE, C.L.

100 200 500 1000 10000

0 0 - 3.6 0 - 1.8 0 - 0.7 0 - 0.4 0 - 0.11 0 - 5.4 0.1 - 3.6 0.3 - 2.3 0.5 - 1.8 0.8 - 1.32 0.2 - 7.0 0.6 - 5.0 1.0 - 3.6 1.2 - 3.1 1.7 - 2.33 0.6 - 8.5 1.1 - 6.4 1.7 - 4.9 2.0 - 4.3 2.6 - 3.44 1.1 - 9.9 1.7 - 7.7 2.5 - 6.1 2.9 - 5.4 3.6 - 4.55 1.6 - 11.3 2.4 - 9.0 3.3 - 7.3 3.7 - 6.5 4.5 - 5.56 2.2 - 12.6 3.1 - 10.2 4.1 - 8.5 4.6 - 7.7 5.5 - 6.57 2.9 - 13.9 3.9 - 11.5 4.9 - 9.6 5.5 - 8.8 6.5 - 7.68 3.5 - 15.2 4.6 - 12.7 5.8 - 10.7 6.4 - 9.9 7.4 - 8.69 4.2 - 16.4 5.4 - 13.9 6.6 - 11.9 7.3 - 10.9 8.4 - 9.610 4.9 - 17.6 6.2 - 15.0 7.5 - 13.0 8.2 - 12.0 9.4 - 10.715 8.6 - 23.5 10.4 - 20.7 12.0 - 18.4 12.8 - 17.4 14.3 - 15.820 12.7 - 29.2 14.7 - 26.2 16.6 - 23.8 17.6 - 22.6 19.2 - 20.825 16.9 - 34.7 19.2 - 31.6 21.3 - 29.0 22.3 - 27.8 24.1 - 25.930 21.2 - 40.0 23.7 - 36.9 26.0 - 34.2 27.2 - 32.9 29.1 - 31.035 25.7 - 45.2 28.4 - 42.0 30.8 - 39.4 32.0 - 38.0 34.0 - 36.040 30.3 - 50.3 33.2 - 47.1 35.7 - 44.4 36.9 - 43.1 39.0 - 41.045 35.0 - 55.3 38.0 - 52.2 40.6 - 49.5 41.9 - 48.1 44.0 - 46.050 39.8 - 60.2 42.9 - 57.1 45.5 - 54.5 46.9 - 53.1 49.0- 51.060 49.7 - 69.7 52.9 - 66.8 55.6 - 64.3 56.9 - 63.1 59.0 - 61.070 60.0 - 78.8 63.1 - 76.3 65.8 - 74.0 67.1 - 72.8 69.0 - 70.980 70.8 - 87.3 73.8 - 85.3 76.2 - 83.4 77.4 - 82.4 79.2 - 80.890 82.4 - 95.1 85.0 - 93.8 87.0 - 92.5 88.0 - 91.8 89.3 - 90.6

100 96.4 - 100 98.2 - 100 99.3 - 100 99.6 - 100 99.9 - 100

Aantal gedifferentiëerde cellenResultaat (%)

Verwacht resultaat

RÜMKE, C.L.RÜMKE, C.L.

STATISTISCHE IMPRECISIE STATISTISCHE IMPRECISIE

100 200 500 1000 10000

Aantal gediff erentiëerde cellen

Verwacht resultaat

50 39,8 - 60,2 42,9 - 57,1 45,5 - 54,5 46,9 - 53,1 49,0 - 51,020 12.7 - 29.2 14.7 - 26.2 16.6 - 23.8 17.6 - 22.6 19.2 - 20.8

80 70,8 - 87,3 73,8 - 85,3 76,2 - 83,4 77,4 - 82,4 79,2 - 80,8

5 1,6 - 11,3 2,4 -10,2 3,3 - 7,3 3,7 - 6,5 4,5 - 5,5

2. REVIEW CRITERIA2. REVIEW CRITERIA WBC < 2000/µl ?WBC < 2000/µl ?

- uitvoeren van een buffy coat bij zeer lage cytose zou de workload en uitvoeren van een buffy coat bij zeer lage cytose zou de workload en TAT aanzienlijk verhogen; bovendien bestaan er geen referentie- TAT aanzienlijk verhogen; bovendien bestaan er geen referentiewaarden voor zulk een staalmanipulatie.waarden voor zulk een staalmanipulatie.

-- Semi-kwantitatieve rapportering kan een aanvaardbaar alternatief zijnSemi-kwantitatieve rapportering kan een aanvaardbaar alternatief zijnbij lage cytosebij lage cytose

DIFF %DIFF %- - Neu% < 10, Neu% > 95; Lymf% < 5, Lymf% > 70; Mono% > 20; Neu% < 10, Neu% > 95; Lymf% < 5, Lymf% > 70; Mono% > 20;

EO% > 20; Baso% > 5EO% > 20; Baso% > 5

-- manuele differentiatie is aangewezenmanuele differentiatie is aangewezen- - ook voor hemato-oncologie eenheden dient de toepassing te worden ook voor hemato-oncologie eenheden dient de toepassing te worden

overwogenoverwogen

3. SMEAR SCANNING3. SMEAR SCANNING• Lantis Lantis et al.,et al., 2003 2003

-- bepaalde vlaggen worden bij voorkeur door slide scanning gecheckt:bepaalde vlaggen worden bij voorkeur door slide scanning gecheckt:

* RBC-parameters* RBC-parameters* eosinofilie (>1500/µl)* eosinofilie (>1500/µl)* NRBC?* NRBC?* immature granulocyten? (bij leukocytose <15000/µl)* immature granulocyten? (bij leukocytose <15000/µl)* leukocytose (> 50000/µl)* leukocytose (> 50000/µl)

-- Enkel bij aantreffen van aberrante celpopulaties of discordantie met Enkel bij aantreffen van aberrante celpopulaties of discordantie met automatische telling, wordt microscopische diff uitgevoerd.automatische telling, wordt microscopische diff uitgevoerd.

-- geen concrete richtlijnen voor uitvoering, rekenen op professionaliteit geen concrete richtlijnen voor uitvoering, rekenen op professionaliteit van laboratoriumtechnoloog. Administratief tijdbesparend.van laboratoriumtechnoloog. Administratief tijdbesparend.

-- impact: TATimpact: TAT, rapportering van meer accurate diff (automatische), rapportering van meer accurate diff (automatische)

3. SMEAR SCANNING3. SMEAR SCANNING• Chapman Chapman et al.,et al., 2003 2003

-- meest toegepast in labo’s met hoge review ratio (hematologische centra)meest toegepast in labo’s met hoge review ratio (hematologische centra)

-- verschillende uitvoeringswijzen mogelijk, geen afspraken omtrent verschillende uitvoeringswijzen mogelijk, geen afspraken omtrent minimaal te bekijken aantal cellen (technologist discretion).minimaal te bekijken aantal cellen (technologist discretion).

• university hospital Michiganuniversity hospital Michigan »All flagged samples are first manually screened by a technologist to »All flagged samples are first manually screened by a technologist to assess the need (or lack of need) to perform a manual count »assess the need (or lack of need) to perform a manual count »

• Massachusetts general hospitalMassachusetts general hospital“review but not rediff” mode: technologists review the flagged slide well, “review but not rediff” mode: technologists review the flagged slide well, paying particular attention to the flagged items. If their inspection is in paying particular attention to the flagged items. If their inspection is in keeping with the automated differential, no manual differential is performed. keeping with the automated differential, no manual differential is performed. By doing so, only 25% of the 44% of samples that require review, have to be By doing so, only 25% of the 44% of samples that require review, have to be truely diffed.”truely diffed.”

3. SMEAR SCANNING3. SMEAR SCANNING• Mayo ClinicMayo Clinic

« we have looked at scanning and do use it for high neutrophils (>13000/µl), « we have looked at scanning and do use it for high neutrophils (>13000/µl), but I am a bit leary about scanning other flags - justbut I am a bit leary about scanning other flags - just wary of missing wary of missing something important »something important »

• UZA / UZ GENTUZA / UZ GENTslide scanning wordt steeds toegepast voor RBC en PLT vlaggen, niet slide scanning wordt steeds toegepast voor RBC en PLT vlaggen, niet voor de overige.voor de overige.

CONCLUSIECONCLUSIE::

- geen eenduidig standpunt te destilleren uit - geen eenduidig standpunt te destilleren uit de verschillende bronnende verschillende bronnen

- RBC en PLT vlaggen dragen in UZ LEUVEN niet voor 50% bij- RBC en PLT vlaggen dragen in UZ LEUVEN niet voor 50% bij

- review ratio in UZ LEUVEN < 44%- review ratio in UZ LEUVEN < 44%

4. MINIMUM INTER-DIFF TIJDSINTERVAL4. MINIMUM INTER-DIFF TIJDSINTERVAL• Brecher et al., 1980Brecher et al., 1980

- - dagelijkse diff voor opvolging van absoluut aantal neutrofielen (ANC)dagelijkse diff voor opvolging van absoluut aantal neutrofielen (ANC)

kent geen indicatieskent geen indicaties-- in 99% van de gevallen is # WBC een goede weerspiegeling van in 99% van de gevallen is # WBC een goede weerspiegeling van ANCANC-- voorstel: intiële diff + herhaling na 24 – 48u, vervolgens om de 48 u voorstel: intiële diff + herhaling na 24 – 48u, vervolgens om de 48 u

bepaling van # WBC; enkel bij significante wijziging van # WBC: bepaling van # WBC; enkel bij significante wijziging van # WBC: diffdiff

• Shapiro et al., 1987Shapiro et al., 1987-- in niet of mild leukopene patiënten met stabiele leukocytose volstaat in niet of mild leukopene patiënten met stabiele leukocytose volstaat

nagenoeg altijd één diff per weeknagenoeg altijd één diff per week-- bij chemopatiënten of instabiele leukocytose kan dagelijkse diff bij chemopatiënten of instabiele leukocytose kan dagelijkse diff waardevol zijn, als het klinisch beslissingsproces wordt beïnvloed.waardevol zijn, als het klinisch beslissingsproces wordt beïnvloed.

• Chapman et al., 1997Chapman et al., 1997- delta check ter eliminatie van overbodige reviews (als verschil < 10%)- delta check ter eliminatie van overbodige reviews (als verschil < 10%)- gehospitaliseerde patient: - gehospitaliseerde patient: T = 72u, ambulanten: T = 72u, ambulanten: T = 7dT = 7d

4. MINIMUM INTER-DIFF TIJDSINTERVAL4. MINIMUM INTER-DIFF TIJDSINTERVAL

UZAUZAInterval = 24u Interval = 24u

Diff wordt automatisch geannuleerd bij Diff wordt automatisch geannuleerd bij T < 24uT < 24u

UZ GENTUZ GENT Geen intervalGeen interval

John HopkinsJohn Hopkins

HospitalHospital

Non-hematology / oncology patient: Non-hematology / oncology patient: T = 24uT = 24u

Hematology / Oncology patient: no restrictionHematology / Oncology patient: no restriction

Mayo ClinicMayo ClinicOnly one diff is provided per day, for subsequent Only one diff is provided per day, for subsequent samples within the same 24 h: diff is deleted, samples within the same 24 h: diff is deleted, CBC is reportedCBC is reported

University University Hospital MichiganHospital Michigan

Currently no restrictionsCurrently no restrictions

« De meeste moderne celtellers zijn actueel in staat –binnen « De meeste moderne celtellers zijn actueel in staat –binnen

enkele minuten- tegelijk met het leukocytenaantal een estimatie te enkele minuten- tegelijk met het leukocytenaantal een estimatie te

geven van het relatieve aantal granulocyten, eosinofielen, geven van het relatieve aantal granulocyten, eosinofielen,

basofielen, lymfocyten en monocytaire of daarop gelijkende cellen.basofielen, lymfocyten en monocytaire of daarop gelijkende cellen.

Een solitaire leukocytenbepaling zonder formule hoort dan ook Een solitaire leukocytenbepaling zonder formule hoort dan ook

weinig of niet meer gebruikt te worden.weinig of niet meer gebruikt te worden. » »

Geen eenduidigheid omwille van zeer uiteenlopende Geen eenduidigheid omwille van zeer uiteenlopende patiëntenpopulatiespatiëntenpopulaties

Taak van het labo: clinici attent maken op probleem van Taak van het labo: clinici attent maken op probleem van repeat testingrepeat testing

Mits grondig overleg met clinici lijkt 24u een Mits grondig overleg met clinici lijkt 24u een aanvaardbaar universeel toepasbaar tijdsintervalaanvaardbaar universeel toepasbaar tijdsinterval

4. MINIMUM INTER-DIFF TIJDSINTERVAL4. MINIMUM INTER-DIFF TIJDSINTERVAL

CONCLUSIECONCLUSIE

26718

12242

5082

164

30342

14114

5592

178

27600

12645

4812

158

0

5000

10000

15000

20000

25000

30000

35000

f ebruari maart april

WBC-telling

DI FF Sysmex

DI FF microsc.

cyt. Onderzoek(PB)

AANTAL UITGEVOERDE ANALYSESAANTAL UITGEVOERDE ANALYSES

0,0

2,0

4,0

6,0

8,0

10,0

12,0

%

EENHEI D

AANTAL UITGEVOERDE DIFFS AANTAL UITGEVOERDE DIFFS

FEBRUARI 2004FEBRUARI 2004

409595

616

612

302

AANTAL UITGEVOERDE DIFFS AANTAL UITGEVOERDE DIFFS

0,0

2,0

4,0

6,0

8,0

10,0

12,0

14,0

%

409

595

616

612

302

636

650

630

321

631

341

652

662

435

305

632

440

467

511

641

443

910

445

651

331

442

446

and

EENHEID

MAART 2004MAART 2004409

595

616

612

302

GEGEVENS FEB-MAART-APRIL 2004GEGEVENS FEB-MAART-APRIL 2004

Bij 64.3 % van WBC-tellingen wordt tevens formule Bij 64.3 % van WBC-tellingen wordt tevens formule gevraagdgevraagd

Review ratio = 28.4 %Review ratio = 28.4 % 28.7 % van de microscopische reviews gebeurt op stalen 28.7 % van de microscopische reviews gebeurt op stalen

van patiënten waarbij in de voorbije 48 u reeds een van patiënten waarbij in de voorbije 48 u reeds een review gebeurdereview gebeurde

9.0 % van de microscopische reviews gebeurt op stalen 9.0 % van de microscopische reviews gebeurt op stalen van patiënten waarbij in de voorbije 24u reeds een van patiënten waarbij in de voorbije 24u reeds een review gebeurdereview gebeurde

PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS MET INTERVAL < 24uMET INTERVAL < 24u

15,4

12,9

2,3 2,34,4 3,2

5,3

11,3

4,42,8

5,5

30,2

0

5

10

15

20

25

30

35 FEBRUARI 2004FEBRUARI 2004

EenheidEenheid

PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS MET INTERVAL < 24uMET INTERVAL < 24u

2,5

24,5

15,5

3,8 5,0 5,2 5,6 5,6 4,0

28,2

0,0

5,0

10,0

15,0

20,0

25,0

30,0MAART 2004

PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS MET INTERVAL <48uMET INTERVAL <48u

11,1

8,1

12,7

4,8 3,23,7

13,0

5,5 5,3 5,1

27,5

0

5

10

15

20

25

30

EenheidEenheid

FEBRUARI 2004FEBRUARI 2004

26,2

2,52,22,22,3

5,03,0

15,2

2,7

6,54,2

12,1

15,9

0,0

5,0

10,0

15,0

20,0

25,0

30,0MAART 2004MAART 2004

PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS PROCENTUEEL AANDEEL IN TOTAAL # DIFFS MET INTERVAL <48uMET INTERVAL <48u

WHAT IS THE COST OF DOING A DIFF?WHAT IS THE COST OF DOING A DIFF?OR OR

WHAT IS THE COST OF NOT DOING ONE?WHAT IS THE COST OF NOT DOING ONE?

ANALYSEANALYSEKOSTKOST

(boordtabellen)NOMENCLATUURNOMENCLATUUR

7171 Hemoglobine Hemoglobine € 0.58 B40

7272 RBC-telling + Hct RBC-telling + Hct € 1.16 B40

7474 WBC-telling WBC-telling € 0.58 B40

8080 trombocytentelling trombocytentelling € 0.58 B40

8686 WBC differentiatie WBC differentiatie€ 1.09 (autom.) B80*

€ 5.38 (micr.) B80*

8383 cytologisch onderzoek PB cytologisch onderzoek PB € 27.86 B80*

TO DO …TO DO … Overleg met clinici (vnl. diensten pediatrie, hematologie en interne Overleg met clinici (vnl. diensten pediatrie, hematologie en interne geneeskunde ) omtrent desiderata en haalbaarheid van wijzigingen geneeskunde ) omtrent desiderata en haalbaarheid van wijzigingen

in het huidige review systeem.in het huidige review systeem. schrappen van zinloze microscopische herdifferentiaties en schrappen van zinloze microscopische herdifferentiaties en

vervanging door de voorgestelde acties bij volgende flaggings:vervanging door de voorgestelde acties bij volgende flaggings:- PLT clumps? - PLT clumps? ((5.15.1 % van de reviews) % van de reviews)

- Fragments? - Fragments? ((1.01.0 % van de reviews) % van de reviews)

- RBC and PLT Abnormal Scattergram - RBC and PLT Abnormal Scattergram ((0.30.3 % + < % + <0.10.1 % van de reviews) % van de reviews)

- Dimorphic population - Dimorphic population (uiterst zeldzaam)(uiterst zeldzaam)

- RBC Agglutination - RBC Agglutination (<0.1(<0.1 % van de reviews) % van de reviews)

Evaluatie van automatische Evaluatie van automatische EExtended xtended DDifferential ifferential LLeukocyte eukocyte CCountountop Sysmex XE-2100 m.b.v. extra sofware modules voor immature op Sysmex XE-2100 m.b.v. extra sofware modules voor immature

granulocyten en NRBCgranulocyten en NRBC

XVII INTERNATIONAL SYMPOSIUM, 13th- 15th may 2004XVII INTERNATIONAL SYMPOSIUM, 13th- 15th may 2004

AbstractsAbstracts

« up until now , each lab had their own criteria for reviewing and « up until now , each lab had their own criteria for reviewing and validating their samples. A fairly large disparity existed among labs, from validating their samples. A fairly large disparity existed among labs, from

the ones validating almost everything to those that hardly validated the ones validating almost everything to those that hardly validated anything. A group of internationally renowned hematologists from 6 anything. A group of internationally renowned hematologists from 6 different countries as well as individuals with expertise in hematology lab different countries as well as individuals with expertise in hematology lab

met in 2001 with the intent to establish a consensus guide for rules and met in 2001 with the intent to establish a consensus guide for rules and validation criteria for CBC/ DIFF. The intent was to reduce manualvalidation criteria for CBC/ DIFF. The intent was to reduce manualsample reviews without jeopardizing the useful information for the sample reviews without jeopardizing the useful information for the clinician.clinician.A preliminary review of the data demonstrates excellent correlation A preliminary review of the data demonstrates excellent correlation between different hospitals as well as a very low number of false positives between different hospitals as well as a very low number of false positives and negatives when applying these rules. Once these studies have been and negatives when applying these rules. Once these studies have been completed, they will be published in an international magazine with the completed, they will be published in an international magazine with the purpose of obtaining feedback as well as improving the review systems purpose of obtaining feedback as well as improving the review systems presently being used by different labs »presently being used by different labs »

Ochard Software News LetterOchard Software News LetterWinter 2004Winter 2004

LEUKOCYT DIFFERENTIATIE: INDICATIES VOOR MICROSCOPISCHE REVIEW.

Documents

Transcript of LEUKOCYT DIFFERENTIATIE: INDICATIES VOOR MICROSCOPISCHE REVIEW.