Test zum gleichzeitigen Nachweis von Dengue NS1 Ag & IgG/IgM

Dengue NS1 Ab Combo (11FK45, 11FK46)Dengue Duo

Über den Test[Einführung] Dengue-Viren werden durch Stechmücken der Gattung Aedes aegypti und Aedes albopictus übertragen und sind in den tropischen und subtropischen Gebieten der Welt weit verbreitet. Dengue ist infolge der hohen Erkrankungs- und Sterberate bei Menschen eine bedeutende, durch Arthropoden übertragene Viruskrankheit. Vier verschiedene Serotypen sind bekannt: Dengue-Virus 1, 2, 3 und 4. Bei Kindern nimmt die Infektion häufig einen subklinischen Verlauf oder verursacht eine selbstlimitierte Fiebererkrankung. Wenn der Patient jedoch mit einem anderen Serotyp erneut infiziert wird, erhöht sich das Risiko für eine schwerwiegendere Erkrankung, wie beispielsweise hämorrhagisches Denguefieber oder Dengue-Schock-Syndrom. Das NS1-Antigen ist ein hoch konserviertes Glykoprotein, das bei mit Dengue infizierten Patienten während der frühen klinischen Phase der Erkrankung in hohen Konzentrationen im Serum vorliegt. Das NS1-Antigen wird in Proben von primär oder sekundär mit dem Dengue-Virus infizierten Patienten zwischen 1 und 9 Tage nach dem Einsetzen von Fieber vorgefunden. IgM wird normalerweise erst 5 bis 10 Tage nach dem Einsetzen der Erkrankung bei primären Dengue-Infektionen und 4 bis 5 Tage nach dem Einsetzen der Erkrankung bei sekundären Infektionen nachweisbar. Bei primären Infektionen tritt IgG innerhalb der ersten 14 Tage auf und bleibt auf Lebenszeit erhalten. Bei sekundären Infektionen steigt der IgG-Spiegel für 1 bis 2 Tage nach dem Einsetzen der Symptome und eine IgM-Reaktion wird 20 Tage nach der Infektion induziert.[Prinzip] Der SD BIOLINE Dengue Duo-Schnelltest enthält zwei immunchromatografische In-vitro-Assays zur Analyse einer Dengue-Infektion in menschlichem Serum, Plasma oder Vollblut (linke Seite: Dengue NS1 Ag-Assay; rechte Seite: Dengue IgG/IgM-Assay). Der Dengue NS1-Antigen-Schnelltest ist ein hochempfindlicher und spezifischer Ein-Schritt-Assay für den qualitativen Nachweis des Dengue-Virus-NS1-Antigens. Wenn die Probe in die Probenmulde gegeben wird, reagiert das in der Probe vorhandene NS1-Antigen mit monoklonalen Maus-Anti-Dengue Ab-kolloidalen Goldkonjugaten und bildet einen Komplex aus Antikörpern und Antigen. Während dieser Komplex per Chromatografie im Testgerät migriert, wird er von immobilisierten Antikörpern erfasst und erzeugt eine gefärbte Testlinie neben dem „T“ (NS1-Antigen-Testlinie). Eine zweite Linie dient der Verfahrenskontrolle und sollte immer neben dem „C“ (Kontrolllinie) erscheinen, wenn das Testverfahren korrekt durchgeführt wird und die aktiven Bestandteile der Hauptkomponenten auf dem Streifen ordnungsgemäß funktionieren. Wenn das Dengue-Virus-NS1-Antigen in der Probe vorliegt, erscheinen sowohl die Kontrolllinie („C“) als auch die Testlinie („T“) im Ergebnisfenster und weisen auf ein positives Ergebnis hin. Bei Proben, die kein NS1-Antigen oder NS1-Antigen unter der Nachweisgrenze enthalten, erscheint nur die Kontrolllinie („C“), was ein negatives Ergebnis anzeigt. Der Dengue IgG/IgM-Schnelltest ist ein qualitativer Assay für den differenzierten Nachweis von IgG- und IgM-Antikörpern gegen das Dengue-Virus. Dieser Test weist Antikörper gegen alle vier Dengue-Serotypen mithilfe einer Mischung aus rekombinanten Dengue-Hüllproteinen nach. Wenn die Probe in die Probenmulde gegeben wird, reagieren das in der Probe vorhandene Anti-Dengue-IgG und -IgM mit den rekombinanten Dengue-Virus-Hüllproteinen-kolloidalen Goldkonjugaten und bilden einen Komplex aus Antikörpern und Antigen. Während dieser Komplex per Chromatografie im Testgerät migriert, wird er von immobilisiertem anti-humanen IgG und/oder anti-humanen IgM erfasst und erzeugt zwei gefärbte Testlinien neben dem „G“ (Dengue IgG-Testlinie) und/oder „M“ (Dengue IgM-Testlinie). Eine dritte Linie dient der Verfahrenskontrolle und sollte immer neben dem „C“ (Kontrolllinie) erscheinen, wenn das Testverfahren korrekt durchgeführt wird und die aktiven Bestandteile der Hauptkomponenten auf dem Streifen funktionieren. Wenn Dengue-Antikörper in der Probe vorliegen, erscheinen sowohl die Kontrolllinie („C“) als auch die Testlinie („G“ und/oder „M“) im Ergebnisfenster und weisen auf ein positives Ergebnis hin. Bei Proben, die kein Dengue IgG/IgM („G“/„M“) enthalten oder diese Antikörper unter der Nachweisgrenze des Assays enthalten, erscheint nur die Kontrolllinie („C“), was ein negatives Ergebnis anzeigt.[Verwendungszweck] Der SD BIOLINE Dengue Duo-Schnelltest ist ein immunchromatografischer In-vitro-Assay in einem Schritt, der zum Nachweis von Dengue-Virus-NS1-Antigenen sowie IgG- und IgM-Antikörpern gegen das Dengue-Virus in humanem Serum, Plasma oder Vollblut entwickelt wurde. Dieser Test ist für die professionelle Verwendung zur Unterstützung einer Verdachtsdiagnose auf primäre und sekundäre Dengue-Infektionen vorgesehen. Der SD BIOLINE Dengue Duo liefert nur ein vorläufiges Testergebnis. Es müssen spezifische alternative Diagnosemethoden eingesetzt werden, um eine Dengue-Virusinfektion zu bestätigen. Das kann die Isolierung des Virus, den Antigennachweis in fixiertem Gewebe, eine RT-PCR und serologische Tests wie beispielsweise Hämagglutinationshemmung umfassen.

Im Lieferumfang enthaltene Materialien und aktive Bestandteile der Hauptkomponenten1. Das SD BIOLINE Dengue Duo-Kit enthält die folgenden Testkomponenten zur Durchführung des Assays:

Komponenten Art.-Nr. 11FK45 Art.-Nr. 11FK46Dengue NS1 Ag- und Dengue IgG/IgM-Kombinationsgerät, einzeln im Beutel mit Trockenmittelbeutel verpackt 10 25Testverdünner für den Dengue IgG/IgM-Test 1 x 3ml 1 x 5mlKapillarpipetten für den Dengue IgG/IgM-Test (10 μl) 10 25Einweg-Tropfer für den Dengue NS1 Ag-Test 10 25Gebrauchsanweisung 1 1

2. Aktive Bestandteile der Hauptkomponenten• [Dengue NS1 Ag]

1 Teststreifen enthält: Goldkonjugat: Monoklonales Maus-Anti-Dengue NS1 – Goldkolloid (0,27 ± 0,05 μg), Testlinie: Monoklonales Maus-Anti-Dengue NS1 (0,72 ± 0,14 μg), Kontrolllinie: Ziegen-Anti-Maus-IgG (0,72 ± 0,14 μg)

• [Dengue IgG/IgM]1 Teststreifen enthält: Goldkonjugat: Rekombinantes Dengue-Virus-Hüllprotein – Goldkolloid (1,0 ± 0,2 μg), Testlinie G: Monoklonales anti-humanes Maus-IgG (5 ± 1 μg), Testlinie M: Monoklonales anti-humanes Maus-IgM (5 ± 1 μg), Kontrolllinie: Kaninchen-Anti-Dengue-IgG (2,5 ± 0,5 μg)

• Der Testverdünner beinhaltet:100 mM Phosphatpuffer (q.s.), Natriumazid (0,01 Gew.-Vol. %)

Lagerung und Stabilität des Kits1. Das Testgerät reagiert empfindlich auf Wärme sowie auf Luftfeuchtigkeit und muss ordnungsgemäß verwendet und gelagert werden.• Das Testkit bei 1 °C bis 30 °C lagern. Kit oder Komponenten nicht einfrieren oder hohen Temperaturen aussetzen.• Vor der Verwendung des Tests die Feuchtigkeitsanzeige des Trockenmittels im Beutel auf eine Farbänderung überprüfen. Das Gerät entsorgen, wenn die

Feuchtigkeitsanzeige GRÜN ist. Das Gerät nur dann verwenden, wenn die Feuchtigkeitsanzeige GELB ist.• Der Test ist unmittelbar nach Entnahme des Testgeräts aus der Folienverpackung durchzuführen, um eine Einwirkung von Feuchtigkeit zu vermeiden.2. Das Kit oder seine Komponenten nach dem Verfallsdatum nicht mehr verwenden.3. Das Gerät nicht verwenden, wenn der Beutel oder die Versiegelung beschädigt sind.

Warnhinweise1. Nur für die professionelle In-vitro-Diagnostik. Testgerät und Kitkomponenten nicht wiederverwenden.2. Für korrekte Ergebnisse müssen die Anweisungen genau befolgt werden. Jede Person, die mit diesem Produkt einen Test durchführt, muss in dessen Anwendung

geschult und mit Laborverfahren vertraut sein.3. Beim Umgang mit Proben nicht essen oder rauchen.4. Bei der Arbeit mit Proben Schutzhandschuhe tragen und anschließend gründlich die Hände waschen.5. Verspritzen oder Aerosolbildung der Probe und des Testverdünners vermeiden.6. Verschüttetes Material gründlich mit einem geeigneten Desinfektionsmittel beseitigen.7. Sämtliche Proben, Reaktionskits und möglicherweise kontaminierte Materialien (d.h. Probenapplikator, Testgerät) in einem Behälter für biologisch gefährlichen

Abfall dekontaminieren und entsorgen und wie infektiösen Abfall behandeln.

Probenentnahme und -lagerungVollblut• Vollblut mittels Venenpunktion entnehmen und in einem Probenröhrchen (das Antikoagulanzien wie Heparin, EDTA oder Natriumcitrat enthält) sammeln.

Achtung: Kein Kapillarblut verwenden.• Wenn die Blutproben nicht sofort analysiert werden, müssen sie bei 2 °C bis 8 °C gelagert werden.• Bei 2 °C bis 8 °C gelagerte Blutproben müssen innerhalb von 3 Tagen getestet werden.

• Zur Vermeidung unspezifischer Reaktionen keine Blutproben verwenden, die länger als 3 Tage gelagert wurden.• Proben sollten vor der Verwendung auf Raumtemperatur (15 °C bis 30 °C) gebracht werden.Plasma oder Serum• [Plasma] Vollblut mittels Venenpunktion entnehmen und in einem Probenröhrchen (das Antikoagulanzien wie Heparin, EDTA oder Natriumcitrat enthält) sammeln.

Dann das Probenröhrchen zentrifugieren, um eine Plasmaprobe zu erhalten.• [Serum] Vollblut mittels Venenpunktion entnehmen und in einem Probenröhrchen (das KEINE Antikoagulanzien enthält) sammeln. Blut 30 Minuten lang

koagulieren lassen und dann das Probenröhrchen zentrifugieren, um einen Serumüberstand zu erhalten.• Wenn Plasma- oder Serumproben nicht umgehend getestet werden, müssen sie bei 2 °C bis 8 °C gekühlt gelagert werden. Bei Lagerung über mehr als 2 Wochen

müssen die Proben eingefroren werden (unter –20 °C). Proben müssen vor der Verwendung auf Raumtemperatur (15 °C bis 30 °C) gebracht werden.• Plasma- oder Serumproben, bei denen sich Ablagerungen gebildet haben, können zu uneinheitlichen Testergebnissen führen. Standardlabormethoden verwenden,

um solche Proben vor dem Test zu klären.Vorsichtshinweise• Proben sollten nicht wiederholt eingefroren und aufgetaut werden.• Antikoagulanzien wie Heparin, EDTA und Citrat beeinflussen das Testergebnis nicht. Die Verwendung anderer Antikoagulanzien wurde nicht validiert. Ihre

Verwendung kann das Testergebnis beeinträchtigen.• Für jede Probe einen neuen Einweg-Tropfer oder eine neue Pipettenspitze verwenden, um eine Kreuzkontamination der Proben zu vermeiden, die zu fehlerhaften

Ergebnissen führen könnte.

Testdurchführung (siehe Abbildung)• Vor dem Öffnen und Durchführen des Tests müssen alle Kitkomponenten und Proben Raumtemperatur (zwischen 15 °C und 30 °C) erreichen.• Den Test aus der Folienverpackung nehmen und auf eine ebene trockene Fläche legen. Den Test mit einer Patienten-ID beschriften. Den Test umgehend durchführen,

um eine Einwirkung von Feuchtigkeit zu vermeiden.[Dengue NS1 Ag]1. Mit einem der mitgelieferten Einweg-Tropfer 3 Tropfen (ungefähr 100 μl) der Probe in die Probenmulde „S“ geben.[Dengue IgG/IgM]2. Mit einer mitgelieferten 10-μl-Kapillarpipette die Probe bis zur schwarzen Linie (10 μl) aufziehen und dann in die quadratische Probenmulde „S“ geben.3. 4 Tropfen (ca. 90–120 μl) des Testverdünners in die runde Testverdünnermulde geben.[Dengue NS1 und Dengue IgG/IgM]4. Nach 15 bis 20 Minuten das Testergebnis auswerten.

Achtung: Das Testergebnis nicht nach mehr als 20 Minuten ablesen; das Ablesen nach mehr als 20 Minuten kann zu falschen Ergebnissen führen.

Testauswertung (siehe Abbildung)Das Erscheinen einer Testlinie, egal wie schwach, muss als positiv interpretiert werden. Für einen optimalen diagnostischen Nutzwert sollte eine Person als positiv für eine Dengue-Infektion erachtet werden, wenn eine der drei Testlinien (NS1, IgG oder IgM) erscheint.[Dengue NS1 Ag]• Negatives Ergebnis: Wenn nur die Kontrolllinie („C“) im Ergebnisfenster erscheint, zeigt dies an, dass das NS1-Antigen nicht in der Probe vorlag oder unter der

Nachweisgrenze liegt.• Positives Ergebnis: Wenn zwei gefärbte Linien („C“ und „T“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an, dass die Probe positiv für das NS1-Antigen ist. Dies weist

auf eine Dengue-Infektion im Frühstadium hin.• Ungültiges Ergebnis: Keine Kontrolllinie („C“) im Ergebnisfenster bedeutet, dass der Test ungültig ist, unabhängig davon, ob die Testlinie („T“) vorliegt oder nicht.

Dies kann daran liegen, dass die Anweisungen nicht genau befolgt wurden oder der Test fehlerhaft ist. Bei einem ungültigen Ergebnis wird empfohlen, die Probe mit einem neuen Gerät erneut zu testen.

[Dengue IgG/IgM]• Negatives Ergebnis: Erscheint nur eine Kontrolllinie („C“) im Ergebnisfenster, zeigt dies an, dass keine IgG- und IgM-Antikörper gegen Dengue in der Probe

vorliegen oder unter der Nachweisgrenze liegen. Nach 3 bis 5 Tagen erneut testen, wenn Verdacht auf eine Dengue-Infektion besteht.• IgM-positives Ergebnis: Wenn zwei gefärbte Linien („C“ und „M“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an, dass die Probe positiv für IgM-Antikörper gegen

Dengue ist. Dies weist auf eine primäre Dengue-Infektion hin.• IgG-positives Ergebnis: Wenn zwei gefärbte Linien („C“ und „G“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an, dass die Probe positiv für IgG-Antikörper gegen

Dengue ist. Dies weist auf eine sekundäre oder frühere Dengue-Infektion hin.• IgG- und IgM-positives Ergebnis: Wenn drei gefärbte Linien („C“, „M“ und „G“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an, dass die Probe positiv sowohl für IgM- als

auch IgG-Antikörper gegen Dengue ist. Dies weist auf eine primäre Dengue-Infektion im Spätstadium oder eine sekundäre Dengue-Infektion im Frühstadium hin.• Ungültiges Ergebnis: Keine Kontrolllinie („C“) im Ergebnisfenster bedeutet, dass der Test ungültig ist, unabhängig davon, ob die Testlinie („M“ und/oder „G“)

vorliegt oder nicht. Dies kann daran liegen, dass die Anweisungen nicht genau befolgt wurden oder der Test fehlerhaft ist. Bei einem ungültigen Ergebnis wird empfohlen, die Probe mit einem neuen Gerät erneut zu testen.

Einschränkungen des Tests1. Die Konzentrationen von Dengue-Virus-NS1-Antigen und IgG- und IgM-Antikörpern sind je nach Krankheitsstadium unterschiedlich.• Bei Infektionen im Frühstadium und manchen sekundären Infektionen können die nachweisbaren Konzentrationen von IgM-Antikörpern niedrig sein. Manche

Patienten produzieren innerhalb der ersten sieben bis zehn Tage nach der Infektion möglicherweise keine nachweisbaren Konzentrationen des Antikörpers. Wenn das Testergebnis negativ ist und die klinischen Symptome andauern, sollte 3 bis 4 Tage nach Entnahme der ersten Probe eine zweite Probe entnommen werden.

• Bei manchen Patienten werden Anti-NS1-Antikörper erzeugt. In diesem Fall ist der Nachweis des NS1-Antigens gehemmt und es kann zu einem negativen Ergebnis kommen.2. Es kann zu einem negativen Ergebnis kommen, wenn das Dengue-NS1-Antigen oder die Dengue-Antikörper bei der Entnahme nicht in der Probe vorliegen oder

unter der Nachweisgrenze liegen. Ein negatives Testergebnis schließt die Möglichkeit einer Dengue-Infektion nicht aus.3. Wie bei allen diagnostischen Tests müssen die Ergebnisse zusammen mit anderen verfügbaren klinischen Informationen betrachtet werden.4. Serologische Kreuzreaktivität im gesamten Genus Flavivirus (z.B. West-Nil-Virus, St.-Louis-Enzephalitis-Virus, Japanischer Enzephalitis-Virus, Gelbfiebervirus, Zika-

Virus) ist weit verbreitet. In internen Studien wurde zwar keine Kreuzreaktivität beobachtet (siehe Abschnitt „Leistungsdaten“), doch muss die Kreuzreaktivität im Genus Flavivirus als eine Möglichkeit berücksichtigt werden.

5. Testergebnisse können je nach Zeitpunkt der Probenentnahme nach Einsetzen der Symptome, Probentyp, Vorliegen des Serotyps in der getesteten Population, der verwendeten Referenzmethode und anderen Faktoren unterschiedlich ausfallen. Diese Variablen müssen beim Vergleich von Studien berücksichtigt werden.

Interne QualitätskontrolleAuf der Oberfläche des SD BIOLINE Dengue NS1 Ag-Tests befinden sich die Buchstaben „T“ (Testlinie) und „C“ (Kontrolllinie). Auf der Oberfläche des SD BIOLINE Dengue IgG/IgM-Tests befinden sich die Buchstaben „G“ und „M“ (Testlinien) und „C“ (Kontrolllinie). Die Kontrolllinien dienen der Verfahrenskontrolle. Das Vorliegen der Kontrolllinie zeigt an, dass der Verdünner erfolgreich aufgetragen wurde und die aktiven Bestandteile der Hauptkomponenten auf dem Streifen ordnungsgemäß funktionieren. Das Erscheinen der Kontrolllinie garantiert jedoch nicht, dass die Probe korrekt aufgetragen wurde und stellt keine positive Probenkontrolle dar.

ErwartungswertDas NS1-Antigen wird erwartungsgemäß 1 Tag nach dem Einsetzen des Fiebers nachgewiesen und dauert bis zu 9 Tage an, sowohl bei primärer als auch sekundärer Dengue-Infektion. Primäre Dengue-Infektion ist dadurch gekennzeichnet, dass 3 bis 5 Tage nach dem Einsetzen der Infektion nachweisbares IgM vorliegt. Sekundäre Dengue-Infektion ist dadurch gekennzeichnet, dass sich 1 bis 2 Tage nach dem Einsetzen der Infektion das spezifische IgG erhöht. In der Mehrheit der Fälle geht damit in der Regel 20 Tage nach dem Einsetzen der Symptome eine Erhöhung des IgM einher.

Leistungsdaten• Das SD BIOLINE Dengue Duo-Testkit ist für eine Sensitivität von 92,4 % (95 % KI: 86,1–95,9 %) und eine Spezifität von 98,4 % (95 % KI: 95,5–99,5 %) für Dengue NS1 Ag konzipiert.

Für den Nachweis von Dengue IgG/IgM ist das Testkit für eine Sensitivität von 94,2 % (95 % KI: 88,5-97,2 %) und eine Spezifität von 96,4 % (95 % KI: 93,0–98,2 %) konzipiert. Es wurden insgesamt 310 Serumproben von philippinischen Probanden mit dem SD BIOLINE Dengue Duo in Korea getestet. Die Proben wurden mit einer RT-PCR bestätigt.Dengue NS1 Ag Dengue Duo

Pos. Neg.Referenztest: RT-PCR Pos. (118) 109 9

Neg. (192) 3 189Es wurden insgesamt 340 Serumproben von philippinischen Probanden mit dem SD BIOLINE Dengue Duo in Korea getestet. Die Proben wurden mit ELISA bestätigt.Dengue IgG/IgM Dengue Duo

Pos. Neg.Referenztest: ELISA Pos. (120) 113 7

Neg. (220) 8 212

Die vorgesehene Testleistung wurde zwar wie oben bestätigt, doch können sich die Ergebnisse von einzelnen Laboren von diesen Daten unterscheiden, da die Ergebnisse spezifisch für die Population des Labors in Abhängigkeit von geografischen, Patienten-, Ernährungs-, Umwelt- und anderen Faktoren ausfallen können.

• Höchste Sensitivität und klinischer Nutzen werden erzielt, wenn alle drei Ergebnisse (NS1 Ag, IgG und IgM) zusammen im Vergleich zu den Referenzmethoden berücksichtigt werden. Eine Person wird als positiv für eine Dengue-Infektion erachtet, wenn mindestens eine der drei Testlinien erscheint. Positive Ergebnisse bei zwei oder mehr Testlinien bedeuten höhere Gewissheit bei der Diagnose einer Dengue-Infektion.

• Das SD BIOLINE Dengue Duo-Testkit wurde in 4 verschiedenen Prüfzentren, wie nachfolgend angegeben, evaluiert.1. Prüfzentrum 1

Gesamt-Sensitivität von SD BIOLINE Dengue Duo in Bezug auf die klinischen SymptomeEs wurden insgesamt 230 Serumproben von philippinischen Probanden mit dem SD BIOLINE Dengue Duo in Korea getestet. Die Proben wurden mit einer RT-PCR bestätigt.

Tage nach Einsetzen der Symptome

Anz. der Proben

Anz. der positiven Proben (%)IgG-Antikörper IgM-Antikörper Antikörper insgesamt (*1) NS1 Ag Endergebnis (*2)

Primäre Infektion

1_7 52 9 (17,3) 21 (40,4) 23 (44,2) 43 (82,7) 49 (94,3)8_14 30 26 (86,7) 30 (100) 30 (100) 15 (50) 30 (100)15_21 36 35 (97,2) 36 (100) 36 (100) 5 (13,9) 36 (100)

Sekundäre Infektion

1_7 36 24 (66,7) 8 (22,2) 24 (66,7) 24 (66,7) 32 (88,9)8_14 34 34 (100) 18 (53) 34 (100) 14 (41,2) 34 (100)15_21 42 42 (100) 24 (57,2) 42 (100) 3 (7,2) 42 (100)

*1 : Dengue IgG und/oder IgM *2 : Dengue NS1 und/oder IgG- und IgM-Antikörper2. Prüfzentrum 2

Insgesamt 292 Panels von Plasma-/Serumproben von vietnamesischen Patienten wurden mit dem SD BIOLINE Dengue Duo in der klinischen Forschungsabteilung der Oxford-Universität in Vietnam getestet. 245 akute Plasma-/Serumproben setzten sich aus 138 DENV-1, 91 DENV-2 und 16 DENV-3 zusammen und wurden mit RT-PCR bestätigt. Die Interpretation von primär und sekundär basierte auf MAC und GAC ELISA. 47 Panels wurden von Patienten entnommen, bei denen keine Anzeichen von Dengue vorlagen. Die Ergebnisse wurden zur Bestimmung der Sensitivität und Spezifität verwendet.Ergebnis (95 % KI): Sensitivität: 83,7 % (78,4–88,1 %), Spezifität: 97,9 % (88,7–99,9 %)Probentyp Anz. Proben Dengue Duo

Pos. Neg.DENV-1 Primär 49

245a 206 39

Sekundär 87Intermediär 2

DENV-2 Primär 9Sekundär 81Intermediär 1

DENV-3 Primär 8Sekundär 8

Sonstige Fiebererkrankung 47 1 46a. 156 Panels wurden nach weniger als 3 Krankheitstagen und 89 Panels nach mehr als 3 Krankheitstagen entnommen.

3. Prüfzentrum 3Es wurden insgesamt 259 Serumproben von Patienten in Sri Lanka mit dem SD BIOLINE Dengue Duo am Mahidol-Oxford Tropical Medicine Unit (MORU) in Bangkok, Thailand, getestet. Die Proben setzten sich aus 99 akuten Dengue-Proben und 160 Nicht-Dengue-Proben mit anderen bestätigten akuten Fiebererkrankungen zusammen. 99 akute Dengue-Proben wurden mithilfe von RT-PCR und MAC/GAC ELISA bestätigt. Die Ergebnisse wurden zur Bestimmung der Sensitivität und Spezifität verwendet.Ergebnis (95 % KI): Sensitivität: 92,9 % (83,9–97,1 %), Spezifität: 88,8 % (82,8–93,2 %)Probentyp Anz. Proben Dengue Duo

Pos. Neg.DENV-1 1

99 92 7DENV-2 16DENV-3 47DENV-4 2Unbestimmta 33Nicht-Dengue-Infektionb 160 18 142

a. Unbestimmt: PCR-negativ, MAC- oder/und GAC ELISA-positivb. Nicht-Dengue-Infektion: Chikungunya (82), Leptospirose (33), Bakteriämie(19), Tsutsugamushi-Fieber (8), Q-Fieber (7), Tuberkulose (4), Harnwegsinfektion (5), Malaria (1), Fleckfieber (1)

4. Prüfzentrum 4Sensitivität von SD BIOLINE Dengue Duo gemäß Typ und Phase der Dengue-InfektionEs wurden insgesamt 397 Serumproben von Probanden in Mexiko mit dem SD BIOLINE Dengue Duo getestet, um dessen Leistung zu beurteilen. Mit einem ELISA-Test wurde die Dengue-Infektion in den Proben bestätigt. Basierend auf den Ergebnissen des NS1 Ag- und IgG/IgM-ELISA-Tests und den klinischen Daten von Patienten wurden 310 Proben mit einer Dengue-Virusinfektion diagnostiziert und 87 Proben fielen bei allen 3 ELISA-Tests negativ aus. Die Leistung des SD BIOLINE Dengue Duo wurde gegenüber den Gesamtergebnissen der ELISA-Tests beurteilt.Probentyp Anz. Proben SD BIOLINE Dengue Duo Ergebnis (95 % KI)

Positiv NegativDengue, primär akut 122

310110 12 90,16 % (84,47_95,86 %)

Sensitivitäta : 90,65 % (87,24_94,05 %)

Dengue, primär genesend 17 11 6 64,71 % (39,05_90,36 %)Dengue, sekundär akut 122 117 5 95,90 % (91,97_99,83 %)Dengue, sekundär genesend 49 43 6 87,76 % (77,56_97,95 %)Nicht-Dengue 87 9 78 Spezifitätb : 89,66 % (82,68_96,63 %)

a. Dengue-positiv, wenn mindestens 1 der NS1-, IgM- oder IgG-Marker positiv war b. Nicht-Dengue, wenn alle 3 Marker negativ waren5. Kreuzreaktivitätstest mit anderen Flavivirus-bedingten und von Stechmücken übertragenen Erkrankungen

Die folgenden 4 Pathogene mit potentieller Kreuzreaktivität hatten keine Auswirkung auf die Testergebnisse des SD BIOLINE Dengue Duo. Die Ergebnisse interner Studien zeigen zwar keine Kreuzreaktivität, doch kann die Möglichkeit nicht vollständig ausgeschlossen werden.Erkrankung Dengue IgM-positiv/gesamt Dengue IgG-positiv/gesamt Dengue NS1 Ag-positiv/gesamtJapanische Enzephalitis 0/25 0/25 0/25Gelbfieber 0/25 0/25 0/25Malaria P. falciparum 0/25 0/25 0/25Malaria P. vivax 0/25 0/25 0/25Gesamt 0/100 0/100 0/100

6. Die Reproduzierbarkeit des SD BIOLINE Dengue Duo-Tests wurde durch Within-Run-, Between-Run- und Batch-to-Batch-Studien mit internen Referenzpanels nachgewiesen. Alle Werte entsprachen den Akzeptanzkriterien der Referenztestpanels.

7. Die Leistung des SD BIOLINE Dengue Duo-Kits wurde mit potentiellen relevanten Störsubstanzen beurteilt. Hämolytische, lipämische, ikterische Proben und Proben mit rheumatoiden Faktoren wurden untersucht. Es wurde keinerlei Beeinträchtigung des Testkits durch diese Proben nachgewiesen.

Produkt-Haftungsausschluss:Es wurden jegliche Vorkehrungen getroffen, um die diagnostische Leistung und Genauigkeit dieses Produkts zu gewährleisten. Das Produkt wird jedoch außerhalb der Kontrolle des Herstellers und des Vertriebshändlers verwendet und die Ergebnisse können dementsprechend auch durch Umgebungsbedingungen und/oder falsche Benutzung beeinträchtigt werden. Wenn bei einer Person eine Erkrankung mit diesem Test diagnostiziert wird, sollte diese einen Arzt aufsuchen, um das Ergebnis mit weiteren Tests zu bestätigen.Warnung:Die Hersteller und Vertriebshändler dieses Produkts können bei Verwendung des Produkts nicht für Verluste, Haftungsansprüche, Forderungen, Kosten oder Schäden, die sich direkt, indirekt oder als Folge bzw. im Zusammenhang mit einer falschen Diagnose ergeben, unabhängig davon, ob diese positiv oder negativ ausfällt, haftbar gemacht werden.

65, Borahagal-ro, Giheung-gu, Yongin-si, Gyeonggi-do, Republic of KoreaTel : 82-31-899-2800 Fax : 82-31-899-2840 http://www.standardia.com sales@standardia.com

Hersteller

Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert GermanyPhone : +49 6894 581020, Fax : +49 6894 581021

Bevollmächtigter

Herausgabedatum: 2016. 1111FK45-01-De-211FK46-01-De-2

3

3 Tropfen (ungefähr 100 μl) der Probe in die Probenmulde „S“ geben.

Einen neuen Einweg-Tropfer leicht zusamm

endrücken und die Probe bis über die Mindestfülllinie aufziehen.

Mit einer neuen Einweg-Kapillarpipette die Probe bis zur Fülllinie (10 μl) aufziehen.Achtung: Häm

olysierte oder langfristig gelagerte Proben (m

ehr als 24 Stunden) sollten nicht verwendet werden.

4 Tropfen (ungefähr 90 bis 120 μl) des Testverdünners senkrecht in die Testverdünnermulde geben. Es m

üssen genau 4 Tropfen hinzugegeben werden. Dabei die Flasche vertikal halten.

10 µl der Probe in die Probenmulde „S“ geben.

Umgehend (innerhalb von 20 Sekunden)

15 - 20 minsNach 15 bis 20 Minuten die Testergebnisse auswerten.Nach mehr als 20 Minuten abgelesene Ergebnisse können ungenau sein.

Zuerst die Packung öffnen und prüfen, ob Folgendes enthalten ist:I.

Testgerät mit Trockenmittel (mit Feuchtigkeitsanzeige), einzeln im Folienbeutel verpacktII.

TestverdünnerIII.

Einweg-TropferIV.

KapillarpipetteV.

Gebrauchsanweisung

1

II

Die Gebrauchsanweisung des SD BIOLINE Dengue Duo-Tests sorgfältig durchlesen.

2

Die Folienpackung öffnen und auf Folgendes überprüfen:1.

Probenmulde für den Dengue IgG/IgM-Test2.

Mulde für den Testverdünner3.

Probenmulde für den Dengue NS1-Test4.

Feuchtigkeitsanzeige im TrockenmittelWenn die Feuchtigkeitsanzeige GELB ist, den Test mit der Patienten-ID kennzeichnen und fortfahren.Wenn die Feuchtigkeitsanzeige GRÜN ist, den Test entsorgen und einen neuen Test verwenden.

ValidInvalid

Gelb: Test verw

enden

Grün: Test entsorgen

21

3

Anschließend das Verfallsdatum auf der Rückseite des Folienbeutels überprüfen. Sollte das Verfallsdatum abgelaufen sein, eine andere Charge verwenden.

[Zum Beispiel]

Lot : XXXXXXXXXMfg : YYYY.MM.DDExp : YYYY.MM.DD

Vorbereitung

Testdurchführung

VI

For in vitro diagnostic use onlyStore at 1~

30ºC (34ºF~86ºF) sealed

One step rapid test for detection NS1 Ag and IgG/IgM

antibodies to dengue virus1 Test

1°C

30°CDengue NS1

Ab Combo

Dengue Duo

IVIII

23

Dengue NS1 Ag

Blut- (mittels Venenpunktion, kein Kapillarblut verwenden), Plasm

a- oder Serumprobe

Blut- (mittels Venenpunktion, kein Kapillarblut verwenden), Plasm

a- oder Serumprobe

Probenentnahme

Dengue IgG/IgM

Zeituhr einstellen

90�

Achtung

Fülllinie

3 Tropfen

10 µl

Probenentnahme

1

4

Positiv

Positiv

Ungültig

Ungültig

Wenn nur die Kontrolllinie („C“) im Ergebnisfenster erscheint, zeigt dies an, dass das NS1-Antigen

nicht in der Probe vorlag oder unter der Nachweisgrenze liegt.

Wenn zwei gefärbte Linien („C“ und „T“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an, dass die Probe positiv für das NS1-Antigen ist. Der Test ist positiv, selbst wenn die „T“-Linie nur schwach sichtbar ist. Dies weist auf eine Dengue-Infektion im Frühstadium hin.

Keine Kontrolllinie („C“) im Ergebnisfenster bedeutet, dass der Test ungültig ist, unabhängig davon, ob die Testlinie („T“) vorliegt oder nicht. Dies kann daran liegen, dass die Anweisungen nicht genau befolgt wurden oder der Test fehlerhaft ist. Bei einem

ungültigen Ergebnis wird empfohlen, die

Probe mit einem neuen Gerät erneut zu testen.W

enn drei gefärbte Linien („C“, „M“ und „G“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an,

dass die Probe positiv sowohl für IgM- als auch IgG-Antikörper gegen Dengue ist. Der Test gilt als positiv, selbst wenn die „M“- und/oder „G“-Linie nur schwach sichtbar ist. Dies weist auf eine primäre Dengue-Infektion im Spätstadium oder eine sekundäre Dengue-Infektion im Frühstadium hin.

2. lgG-positiv

3. IgG- und IgM-positiv

1. IgM-positiv

Wenn zwei gefärbte Linien („C“ und „G“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an, dass die Probe positiv für IgG-Antikörper gegen Dengue ist. Der Test ist positiv, selbst wenn die „G“-Linie nur schwach sichtbar ist. Dies weist auf eine sekundäre oder frühere Dengue-Infektion hin.

Wenn zwei gefärbte Linien („C“ und „M“) im Ergebnisfenster vorliegen, zeigt dies an, dass die Probe positiv für IgM-Antikörper gegen Dengue ist. Der Test ist positiv, selbst wenn die „M“-Linie nur schwach sichtbar ist. Dies weist auf eine primäre Dengue-Infektion hin.

Wenn nur die Kontrolllinie („C“) im

Ergebnisfenster erscheint, zeigt dies an, dass IgG- und IgM-Antikörper gegen Dengue nicht in der Probe vorliegen oder unter der Nachweisgrenze liegen. Nach 3 bis 5 Tagen erneut testen, wenn Verdacht auf eine Dengue-Infektion besteht.

Keine Kontrolllinie („C“) im Ergebnisfenster bedeutet, dass der Test ungültig ist, unabhängig

davon, ob die Testlinie („M“ und/oder „G“) vorliegt oder nicht. Dies kann daran liegen, dass die Anweisungen nicht genau befolgt wurden oder der Test fehlerhaft ist. Bei einem

ungültigen Ergebnis wird empfohlen, die Probe mit einem neuen Gerät erneut zu testen.

AuswertungDas Erscheinen einer Linie, egal wie schwach, wird als positiv interpretiert.

Dengue NS1 AgDengue IgG/IgM

Dengue IgG/IgM

Negativ

Negativ

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IVD-Richtlinie 98/79/EGVerwendbar bis

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1°C

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