8/12/2019 Practicum 5 en 6

1/3

Practicum 5 & 6

Subcellulaire localisatie van LDH en GDH in kippenlever

Meander Kloosterman (3928586) groep 10, H1

Laura van Vuuren (3968235) groep 11, H1

Voorbereidingsvragen1.

LDH (lactaat dehydrogenase) is betrokken bij de onderstaande reactie:

LDH zorgt voor de omzetting van pyruvaat naar lactaat. Dit gebeurd in het cytosol

van vooral spiercellen, wanneer de condities anaeroob zijn. Dit is het geval bij een

sprint waarbij er niet genoeg zuurstof in de spieren is. De terugreactie vindt plaats in

bijvoorbeeld levercellen, zodat gluconeogenese plaats kan vinden en het glucose kan

worden opgeslagen in glycogeen.

GDH (glutamaat dehydrogenase) is betrokken bij de volgende reactie:

Deze reactie is onderdeel van een cyclus waarbij aminozuren omgezet kunnen

worden in een -ketozuur, waarbij glutamate eerst omgezet wordt is -ketoglutaraat

waarna deze weer terug omgezet wordt naar glutamate. Bij deze terugomzetting kan

een aminozuur omgezet worden naar een -ketozuur. Dit gebeurt in de matrix van

de mitochondrin

2. LDH is gelokaliseerd in het cytosol, GDH is gelokaliseerd in de mitochondrin.3. Latentie % = (A met triton - A zonder triton)/ A met triton x 100 %

8/12/2019 Practicum 5 en 6

2/3

4.Alle mitos intact 50% van de mitos kapot Alle mitos kapot

LDH GDH LDH GDH LDH GDH

lat rec lat rec lat rec lat rec lat rec lat rec

PNS 0 100 100 100 0 100 50 100 0 100 0 100Cyt 0 100 0 0 0 100 0 50 0 100 0 100

Mit 0 0 100 100 0 0 100 50 0 0 0 0

5.LDH

GDH

6.

Beide reacties gebeuren onder invloed van NADH / NAD

+

. Bij reacties met NADH en NAD

+

onder fysiologische, pH neutrale omstandigheden ligt het evenwicht aan de kant van NAD

+.

Dit houdt in dat bij de reactie met LDH het evenwicht aan de kant van lactaat ligt en dus

lactaat wordt omgezet tot pyruvaat en bij de reactie met GDH ligt het evenwicht aan de kant

van glutamaat en dus wordt -ketoglutamaat gevormd.

7. GDH bindt aan ADP waardoor GDH actief wordt. Hierdoor kan dus de reactie tussenglutamaat en -ketogluraat plaats vinden.

ResultatenOnder bepaalde omstandigheden hebben wij de enzym expressie gemeten van LDH en GDH. Dit

hebben wij gedaan in de mitochondrin en het cytosol, maar ook wanneer deze bij elkaar in

hetzelfde mengsel zitten. Wij hebben dit gedaan door middel van de absorptie te meten ten opzichte

van de tijd. Dit hebben wij gedaan met behulp van een spectrofotometer. De resultaten zijn verwerkt

in grafieken, die bijgevoegd zijn bij het verslag. Door slordigheid hebben wij 1 epje sediment bij stap

13 verloren. Hierdoor moeten alle uitkomsten keer 0,75 worden gedaan.

http://en.wikipedia.org/wiki/File:LDH_reaction.pnghttp://en.wikipedia.org/wiki/File:LDH_reaction.png

8/12/2019 Practicum 5 en 6

3/3

Discussie en conclusieDe gevonden resultaten komen niet altijd overeen met de verwachtingen. Wij zullen per resultaat

bespreken hoe dit zou kunnen.

LDH

De latentie van LDH in PNS was -26%, dit is minder dan de verwachte 0%. De grootste reden is

waarschijnlijk een meetfout, maar ook doordat triton de eiwitten kan denatureren en dus een deel

van LDH gedenatureerd is. Door slordigheid zijn wij ook vergeten water bij de oplossingen te voegen

zonder triton. Dit betekend dus dat de oplossing minder verdund is, waardoor de waarden iets hoger

uitvallen van de oplossingen zonder triton. De latentie van LDH in cytosol wat -10,5%. Ook dit is

minder dan de verwachte 0% en dit zou kunnen komen door dezelfde redenen als het LDH in PNS.

Het verschil in percentage kan niet echt verklaard worden. Het kan komen doordat triton minder

enzym denatureert, misschien door later toevoegen van triton. De latentie van LDH in de

Mitochondrien was -11,1%. Dit is te verklaren door dezelfde redenen bij PNS en het cytosol.

GDH

In het PNS was de latentie van GDH 80%, maar geen honderd. Dit komt doordat mitochondrin kapot

gegaan kunnen zijn tijdens het potteren. Hierdoor kwam GDH al vrij in het cytosol voor toevoeging

van triton waardoor de latentie lager uitvalt. In het cytosol was de latentie zoals verwacht zeer klein,

deze is namelijk 10%. Er zitten geen mitochondrin meer bij, de activiteit die wel gemeten wordt,

wordt veroorzaakt door mitochondrin die al eerder kapot zijn gegaan waardoor GDH in het cytosol

kwam. In de mitochondrin was de latentie 86%. GDH kwam inderdaad vrij uit de mitochondrin na

toevoeging van triton. Voor toevoeging van triton was er nauwelijks activiteit. De activiteit die er was

kan weer verklaard worden door kapotte mitochondrin.

Hieruit kunnen we concluderen dat GDH inderdaad in de mitochondrin aanwezig is.