immunochemieIMMUNOGLOBULINES

Immunochemie

Boek biomedische kennis in het MLO H7-8 Basis: afweer en immuniteit H 3-3-5 immuno chemische technieken

Biologie voor het MLO H 8.5 Afweerreacties

DEZE PERIODE..

Binnendringen van micro-organismen

pathogenen -> infectieziekten

Kolonisatieresistentie van het lichaam (eerste verdediging)

Mechanische barrière Biologie barrière Chemische barrière

Immuunsysteem in actie! (tweede verdediging)

AFWEER

Algemene weerstandAlgemene weerstand• alle micro-organismen• Leukocyten (witte

bloedcellen)• Fagocytose (opeten van

indringers)

Neutrofiele Granulocyten en Monocyten in het bloed

Macrofagen in de weefsels

Specifieke weerstandSpecifieke weerstand• Lichaamsvreemde stoffen • virussen, bacteriën

• “Immuniteit”• Cellulair afweer- virussen

en lichaamsvreemde weefsels (T-lymfocyten)

• Humorale afweer- vorming antistoffen als reactie op antigenen (B-lymfocyten)

WEERSTAND VAN IMUUNSYSTEEM

HUMORALE AFWEER

http://www.bioplek.org/animaties/afweer/Blymfocyten.html

BINDING ANTIGEEN-ANTILICHAAM

Antigeen (Ag)Zorgt voor herkenning Lichaamsvreemde stof

Virussen, bacteriën

Antistof (Ab) immunoglobulinespecifiek 1 Ab op 1 Ag Polyklonale antistoffen Monoklonale

antistoffen

Binding, Ag-Ab complex

gemaakt door B-cellen

HUMORALE (SPECIFIEKE) AFWEER

http://www.schooltv.nl/beeldbank/clippopup/20051109_immuumsysteem02

Opdracht: Beantwoord de volgende vragen ..1.Wat is een immunoglobuline (Ig) en hoe werkt het?2.Hoe zijn ze opgebouwd? (biomolecuul, Fab, Fc, lichte keten, zware keten, etc.)3.Welke klassen (typen) zijn er in Ig en wat is het verschil?4.Welk type wordt bij allergische reacties aangemaakt? En de andere types?5.Ig kunnen worden gezuiverd en worden gebruikt voor verschillende doeleinden/toepassingen. Welke?

IMMUNOGLOBULINES

+/- 15 min

OPBOUW ANTILICHAAM

KLASSEN (TYPEN) IMMUNOGLOBULINES

IMMUNOCHEMISCHE TECHNIEKEN

Principe:Een monoklonale antilichaam bindt met de stof (antigeen)

waartegen hij gericht is. Als deze stof aanwezig is in een monster zal er een binding optreden. Bij sommige technieken wordt deze binding zichtbaar gemaakt door middel van een label

Hoge concentratie – vorming neerslag en vertroebeling (Precipitatie reacties )

Lagere concentraties – samenklonteren van antigenen en cellen (agglutinatie reacties)

Erg lage concentraties- labelen van antigenen vb Fluoriscerend, radioactief enzymen, luminescentie

(Elisa – Enzym Linked Imunnosorbent Assay,Fluorescentie microscoop analyse)

AGGLUTINATIE

Wat is agglutinatie? een verschijnsel wat optreedt wanneer antilichamen

reageren met antigenen op het celmembraan waardoor er een binding en vervolgens een samenklontering plaatsvindt

Agglutininen - antilichamen (antistoffen)

Agglutinogenen- antigenen

AGGLUTINATIE REACTIES

Toepassingen Bloedgroep bepalingen

Bloed transfusies

Antigeen bepalingen Zwangerschap – rhesus+ baby

Detectie antilichamen - ziekte beeld

Identificatie bacteriën en schimmels

Bloed transfusies

Opdracht!! Zie stencils.

Compatibiliteit agglutinatie test

Bloed transfusies

Waarom kan je soms wel een bepaalde bloedgroep ontvangen maar niet doneren?

Universele bloeddonor = ?

Universele bloedontvanger= ?

Precipitatie tests

Agglutinatie tests

Immunoassay - ELISA

IMMUNOCHEMISCHE TECHNIEKEN

3 belangrijke onderdelen

Binding van de te bepalen stof met een specifieke antistof (immunoglobuline)

Zeer gevoelige detectiemethode

Verwijdering overmaat antistof en overmaat label

IMMUNO ASSAY

Polyklonale antilchamen Kan afkomstig zjn van dier of mens Mens of dier krijgt injectiemet antigeen van ziekteverwekker (immunoniseren) meerdere monoklonale antichamen met 1 specfiteit Maar zijn niet allemaal gelijk (gericht op verschillende delen van het molecuul

(ziekteverwekker) Kwaliteit is niet constant – geen 1 dier of mens reageert hetzelfde

Productie Monoklonale antilichamen Muis injecteren met antigeen van ziekteverwekker (immunoniseren) Cel oogsten uit de milt van een muis Fusie met Tumor cellen (snellere celdeling) vormt hybrdecel Selectie van 1 hybridecel Kloon (celkweek van 1 hybride cel) productie van onbeperkt antilichaam

Oefening: http://biologiepagina.nl/Oefeningen/Monoklonaleantistof/

monoklonaleantistof.htm

PRODUCTIE ANTILICHAMEN

PRODUCTIE ANTILICHAMEN

ELISA TEST

Enzym Linked Immuno Sorbent Assay

Immunochemische test Binding tussen antigenen en antilichamen Primaire en secundaire antilichamen Rol Enzym zorgt voor kleurreactie -> detectie Opbouw van de test kan variëren –twee typen

Indirect ELISA Plaat: Antigeen antilichaam

directe ELISA (sandwich)

plaat: primaire antilichaam Antigeen Secundaire antilichaam

SOORTEN ELISA’S

SANDWICH (DIRECT) ELISA

INDIRECT ELISA

HIV Testen Detectie op HIV virus

antigenenZwangerschapstesten

Detectie op zwangerschaps hormoon (hCG)

Medicijnen Bv. residuen van

dierbehandelingsmiddelen,(milieu) contaminanten,

pesticidenAllergieën

(allergene) eiwitten in voedselproductieketens. Bijvoorbeeld in hazelnoten.

Plant pathologie Bloembollen keuringsdienst virustoetsen

TOEPASSINGEN ELISA

OPDRACHT

Leg uit hoe je met een ELISA test illegaal drugs gebruik kan detecteren van ten minstens 15 verschillende drugs?

Welk type ELISA test zou je gebruiken?

Hoe zou je ELISA test inrichten (op de microtiterplaat)?