Ine VansteenkisteIne Vansteenkiste

EINDWERKEINDWERK

“Experimenteel vergelijkende studie van kwantitatieve analysemethoden voor de bepaling van glucosamine in samengestelde preparaten”.

“Experimenteel vergelijkende studie van kwantitatieve analysemethoden voor de bepaling van glucosamine in samengestelde preparaten”.

Hogeschool West-Vlaanderen. 19 juni 2008Hogeschool West-Vlaanderen. 19 juni 2008

OverzichtOverzicht

• Probleemstelling/doel• Praktisch werk• Resultaten

– Problemen– detectie

• Besluit

• Probleemstelling/doel• Praktisch werk• Resultaten

– Problemen– detectie

• Besluit

ProbleemstellingProbleemstelling

• Osteoarthritis• Glucosamine en Chondroïtine• Voedingssupplementen: controles!

• Vb. Kwantificering met HPLC

• Osteoarthritis• Glucosamine en Chondroïtine• Voedingssupplementen: controles!

• Vb. Kwantificering met HPLC

Doel Doel

• Hoeveelheid glucosamine/chondroïtine bepalen in preparaten.

• Met HPLC-methode• In toekomst gebruiken in routine.

• Hoeveelheid glucosamine/chondroïtine bepalen in preparaten.

• Met HPLC-methode• In toekomst gebruiken in routine.

Praktisch werkPraktisch werk

• Vergelijking 9 methoden• HPLC-U.V.• Efficiëntie, routine, kostprijs,...

• Met meest geschikte methode: kwantificering op preparaten.

• Vergelijking 9 methoden• HPLC-U.V.• Efficiëntie, routine, kostprijs,...

• Met meest geschikte methode: kwantificering op preparaten.

ResultatenResultaten

• Methoden: opmerkingen– Onmogelijk om exact op zelfde manier uit te voeren => afwijkend resultaat.

– Gewenst resultaat maar te ingewikkeld, duur, niet voor routine.

– Verder gewerkt met meest geschikte methoden.

• Methoden: opmerkingen– Onmogelijk om exact op zelfde manier uit te voeren => afwijkend resultaat.

– Gewenst resultaat maar te ingewikkeld, duur, niet voor routine.

– Verder gewerkt met meest geschikte methoden.

ProblemenProblemen

• Grootste probleem: geen scheiding van glucosamine en chondroïtine.

• Geen scheiding => piek niet specifiek voor 1 stof. piekoppervlakte ~ concentratie.

• Omzeilen via selectieve detectie.

• Grootste probleem: geen scheiding van glucosamine en chondroïtine.

• Geen scheiding => piek niet specifiek voor 1 stof. piekoppervlakte ~ concentratie.

• Omzeilen via selectieve detectie.

DetectieDetectie

• Component niet gedetecteerd => kan niet interfereren.

• Aanpassen detectieparameters: enkel glucosamine of chondroïtine wordt gedetecteerd.

• 2 aparte methoden nodig!

• Component niet gedetecteerd => kan niet interfereren.

• Aanpassen detectieparameters: enkel glucosamine of chondroïtine wordt gedetecteerd.

• 2 aparte methoden nodig!

DetectieDetectie

• U.V.- spectra:• U.V.- spectra:

absorptiemaxium

absorptiemaxium

Glucosamine

Chondroïtine

DetectieDetectie

• U.V.- spectra: absorptiemaxima dicht bij elkaar.

• Meten bij absorptiemaximum => interferentie.

• Oplossing: niet bij absorptiemaximum meten. (wel nog detecteerbaar!)

• U.V.- spectra: absorptiemaxima dicht bij elkaar.

• Meten bij absorptiemaximum => interferentie.

• Oplossing: niet bij absorptiemaximum meten. (wel nog detecteerbaar!)

Detectie: glucosamineDetectie: glucosamine

• Derivatisatie => bij andere golflengte meten => selectiever.

• Derivatisatie => bij andere golflengte meten => selectiever.

Detectie: chondroïtineDetectie: chondroïtine

• Oplossing: selectieve golflengte: 207 nm. (≠ absorptiemaximum)

• Oplossing: selectieve golflengte: 207 nm. (≠ absorptiemaximum)

Glucosamine

Chondroïtine

Kwantitatieve bepalingKwantitatieve bepaling

• Twee aparte methoden– Glucosamine: derivatisatie, 340 nm, acetaatbuffer/methanol.

– Chondroïtine: 207 nm, octanesulfonic acid/triëthylamine/fosforzuur/acetonitril

=> Selectieve methoden.

• Twee aparte methoden– Glucosamine: derivatisatie, 340 nm, acetaatbuffer/methanol.

– Chondroïtine: 207 nm, octanesulfonic acid/triëthylamine/fosforzuur/acetonitril

=> Selectieve methoden.

Kwantitatieve bepalingKwantitatieve bepaling

• Referentiestandaarden => ijklijn

• Piekoppervlaktes ~ concentratie

• Referentiestandaarden => ijklijn

• Piekoppervlaktes ~ concentratie

Kwantitatieve bepalingKwantitatieve bepaling

• Piekoppervlakte onbekende invullen in vergelijking van de ijklijn.

• Piekoppervlakte onbekende invullen in vergelijking van de ijklijn.

Kwantitatieve bepalingKwantitatieve bepaling

• Monsters met glucosamine + chondroïtine + andere stoffen

• Ook interferentie mogelijk!• Resolutie > 1.5 (farmacopee) => voldoende scheiding

• Monsters met glucosamine + chondroïtine + andere stoffen

• Ook interferentie mogelijk!• Resolutie > 1.5 (farmacopee) => voldoende scheiding

Kwantitatieve bepalingKwantitatieve bepaling

Rs = 2.74

Referentiestandaard

Siroop

Tablet

Kwantitatieve bepalingKwantitatieve bepaling

• Samengestelde preparaten (tabletten, siroop): bevatten glucosamine + chondroïtine + vulstoffen.

• Waarden tussen 90 en 110 % van de theoretische concentratie.

• Afwijking door...?• => Moet nog herhaald worden!

• Samengestelde preparaten (tabletten, siroop): bevatten glucosamine + chondroïtine + vulstoffen.

• Waarden tussen 90 en 110 % van de theoretische concentratie.

• Afwijking door...?• => Moet nog herhaald worden!

BesluitBesluit

• Kwantificering glucosamine/chondroïtine in voedingssupplementen.

• Met meest geschikte HPLC-methode.• Interferentie => selectieve detectie.

• 2 aparte methoden getest op monsters.

• Verdere validatie nodig vóór gebruik van de methoden.

• Kwantificering glucosamine/chondroïtine in voedingssupplementen.

• Met meest geschikte HPLC-methode.• Interferentie => selectieve detectie.

• 2 aparte methoden getest op monsters.

• Verdere validatie nodig vóór gebruik van de methoden.

DankDank

• Chemiphar N.V.• Van Daele Leen• Quartier Bart• Hogeschool West-Vlaanderen• aanwezigen

• Chemiphar N.V.• Van Daele Leen• Quartier Bart• Hogeschool West-Vlaanderen• aanwezigen

Vragen?Vragen?