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Centrum voor Onderzoek in Diergeneeskunde en Agrochemie

Centre d’Etude et de Recherches Vétérinaires et Agrochimiques

SOP/TRA/ANA/04 Vnr : 02 Datum/Date : 18/06/14 Pg 1/25

Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS

Auteur Kwaliteitsverantwoordelijke

Responsable Qualité

Technisch verantwoordelijke

Responsable technique

Naam / Nom

Ruttens A.

Knapen K. Ruttens A.

Doel / Objet :

Dit werkvoorschrift heeft tot doel anorganisch arseen te bepalen. Van de gekende arseen species zijn de anorganische

vormen het meest schadelijk voor de gezondheid.

Cette instruction a pour objet la détermination de l’arsenic inorganique. Parmi ces composés d’As connus, les formes

inorganiques sont les plus dangereuses pour la santé.

Toepassingsgebied / Domaine d’application :

Dit werkvoorschrift wordt toegepast op voeding (inclusief dranken) en voeders van plantaardige oorsprong

(landplanten).

Cette instruction s’applique aux denrées alimentaires (y inclus des boissons) et aliments pour animaux d'origine

végétale (plantes terrestres).

Bestemmelingen / Destinataires : zie distributielijst /

Voir liste de distribution

Aantal copies in omloop / Copies en circulation : 5

Historiek / Historique

Vnr

Datum vrijgave

Date

d’application

Reden(en) wijziging / Motif(s) de changement

01

02

27/03/13

18/06/14

Eerste editie / Première édition

Uitbreiding voor voeders en dranken /

Extension pour des aliments pour animaux et boissons

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1.Doel

Dit werkvoorschrift heeft tot doel anorganisch arseen te bepalen. Van de gekende arseen species zijn de anorganische

vormen het meest schadelijk voor de gezondheid.

2.Toepassingsgebied

Dit werkvoorschrift wordt toegepast op voeding (inclusief dranken) en voeders van plantaardige oorsprong (landplanten).

3.Definities, afkortingen, referenties en normen

3.1. Afkortingen

Ar argon

As arseen

AsB arsenobetaine

AsIII

arseniet

AsV

arsenaat

Asi anorganisch arseen

MMA monomethyl arsonate

DMA dimethyl arsinate

milliQ – water ultrazuiver water

H20

bidi home made bigedestilleerd water

CRI “Collision Reaction Interface”; dit systeem laat toe om via de introductie van bepaalde gassen

isobare interferenties te elemineren bij metingen op de ICP-MS

CRI-gas gas gebruikt door het CRI-systeem: H2 = waterstof

CRM gecertifieerd referentiemateriaal

g gram

kg kilogram

HPLC hoge performantie vloeistofchromatografie

ICP-MS massaspectrometer gekoppeld aan een inductief plasma

L liter

mL mililiter

RBS 25 professioneel detergent

VAR TUNE VAR-TS-MS Varian©multi-element oplossing gebruikt voor de optimalisatie van het signaal van

de ICP-MS waarin volgende elementen aanwezig zijn: Ba, Be, Ce, Co, In, Mg, Pb, Th, Tl

µg microgram

µL microliter

3.2. Referenties

Directive 2002/657/EC of 12/08/2002 (publication date: 17/08/2002), concerning the performance of analytical

methods and the interpretation of results, and implementing Council Directive 96/23/EC. Official Journal of the

European Communities L221/8 (2002)

SOP/TRA/PRE/01 : Voorbereiding van de stalen voor het bepalen van spoorelementen

PRO/5.5/01 : Interne controles

PRO/5.1/04 : Afvalverwijdering

SOP/TRA/ANA/03 : Arseenspeciatie in granen en graanproducten

4.Principe

4.1. Voorbereiding

De voorbereiding en de homogenisering van de stalen is beschreven in de SOP/TRA/PRE/01.

Na homogenisatie worden de stalen overgebracht in extractiebuizen en wordt de extractieoplossing -die bestaat uit een

mengels van een zuur en een oxidant (0.1 M HNO3 in 3% H

2O

2)- - en een magnetisch roerstaafje toegevoegd.

Vervolgens worden de extractiebuizen hermetisch afgesloten en in de houder van de microgolfoven geplaatst.

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1.Objet

Cette instruction a pour objet la détermination de l’arsenic inorganique. Parmi ces composés d’As connus, les formes

inorganiques sont les plus dangereuses pour la santé.

2.Domaine d’application

Cette instruction s’applique aux denrées alimentaires (y inclus des boissons) et aliments pour animaux d'origine végétale

(plantes terrestres).

3.Définitions, abréviations, références et normes

3.1. Abréviations

Ar argon

As arsenic

AsB arsenobetaine

AsIII

arsenite

AsV

arsenate

Asi anorganisch arseen

MMA monomethyl arsonate

DMA dimethyl arsinate

CRI « Collision Reaction Interface », ce dispositif permet, par l’introduction de certaines gases,

d’éliminer des interférences isobariques lors de mesures en ICP-MS

Eau milliQ eau ultra pure

H20

bidi home made eau bidistillée

g gramme

Gaz CRI gaz employé dans le dispositif CRI : hydrogène (H2)

HPLC chromatographie liquide à haute performance

ICP-MS spectromètre de masse couplé à un plasma inductif

kg kilogramme

L litre

mL millilitre

MRC matériau de référence certifié

RBS 25 détergent professionnel

VAR TUNE solution multi-élémentaire (VAR-TS-MS Varian©) employée pour l’optimisation de l’ICP-MS et

contenant les éléments chimiques : Ba, Be, Ce, Co, In, Mg, Pb, Th et Tl

µg microgramme

µL microlitre

3.2. Références

Directive 2002/657/EC de 12/08/2002 (date de publication: 17/08/2002), concernant la performance des méthodes

analytiques et l’interprétation des résultats, implementing Council Directive 96/23/EC. Official Journal of the European

Communities L221/8 (2002).

SOP/TRA/PRE/01 : Préparation des échantillons pour le dosage des éléments traces

PRO/5.5/01 : Contrôles internes

PRO/5.1/04 : Elimination des déchets

SOP/TRA/ANA/03 : Spéciation de l’arsenic dans les céréales et produits céréaliers

4.Principe

4.1. Préparation

La préparation et l’homogénéisation des échantillons sont décrites dans la SOP/TRA/PRE/01.

Les échantillons homogénéisés sont introduits dans des récipients d’extraction. Après ajout de la solution d’extraction

acide et oxydante (HNO3 0.1M dans 3% H

2O

2), et après l’ajout des puces magnétiques, les récipients sont

hermétiquement fermés et placés dans le four à micro-ondes.

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Het gebruik van een doeltreffend opwarmingsprogramma en het roeren van de stalen m.b.v. een magnetische roerstaaf,

verzekert vervolgens de extractie van As uit het staal. De oxiderende omgeving zorgt ervoor dat het aanwezige AsIII

omgezet wordt in AsV

, zodat al het anorganisch As in het extract aanwezig is als AsV

. Na het doorlopen van het

opwarmingsprogramma, en na afkoeling van de buizen, is het extract klaar voor analyse met HPLC-ICP-MS.

4.2. Meting

De blanco’s, de ijkstandaarden evenals de oplossingen van de stalen worden in de carrousel van de monsterwisselaar

van de HPLC geplaatst. De keten HPLC-ICP-MS en de analyse worden gestuurd door de programma’s ICP_MS expert en

Galaxie en laten de controle van alle functies van het meetapparaat toe met inbegrip van de programmering van de

chromatografische scheiding van species in de stalen evenals de interpretatie, de behandeling en de archivering van de

ruwe data.

5.Validatieparameters

Zie validatiedossier

6.Goederen

6.1 Klein Laboratoriummateriaal

Maatkolven

Pipetpunten

Filters voor injectiespuiten (porositeit 0.45 µm)

Injectiespuiten van 10ml

Extractiebuizen van de microgolfoven

Handschoenen

Spatel

Vortex

Magnetische roerstaafjes

Conische buizen van 50 mL (aangepast voor centrifugatie op 10.000 t/min)

Conische buizen van 15 mL met schroefdop

Gegradueerde polypropyleen buizen 50 ml (PP tubes), klasse A geijkt

Destillatie systeem voor aanmaak van dubbel gedestilleerd water

Monsterwisselaar ICP-MS

HPLC: Monsterwisselaar HPLC

Vials voor de monsterwisselaar van de HPLC

Anionenuitwisselingskolom (Hamilton PRP-X100, 250x46 mm, deeltjes 10 µm)

Prekolom (Hamilton PRP-X100 guard kolom)

HPLC-pompen

Controller voor kolomoven

Oven voor de kolom

6.2. Specifieke reactieven

Alle reactieven worden bewaard bij omgevingstemperatuur (20±5 °C) tenzij anders is aangeduid.

VAR-TUNE 5ppb: Optimalisatieoplossing VAR-TS-MS Varian©multi-elementoplossing, verdund tot 5 µg.L-1

. Om

deze oplossing te bereiden moet de stockoplossing VAR-TS-MS (10 mg.L-1

) verdund worden.Daartoe wordt 25µL

stockoplossing en 2 mL geconcentreerd HNO3 in een PP tube van 50 mL gebracht en aangevuld met dubbel

gedistilleerd water tot de maatstreep. Indien een grotere tube of maatkolf wordt gebruikt dienen de hoeveelheden

verhoudingsgewijs aangepast te worden.

Ammoniakoplossing NH3 25%, p.a.

Ammoniumcarbonaat poeder (CH6N

2O

2 * CH

5NO

3 (1:1)), p.a.

Ammoniumcarbonaatoplossing van 40mM op pH 9.4. Om deze oplossing te bereiden moet 6.28 g/L

ammoniumcarbonaat opgelost worden in milliQ-water, en aangepast worden met NH3 25% (~4.5ml per liter) tot

pH 9.4.

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L’application d’un programme de chauffe adéquat et l’agitation des échantillons au moyen d’une puce magnétique,

assure ensuite l’extraction de l’As de l’échantillon. Le milieu oxydant entraine l’oxydation de l’ AsIII

en AsV

. De ce fait tout

l’arsenic inorganique dans l’extrait sera présent sous forme d’AsV

. Après la fin du programme de chauffe et

refroidissement des tubes, les échantillons sont prêts à être analysés par HPLC-ICP-MS.

4.2 Mesure

Les blancs, les étalons et les solutions d’échantillons sont placés dans le carrousel du passeur d’échantillons de l’HPLC. Le

système HPLC-ICP-MS et l’analyse sont gérés par les logiciels ICP-MS_expert et Galaxie. Ils permettent de piloter et de

contrôler toutes les fonctions de l’appareil de mesure, la programmation de l’élution des échantillons ainsi que

l’interprétation, le traitement et l’archivage des résultats bruts.

5.Paramètres de validation

Voir dossier de validation

6.Fournitures

6.1. Petit matériel de laboratoire

Ballons jaugés

Tips pour pipettes

Seringues de 10ml

Filtres pour seringue (porosité 0.45 µm)

Récipients d’extraction du four micro-onde

Gants

Spatule

Vortex

Puces magnétiques

Tubes coniques de 50 mL (adapté pour la centrifugation à 10.000 tr/min)

Tubes coniques de 15 mL avec bouchon

Des tubes en polypropylène, gradués (tubes PP), jaugés classe A

Système de distillation pour la production de l’eau distillée

Echantillonneur ICP-MS

HPLC : Echantillonneur HPLC

Vials pour l’échantillonneur HPLC

Colonne échangeuse d’anions (Hamilton PRP-X100, 250x46 mm, particules 10 µm)

Précolonne (Hamilton PRP-X100 guard column)

Pompes HPLC

Four pour la colonne

Contrôleur four colonne

6.2. Réactifs spécifiques

Sauf mention contraire, tous les réactifs sont conservés à température ambiante (20±5°C)

VAR-TUNE 5ppb: solution d’optimisation VAR-TS-MS Varian©multi-element diluée à 5 ppb/L. Pour préparer cette

solution, il faut diluer la solution mère VAR-TS-MS (10 mg/L). Pour ce faire, mettre 25 µL de solution mère et 2

mL HNO3 concentré dans un tube PP de 50 mL et compléter jusqu’au trait avec de l’eau bidistillée. Si un tube ou

un ballon jaugé plus grand est utilisé, les quantités à pipeter doivent être ajustées proportionnellement.

Solution d’ammoniac NH3 25%, p.a.

Carbonate d’ammonium en poudre (CH6N

2O

2 * CH

5NO

3) p.a.

Carbonate d’ammonium, solution de 40mM à pH 9.4. Pour préparer la solution il faut dissoudre 6.28 g/L de

carbonate d’ammonium dans de l’eau MQ et ajuster le pH avec NH3 25% (~4.5ml per liter) jusque pH 9.4.

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pH buffers (pH4 en pH7) voor kalibratie pH meter

Aceton, technical

Methanol, HiPerSolv CHROMANORM, for HPLC gradient grade

Waterstof peroxide oplossing (30%), p.a

RBS 25

Salpeterzuur HNO3 conc

(68%), kwaliteit extra pur.

Salpeterzuur oplossing HNO3 0.11 M (bereiding: 7.26 ml HNO

3 conc in 1L milliQ-water)

Salpeterzuur oplossing HNO3 0.1 M in 3% H

2O

2 (bereiding: 650 µl HNO

3 conc en 10 mL H

2O

2 30% aanlengen

tot 100 mL met milliQ-water)

6.3. Referentiematerialen

CRM: “NMIJ 7503 a, Rice flour” of analoge CRM. NMIJ 7503 a: gecertificeerd totaal As gehalte: 98 ± 7 µg/kg;

gecertificeerde concentratie AsIII

: 71.1 ± 2.9 µg/kg; gecertificeerde concentratie AsV

: 13.0 ± 0.9 µg/kg. Som anorganisch

arseen 84.1 ± 3 µg/kg. Wordt bewaard bij <28°C.

AsV

: arsenic (V) oxide hydrate in H2O 1000 mg/L, wordt bewaard bij 20±5°C .

AsB: arsenobetaine, wordt bewaard bij 5±3 °C.

DMA: dimethylarsinic acid, wordt bewaard bij 5±3 °C.

MMA: monosodium methyl arsonate, wordt bewaard bij 5±3 °C.

7.Uitrustingen

ICP-MS (VARIAN 820) met computerprogramma’s : Varian ICP-MS_expert en Varian Galaxie

Analytische balans

Microgolfoven voor de extractie

Pipetten met regelbaar volume

pH meter

Koelkast (5±3 °C) Milli-Q system

Centrifuge

8.Werkwijze

8.1. Reiniging

Extractiebuizen: 15 mL HNO3 (25 %) in de buizen brengen, ze sluiten en in de carrousel van de microgolfoven

plaatsen. Het verwarmingsprogramma “Wash 180C 270710” toepassen. Na afkoelen, de mineralisatiebuizen en

de stoppen 1 maal spoelen met dubbel gedistilleerd water en 1 maal met milliQ-water. De buizen zijn dan na

drogen klaar voor de extractie.

In het geval er vet achterblijft in de buizen na de extractie van bepaalde stalen, de binnenkant van de buizen

reinigen met RBS 25 en/of aceton vooraleer over te gaan tot de hogerbeschreven reiniging.

Magnetische roerstaafjes: minstens 12 uur in 10% HNO3 laten weken, daarna 3 maal spoelen met milliQ-water en

laten drogen.

PP tubes : de gegradueerde tubes die gebruikt worden voor de bereiding van de standaarden, worden vóór het

gebruik gespoeld met milliQ-water.

Pipetpunten: de punten van 5 en 10 mL moeten gespoeld worden met de oplossing die moet gepipetteerd worden

vooraleer ze te gebruiken voor het bereiden van de oplossingen.

Anionenuitwisselingskolom: voor elk gebruik moet de kolom gereinigd worden met milliQ-water gedurende één uur

minimum aan een debiet van 0,5 mL/min.

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Tampons pH pour la calibration du pH mètre (pH4 en pH7)

Solution de peroxide d’hydrogène (30%)

Acide nitrique HNO3

(68%), qualité extra pur

Acide nitrique HNO3 dilué 0.11 M

(préparation: 7.26 ml HNO

3 conc dans 1L eau milliQ)

Acide nitrique HNO3

dilué 0.1 M contentant 3% H2O

2 (préparation: 650 µl HNO

3 conc et 10 mL H

2O

2 30%

ajuster jusque 100 mL avec de l’eau milliQ)

Acetone, technical

Méthanol, HiPerSolv CHROMANORM, for HPLC gradient grade

RBS 25

6.3. Matériaux de référence

MRC : “NMIJ 7503 a, Rice flour” ou analogue. NMIJ 7503 a: concentrations certifiées : arsenic total: 98 ± 7 µg/kg; AsIII

:

71.1 ± 2.9 µg/kg; AsV

: 13.0 ± 0.9 µg/kg. Arsenic inorganique = AsIII

+AsV

= 84.1 ± 3 µg/kg. Est stocké à <28°C.

AsB: arsenobetaine p.a., est conservé à 5±3 °C.

DMA: dimethylarsinic acid, est conservé à 5±3 °C.

MMA: monosodium methyl arsonate, est conservé à 5±3 °C.

AsV

: arsenic (V) oxyde hydrate dans H2O 1000 mg/L, conservé à 20±5°C.

7.Equipements

ICP-MS (Varian 820) avec les logiciels : VARIAN ICP-MS_expert et VARIAN Galaxie

Balance analytique

Four micro-onde pour extraction

Pipettes à volume réglable

pH mètre

Frigo (5±3 °C)

MilliQ system

Centrifuge

8.Instruction

8.1. Nettoyage

Récipients d’extraction : ajouter 15 mL d’HNO3 à 25%, fermer les tubes, les placer dans le carrousel du micro-

onde. Appliquer le programme de chauffe « Wash 180C 27071». Après refroidissement, rincer une fois les

récipients et les bouchons à l’eau bidistillée et 1 fois à l’eau milliQ. Les récipients qui sont ainsi, après séchage,

prêt pour l’extraction.

En cas de dépôt graisseux, nettoyer l’intérieur des récipients au RBS 25 et/ou à l’acétone avant de procéder au

nettoyage décrit.

Puces magnétiques : mettre pendant au moins 12 heures dans du HNO3 10% et

ensuite rincer 3x à l’eau milli-Q

et laisser sécher.

Tubes PP : les tubes gradués utilisés pour la préparation des solutions étalons doivent être rincés à l'eau milliQ

avant utilisation.

Pointes pour micropipettes : les pointes de 5 et 10 mL doivent être rincées avec la solution à transférer avant de

les utiliser pour préparer des solutions.

Colonne échangeuse d’anions : avant chaque utilisation, la colonne doit être nettoyée avec de l’eau milliQ

pendant une heure au minimum à un débit de 0,5 mL/min.

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De prekolom: Een spoeling van de prekolom met een 1 % oplossing van salpeterzuur kan nodig zijn indien de

gemeten druk te sterk varieert, of abnormaal hoog is (cf. C:\Documents and Settings\CODA\My

Documents\general\logbooks). Vooraleer de spoeling aan te vatten moet de prekolom verplicht van de kolom

afgekoppeld worden.

Gedetailleerde informtie i.v.m het onderhoud en het gebruik van de kolommen en prekolommen is terug te vinden in het

document : “SOP/TRA/ANA/03/DOC01” ‘Reinigen en onderhoud van de kolom, pre-kolom en

chromatografiesysteem’(zie SOP/TRA/ANA/03).

8.2. Voorbereiding van de stalen (Extractie)

1. Een deel van het gehomogeniseerde staal (zie SOP/TRA/PRE/01) afwegen in een extractiebuis (in tweevoud). Dit

gewicht is afhankelijk van het staal. Als richtlijn wordt maximum ± 2 g vers materiaal afgewogen en ± 0.5 g droog

materiaal, voor vloeistoffen is dit maximum ± 1mL. Het juiste afgewogen gewicht wordt genoteerd op het document

“SOP/TRA/ANA/04/DOC02 : Formulier voor de registratie van de technische parameters” (in bijlage 2) ten einde de

verdunningsfactor te kunnen berekenen. Na toevoegen van 9mL HNO3 0.11 M en 1 ml H

20

2 30%, waarbij zoveel

mogelijk materiaal dat op de wanden plakt naar beneden wordt gespoeld, wordt een magnetische roerstaaf

toegevoegd, wordt de buis gevortext (om materiaal te bevochtigen) en worden de extractiebuizen gesloten en in de

carrousel geplaatst. De resulterende verdunningsfactor ligt typisch tussen 6=(2+10)/2 en 68=(0,15+10)/0,15. De

procedureblanco’s en de CRM(s) (ook in 2 herhalingen) worden op dezelfde manier behandeld als de stalen.

2. De extractiebuizen worden per 16 of per 24 buizen in de carrousel van de microgolfoven geplaatst en dit zo

symmetrisch mogelijk om een zo gelijkmatig mogelijke temperatuurverdeling, die gemeten wordt met IR cellen, te

verkrijgen. De carrousel wordt in de microgolfoven geplaatst, de deur wordt gesloten en het

verwarmingsprogramma met roerfunctie wordt opgestart. Het programma is “MAE As 90.27” (temperatuurstijging

tot 90 °C gedurende 7 minuten waarna de temperatuur op 90 °C gehouden wordt gedurende 20 minuten;

roersnelheid op 3).

3. Na afkoelen worden de extractiebuizen geopend en wordt de oplossing in een conisch buisje (voor centrifugatie) van

50 mL gebracht. De oplossing wordt zo gecentrifugeerd gedurende 10 minuten bij een snelheid van 12500 g

(10000 rpm op Juan centrifuge). Het supernatans wordt overgebracht in een spuit waarvan voordien de zuiger werd

verwijderd en waarop een filter werd geplaatst (porositeit 0.45 µm). De oplossing wordt aldus gefiltreerd en het

filtraat wordt in buizen van 15 mL gebracht die afgesloten worden met een stop en in de koelkast (5±3°C) bewaard

worden tot de analyse aanvangt.

8.3. IJking, ijkstandaarden en procedureblanco’s

HPLC is een kwalitatieve en kwantitatieve analysemethode. De identificatie van de in het staal aanwezige verbindingen

gebeurt door vergelijking van de retentietijden van de verschillende geëlueerde species met de retentietijden van de As

species aanwezig in de standaardoplossing die naast AsV

, ook de organische species AsB, DMA en MMA bevat omdat

deze frequent aanwezig zijn in de betreffende matrices en zo, ten informatieve titel, tevens informatie over deze species

kan bekomen worden. De concentratie van de aanwezig species kan bepaald worden met behulp van een calibratiecurve

op vijf niveau’s (0; 0,5; 1; 2 en 5 µg.L-1

). In het kader van dit proefschrift is enkel de kwantificatie van AsV

verplicht.

Een intermediaire oplossing (‘SolB As b’) die de 4 As-species bevat aan 250 µg/L, wordt bereid door verdunning van

individuele geconcentreerde ijkstandaarden van 1000 µg/L. De bereiding van de afzonderlijke ijkstandaarden van 1000

µg/l wordt in detail weergegeven in tabel 1. As V

wordt als oplossing (1000 µg/L) aangekocht.

AsB DMA MMA

arsenobetaine dimethylarsinic

acid

monosodium

methylarsonate

afwegen (mg) 47,5 170,56 109,73

aanlengen tot (ml) 20 100 50

conc opl (ppm) 1000 1000 1000

Tabel 1 : Bereiding van de individuele standaarden van 1000 mg/L

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Pré-colonne : un rinçage de la pré-colonne avec une solution d’acide nitrique 1% peut s’avérer nécessaire si la

pression mesurée varie de manière importante, ou est anormalement élevée (cf. C:\Documents and

Settings\CODA\My Documents\general\logbooks). Il faut impérativement déconnecter la pré-colonne de la

colonne avant de procéder au nettoyage.

Des informations détaillées sur l’entretien et l’utilisation des colonnes et pré-colonnes sont décrites dans le document

“SOP/TRA/ANA/03/DOC01 : Nettoyage et entretien colonne, pré-colonne et système chromatographique” (voir

SOP/TRAANA/03).

8.2. Préparation des échantillons (Extraction)

1. Peser une partie de l’échantillon homogénéisé (voir SOP/TRA/PRE/01) dans le récipient d’extraction (2 répliques par

échantillon). Le poids dépend du type d’échantillon : un maximum de ± 2 g pour les échantillons frais, un maximum

de ± 0.5 g pour les échantillons secs et un maximum de ± 1 mL pour les boissons. Le poids exacte est noté dans le

document “SOP/TRA/ANA/04/DOC02 : Formulaire pour l’enregistrement des paramètres techniques » (cf. annexe 2)

afin de pouvoir calculer le facteur de dilution exacte. Ajouter 9,00 mL HNO3 0.11 M et 1 ml H

20

2 30%, en forçant le

matériel qui est resté attaché aux parois à descendre vers le fond du tube. Puis ajouter une puce magnétique, fermer

les récipients et les placer dans le carrousel. Le facteur de dilution est compris entre 6=(2+10)/2 et

68=(0,15+10)/0,15. Préparer les blancs procédé et les MRC, en 2 répliques, de la même manière.

2. Les récipients sont placés dans le carrousel du micro-onde au nombre de 16, 24 ou 40 de manière symétrique dans le

souci d’assurer une mesure homogène de la température par les cellules IR de la sonde. Introduire le carrousel dans le

four à micro-onde, fermer la porte et enclencher le programme de chauffe « MAE As 90.27 » qui correspond à

une montée en température jusqu'à 90°C pendant 7 minutes, ensuite la température est maintenue à 90°C durant 20

minutes (vitesse d’agitation : niveau 3).

3. Après refroidissement, ouvrir les récipients et transférer la solution dans un tube conique de 50 mL, destiné à la

centrifugation. Ces tubes sont ensuite centrifugés pendant 10 minutes à une vitesse de 12500 g (10000 rpm sur

centrifuge Juan). Les surnageants sont transférés dans une seringue préalablement séparée de son piston et munie

d’un filtre (porosité : 0.45 µm). La solution filtrée sera directement récupérée dans des tubes coniques de 15 mL,

fermés par un bouchon, et stockés au frigo (5±3°C) en attendant d’être analysés.

8.3. Etalonnage, étalons, « blancs procédé »

L’HPLC est une méthode d’analyse qualitative et quantitative. L’identification des espèces est rendue possible grâce à la

comparaison des temps de rétention des espèces présentes dans l’échantillon avec celles d’une solution étalon éluée

dans les mêmes conditions. La solution d’étalon utilisée contient en plus de l’AsV

, les espèces organiques AsB, DMA et

MMA qui peuvent être présentes dans les matrices concernées. Ceci permet, à titre informatif, d’obtenir en même temps

des informations sur les concentrations de ces espèces. La quantité de chaque espèce est déterminée au moyen d’une

courbe de calibration qui est construite à partir de cinq solutions étalons (0 ; 0,5 ; 1 ; 2 et 5 µg.L-1

). Dans le cadre de

cette instruction seulement la quantification d’AsV

est exigée.

A cet effet, une solution intermédiaire (‘SolB As b’) qui contient les quatre espèces d’intérêt à 250 µg/L, est préparée par

la dilution d’étalons individuels concentrés (1000 µg.L-1

). La préparation de ces étalons est détaillée dans le tableau 1.

AsV

est acheté en solution (1000 µg/L).

AsB DMA MMA

arsenobetaine dimethylarsinic

acid

monosodium

methylarsonate

afwegen (mg) 47,5 170,56 109,73

aanlengen tot (ml) 20 100 50

conc opl (ppm) 1000 1000 1000

Tableau 1 : Préparation des étalons individuels à 1000 mg/L

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Om de ‘SolB As b’ te bereiden wordt 62,5 µl van elke ijkstandaard aan 1000 mg/L genomen en overgebracht in een

maatkolf van 250 mL. Na aanlenging tot de maatstreep met MilliQ water bedraagt de uiteindelijke concentratie van elke

species 250 ppb. Deze oplossing mag maximaal gedurende 35 dagen gebruikt worden en dient gestockeerd te worden

in de koelkast (5±3°C).

Het gamma van werkstandaarden wordt bereid door opeenvolgende verdunningen van de intermediaire oplossing ‘SolB

As b’. De bereiding van deze standaarden is weergegeven in Tabel 2 voor gebruik van PP tubes van 50 mL. Indien

andere formaten worden gebruikt moeten de hoeveelheden proportioneel worden aangepast. Elke dag wanneer analyses

uitgevoerd worden moeten de ijkstandaarden vers bereid worden.

Volume van de oplossing

‘B inorganic’

(µL)

Volume HNO3 68%

(µL)

Volume H20

2 30%

(µL)

Calibratie blanco 0 326 5000

Standaard 1. 0,5 µg.L-1

100 326 5000


200 326 5000


400 326 5000


1000 326 5000

Tabel 2: Bereiding van de 4 niveau’s van standaardoplossingen in tubes van 50 mL

Een onafhankelijke controlestandaard van 5 µg/l (QC) zal op dezelfde wijze gemaakt worden als beschreven in Tabel 2,

en vertrekkende vanaf een intermediaire oplossing ‘SolB As b ctrl’ die niet degenene is waarmee de standaarden van de

calibratiereeks werden gemaakt. Deze onafhankelijke standaard zal gemeten worden aan het begin en aan het einde

van de reeks stalen.

Nadat de maatkolven aangevuld zijn tot de maatstreep worden de oplossingen overgebracht in vials voor de meting.

De “procedureblanco’s” zijn bedoeld om de verschillende stappen in de voorbereiding van de stalen te controleren. Ze

omvatten dan ook alle behandelingen, het wassen en de gebruikte reactieven gedurende de extractie, maar dan zonder

staal. De “procedureblanco’s” worden uitgevoerd in twee herhalingen ten einde een representatief resultaat voor de

procedure te bekomen en de afwezigheid van contaminaties na te gaan.

In het geval de concentratie in een extract hoger is dan de geldende calibratierange (zei validatiedossier) moet deze

worden verdund voor analyse. Deze verdunning gebeurt met de oplossing gebruikt als ‘calibratie blanco’ (zie tabel 2).

8.4. Meting en export van resultaten

8.4.1. Opstarten van het apparaat.

8.4.1.1. ICP-MS

Omwille van de stabiliteit en het behoud van de luchtledigheid in de ICP-MS spectrometer, blijft het toestel steeds onder

spanning en blijven de vacuumpompen in werking.

Opstarten van de koeler (temperatuurregeling op 20°C)

De toevoer van de gassen controleren:

Ar: 7 bar (minimum 6,0 - maximum 8,3),

H2 :4 bar (minimum 2,75 - maximum 4,8)

Nagaan van de toestand van de leidingen van de peristaltische pomp en deze vervangen indien er zichtbare

slijtage wordt waargenomen (aanvoerleidingen zwart-zwart en afvoerleidingen blauw-blauw of grijs-grijs)

Indien nodig het reservoir met spoelvloeistof (HNO3 2%) aanvullen

Het niveau van de vloeistof in het reservoir voor de afvalvloeistoffen controleren en indien nodig ledigen

De autosampler van de ICP-MS aanschakelen

Opstarten van de computer en het programma ICP_MS Expert.

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Pour la préparation de la solution ‘SolB As b’’, on prélève 62,5 µL de chaque étalon à 1000 mg/L que l’on transfère

dans un ballon jaugé de 250 mL. Après mise au trait avec de l’eau milliQ, la concentration finale pour chaque espèce est

de 250 ppb. Cette solution peut être utilisée au maximum pendant 35 jours et doit être stockée au frigo (5±3°C).

Les solutions étalons utilisées pour la calibration sont obtenues par la dilution de la solution ‘SolB As b’ dans des ballons

jaugés de 25 mL. La préparation des étalons est détaillée dans le tableau 2, pour des tubes PP de 50 mL. Si des autres

formats sont employés, les quantités doivent être ajustées proportionnellement. Ces solutions doivent être préparées lors

de chaque nouvelle journée d’analyse.

Volume à prélever

de la solution ‘B inorganic’

(µL)

Volume HNO3 68%

(µL)

Volume H20

2 30%

(µL)

Blanc d’étalonnage 0 326 5000

Etalon 1. 0,5 µg.L-1

100 326 5000


200 326 5000


400 326 5000


1000 326 5000

Tableau 2 : Préparation des quatre solutions étalons pour des tubes de 50 mL

Une solution étalon indépendante de concentration 5 µg/l (QC) sera préparée comme décrit dans le tableau 2, au départ

d’une solution intermédiaire ‘SolB As b ctrl’ qui n’est pas celle avec laquelle l'étalonnage a été réalisé. Cette solution

indépendante sera mesurée au début et à la fin de la séquence d’analyse.

Après avoir porté les solutions au trait avec de l’eau milliQ, celles-ci sont transvasées dans des vials pour l’analyse.

Les blancs procédé sont censés représenter l’ensemble des étapes de la préparation de l’échantillon. Ils comprennent

donc toutes les manipulations, la vaisselle et les réactifs utilisés dans le procédé sans que l’échantillon intervienne. Les

blancs procédé sont réalisés en deux répétitions afin d’assurer une réelle représentativité du procédé et pour vérifier

l’absence des contaminations.

Quand la concentration d’un extrait est plus haute que la courbe de calibration valide (cf dossier de validation), il faut le

diluer pour l’analyse. Cette dilution est faite avec la solution utilisée comme ‘blanc d’étalonnage’ (cf. tableau 2).

8.4. Mesures et exportation des résultats

8.4.1. Mise en route de l’appareillage

8.4.1.1 ICP-MS

Pour des raisons de stabilité et de conservation du vide dans les spectromètres ICP-MS, le spectromètre reste toujours sous

tension, pompes à vide en fonction.

Mettre sous tension le refroidisseur (température set à 20°C).

Vérifier les alimentations en gaz :

Ar : 7 bars (minimum 6,0 - maximum 8,3 bars)

H2 : 4 bars (minimum 2,75 - maximum 4,8 bars)

Vérifier l’état des tuyaux de la pompe péristaltique et les changer en cas d’usure visible (tuyau d’arrivée noir-noir

et tuyau d’évacuation bleu-bleu).

Compléter si besoin le bidon de rinçage du passeur (HNO3 2%).

Vérifier le niveau de liquide dans le bidon de récupération, si nécessaire procéder à l’évacuation du trop-plein.

Allumer le passeur d’échantillon de l’ICP-MS.

Démarrer le système informatique et le logiciel ICP-MS_Expert.

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Het plasma ontsteken via het icoon

Indien zich een probleem voordoet tijdens de ontsteking, op de oranje noodstopknop drukken die vooraan op de

spectrometer is aangebracht. Nadien nogmaals op dezelfde knop drukken om de ontsteking van het plasma

opnieuw mogelijk te maken.

Het CRI-gas openzetten en de leidingen spoelen door op ‘Actions’ – ‘CRI gas supply purge’ – ‘Test’ te clicken.

Het werkblad « speciationAs.MSWS » inladen en er de optimalisatieparameters van een vorige analysedag in

copiëren (C:\Program Files\Varian\ICP-MS Expert\Run\My Results\Speciation\jaar (jaar in omloop)). Indien deze

file beschadigd is kan een gelijkaardige file geopend worden vanaf een template met dezelfde naam via ‘File-

new- from template’.

Het document “SOP/TRA/ANA/03/DOC02 : Het opmaken van een nieuw werkblad voor anorganisch As (ICP-

MS_expert)” (zie SOP/TRA/ANA/03) beschrijft hoe dergelijk werkblad nieuw kan aangemaakt worden.

De bemonsteringssonde wordt in water of in aangezuurd water gedompeld en men laat het apparaat opwarmen

gedurende 30 minuten. Gebruik de knop ‘Instrument’ en vervolgens ‘Autosampler control’ om de positie van het

buisje aan te geven.

Nagaan of het pompen van de vloeistof correct verloopt : aankomst (aan de nebulizer) en afvoer (aan het

afvalvat).

Het document “SOP/TRA/ANA/03/DOC03 : Voorzorgen en onderhoudsacties voor de ICP-MS” (zie

SOP/TRA/ANA/03) beschrijft bijkomende acties en voorzorgsmaatregelen die regelmatig dienen genomen te

worden om voortdurend een goede functionaliteit van de ICP-MS te garanderen.

8.4.1.2. HPLC

De autosampler, 2 HPLC-pompen en de kolomoven aanschakelen

De fles die bedoeld is voor het spoelen van de injector vullen met H20

bid

De prekolom installeren in de houder en het geheel handvast aanschroeven

De kolom verbinden met de prekolom en de schroef die het geheel samenhoudt voldoende aanvijzen. Indien er

tijdens het gebruik lekken ontstaan kan het nodig zijn ze lichtjes verder aan te spannen of om de ferrule te

vernieuwen.

De blauwe leiding die van de autosampler komt aansluiten aan de prekolom en de rode leiding die naar de ICP-

MS gaat aansluiten aan de uitgang van de kolom. Vervolgens de kolomoven aanschakelen.

De solventenflessen die bestemd zijn voor pomp A en B bijvullen: Solvent A is een ammoniumcarbonaatbuffer

van 40 mM op pH 9.4 en solvent B is milliQ-water. Bereid een voldoende hoeveelheid van elk solvent om te

voorkomen dat de kolom droog komt in de loop van de analyse (risico op ingang van lucht in het systeem en

afname van de analytische performantie van de kolom). Elk staal zal ongeveer 11 mL verbruiken van solvent A.

Het niveau van het solvent in de afvalflessen controleren. Indien er te veel vloeistof aanwezig is wordt de fles

afgevoerd naar de kelder (zie PRO/5.1/04 : afvalverwijdering).

Het niveau controleren in de fles met dubbel gedistilleerd water voor de spoeling van de pompkoppen. Indien de

fles die onderaan staat vol is wordt ze overgegoten in of verwisseld met de bovenste fles; regel de

druppelsnelheid om een zo laag mogelijk debiet te bekomen.

Opstarten van het programma “Galaxie”

In de balk “Systems” klikt met op het het vakje “LC System” waardoor de pompen geïnitialiseerd worden. Deze

worden vanaf dan gecontroleerd door het programma Galaxie via de bovenvermelde weg en m.b.v het

volgende ikoon :

Een spoeling van het chromatografiesysteem met milliQ-water is noodzakelijk bij de aanvang van elke analyse.

Het debiet wordt geregeld op 0,5 mL/min, de samenstelling van het eluens op 100 % milliQ-water (solvent B), en

de tijd om tot het gewenste debiet te komen wordt op 5 minuten ingesteld. Deze spoeling (om het bewaarsolvent

uit de kolom te verwijderen) moet minstens 1 uur duren.

Wanneer de spoeling met milli-Q water beëindigd is, moet de kolom gespoeld worden met de mobiele fase met

100% solvent A bij een debiet van 1 mL/min gedurende minimum 30 minuten.

Wanneer de kolom voldoende geëquilibreerd is met het mengsel van de solventen dient het uiteinde van de rode

leiding die aangesloten is op de uitgang van de kolom verbonden te worden aan de verstuiver van de ICP-MS.

De aanvoerleiding op de peristaltische pomp van de monsterwisselaar van de ICP-MS wordt afgekoppeld.

De 2 peristaltische pompen die dienen voor de evacuatie van de spray-chamber worden aangezet en de tubings

worden erop gelegd.

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Allumer le plasma via l’icône suivante :

En cas d’allumage incorrect, appuyer sur le bouton orange d’arrêt d’urgence sur la face avant du spectromètre.

Ne pas oublier d’appuyer à nouveau sur le bouton orange sinon il n’est pas possible d’allumer le plasma.

Ouvrir l’arrivé des gaz CRI et purger le système en cliquant sur ‘Actions’ - ‘CRI gaz supply purge’-‘Test’.

Charger la feuille de travail « speciationAs.MSWS » et y copier les paramètres d’optimisation d’une journée

d’analyse précédente (C:\Program Files\Varian\ICP-MS Expert\Run\My Results\Speciation\AAAA (année en

cours)). Si ce fichier est endommagé, un fichier similaire, peut être ouvert à partir d’un template portant le même

nom, via ‘File-new-from template’.

Le document « SOP/TRA/ANA/03/DOC02: Configurer une nouvelle feuille de travail pour détermination de l’As

inorganic (ICP-MS_expert)» (voir SOP/TRA/ANA/03) décrit comment créer une telle feuille de travail.

Plonger la sonde dans une solution d’eau ou d’eau acidifiée, et laisser chauffer l’appareil pendant 30 min.

Utiliser

l’onglet ‘Instrument’ et ensuite ‘Autosampler control’ afin d’indiquer la position du tube.

Vérifier l’efficacité des pompages : arrivée (côté nébuliseur) et sortie (côté déchet).

Le document «SOP/TRA/ANA/03/DOC03: « Actions de précaution et maintenance pour l’ICP-MS” (voir

SOP/TRA/ANA/03) décrit des actions et précautions additionnelles à prendre régulièrement au niveau de l’ICP-

MS pour garantir en continu un bon fonctionnement.

8.4.1.2 HPLC

Mettre sous tension l’échantillonneur, les deux pompes pour HPLC et le four pour la colonne

Vérifier que la bouteille destinée au rinçage de l’injecteur soit remplie de H20bidi

Installer la pré-colonne dans son support, serrer l’ensemble mais pas de manière excessive

Connecter la colonne avec la pré-colonne, serrer suffisamment la vis qui maintient l’ensemble. Si éventuellement

lors de l’utilisation, des fuites apparaissent, resserrer légèrement ou remplacer la ferrule.

Connecter le tuyau bleu (sortant de l’échantillonneur) à la pré-colonne et le tuyau rouge à la sortie de la colonne

puis installer la colonne dans le four thermostaté. Allumer ensuite le four à colonne

Remplir les récipients pour les éluants avec les solvants suivant : le solvant A est une solution tampon de

carbonate d’ammonium 40 mM à pH 9.4 et le solvant B est de l’eau milliQ. Préparer une quantité suffisante de

chaque phase mobile afin d’éviter à la colonne de sécher en cours d’analyse (risque de laisser entrer de l’air

dans le système et de dégradation des performances analytiques). Chaque échantillon consommera 11 mL du

solvant A.

Contrôler le niveau du solvant dans les bouteilles de déchet, si nécessaire évacuer la bouteille vers la cave (voir

PRO/5.1/04 : élimination des déchets).

Contrôler le niveau de solvant dans les bouteilles contenant l’eau bidistillée pour la lubrification pour les têtes de

pompes. Si la bouteille du bas est remplie, transvaser son contenu dans (ou échanger avec) la bouteille du haut

et régler le goutte à goutte pour obtenir un débit le plus faible possible.

Démarrer le logiciel Galaxie

Dans l’onglet « Systems », cliquer sur la case à cocher « LC System », ce qui a pour conséquence d’initialiser les

pompes, elles sont désormais contrôlées par le logiciel Galaxie via l’onglet « Systems », dans le sous menu

symbolisé par l’icône suivante :

Un rinçage du système chromatographique par de l’eau milliQ est nécessaire avant toute analyse préalable.

Régler le débit sur 0,5 mL/min, la composition de l’éluant sur 100% d’eau milliQ (100 % solvant B), à atteindre

sur une durée de 5 min. Ce nettoyage doit durer au minimum une heure pour éliminer le solvant utilisé lors du

stockage de la colonne.

Lorsque le rinçage est terminé, il faut équilibrer la colonne en faisant passer de la phase mobile avec la

composition suivante : 100% du solvant A à un débit de 1 mL/min pendant au minimum trente minutes.

Lorsque la colonne a été suffisamment conditionnée avec le mélange d’éluants. connecter le tuyau rouge au

nébuliseur de l’ICP-MS. Relâcher le tuyau de l’échantillonneur de l’ICP-MS de la pompe péristaltique de l’ICP-MS.

Les 2 pompes péristaltiques pour l’évacuation de la chambre de nébulisation sont misent en marche et les

tubings sont fixés.

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8.4.2. Voorbereiding van de werkprogramma’s en van de analyse.

8.4.2.1. ICP-MS

Neem de file “speciationAs.msws”

Plaats de sonde in de VARTUNE 5 ppb en bekijk het signaal door op ‘start’ te klikken in het blad “optimization”

van het “Methode” menu. Wijzig eventueel de parameters in het menu, om het signaal te optimaliseren.

Er wordt aangeraden om minstens volgende waarden te bekomen:

Element (massa)

Benaderende intensiteit van het

signaal (in c/s)

In115

> 1,5.106

Th232

> 1,5.106

Be9

> 4.104

As75

< 4.102

Fractie oxiden en

dubbele ladingen

Ce/CeO < 3%

Ba/Ba++

< 3%

Na optimalisatie van het systeem, het aparaat nog gedurende 30 minuten laten stabiliseren met de

parameters van de dag, vooraleer de analyse te starten.

De ICP-MS is nu correct geconfigureerd en klaar voor de analyse van de stalen. Controleer of er geen

meetgegevens geregistreerd zijn in het deel ‘worksheet’ van de file. Indien dit wel het geval is dienen de

aanwezige cijfers uitgeveegd te worden gebruik makend van het menu “Edit/erase worksheet data” anders

zal de analyse niet opstarten.

BELANGRIJKE OPMERKINGEN

Zorg ervoor dat er slechts één werkblad geopend is op het ogenblik van de analyse.

Het plasma zal niet automatisch uitgaan, wat ook de gekozen regelingen zijn. Voor een langdurige

analysesequentie is het aan te raden een tijdvenster te kiezen dat moet toelaten verspilling van Ar te voorkomen.

8.4.2.2. HPLC

Maak een nieuwe analysereeks in Galaxie aan via het menu “Files”, “new”, “new sequence”. Geef een naam

aan de analysereeks en kies de optie “Arsenic” als analyse folder.

Begin met het invullen van het veld “method” met de analysemethode « SOP04_As Inorganic_SolA jjmmdd.METH

» (C:\Galaxie\Data\Arsenic), die de datum draagt verwijzend naar de aanmaak van de individuele

geconcentreerde standaardoplossingen.

Het document “SOP/TRA/ANA/04/DOC01 : Het opmaken van een nieuwe methode file voor As-speciatie in

Galaxie” (in bijlage 1) beschrijft hoe een nieuwe file voor de analysemethode kan aangemaakt worden voor het

geval hogergenoemde methodefiles verloren of beschadigd zijn.

Het volstaat een enkel veld in te vullen met de methode en vervolgens op de hoofding van de kolom te klikken en

ten slotte op het ikoon klikken om automatisch al de andere velden “method” voor de andere stalen in te

vullen.

Opgelet, op het einde van een analysereeks moeten 2 ‘shutdown’ stalen (vials gevuld met milliQ-Water)

toegevoegd worden en ingesteld worden met de respectievelijke methoden “lowflow0.2_20A80B_A.Meth” en

“lowflow02_20A80B_B.meth”. Deze twee methoden dienen om het debiet aan mobiele fase te verminderen eens

de analyse beëindigd is.

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8.4.2. Préparation des programmes de travail et d’analyse

8.4.2.1 ICP-MS

Accéder au fichier “speciationAs.msws”

Placer la sonde dans la solution VAR TUNE 5 ppb et regarder le signal qui en découle en cliquant sur ‘start’ dans

la feuille ‘Optimization’ dans le menu ‘Method’. Modifier éventuellement les paramètres du menu pour optimiser

le signal.

Il est conseillé d’avoir au moins les valeurs suivantes:

Elément (masse) Intensité approximative du signal

(en c/s)

In115

> 1,5.106

Th232

> 1,5.106

Be9

> 4.104

As75

< 4.102

Fraction des oxydes et des

doubles charges

Ce/CeO < 3%

Ba/Ba++

< 3%

Après optimisation du système, laisser encore l’appareil se stabiliser pendant 30 minutes avec les conditions du

jour, avant de démarrer les analyses.

L’ICP-MS est correctement configuré et prêt pour analyser les échantillons. Vérifier que la feuille de travail ne

contienne aucune donnée dans la partie ‘worksheet’. Dans le cas contraire effacer ces valeurs au moyen du

menu “Edit/Erase worksheet data ” ou sinon l’analyse ne pourra par démarrer.

REMARQUE IMPORTANTES

veiller à ce qu’une seule feuille de travail dans ICP-MS_expert soit ouverte au moment où l’analyse commence

Le plasma ne s’éteindra pas automatiquement quel que soit les réglages choisis. Pour de longue séquence

d’analyse, il est conseillé de choisir un créneau horaire permettant d’éviter le gaspillage de l’Ar

8.4.2.2 HPLC

Créer une nouvelle séquence d’analyse dans Galaxie, via le menu “Files”-“new”-“new sequence”. Attribuer un

nom à la séquence et choisir l’option “LC Arsenic” comme dossier d’analyse.

Commencer par remplir le champ « method » avec la méthode d’analyse « SOP04_As

Inorganic_SolAjjmmdd.METH qui porte la date de la préparation des standards individuelles concentrées »

(C:\Galaxie\Data\Arsenic)

Le document « SOP/TRA/ANA/04/DOC01 : Configurer une nouvelle méthode chromatographique pour la

spéciation (Galaxie)» (en annexe 1) décrit comment configurer une méthode d’analyse pour la spéciation).

Il suffit de remplir un seul champ avec le nom de la méthode puis de cliquer sur l’entête de la colonne et enfin

sur l’icône pour remplir automatiquement tous les autres champs « method ».

A la fin d’une séquence, deux échantillons ‘low flow’ (vial contenant de l’eau milliQ) doivent être ajoutés et réglés

respectivement sur les méthodes “ lowflow0.2_20A80B_A.Meth” et “ lowflow02_20A80B_B.meth.meth”. Ces deux

méthodes permettent de réduire le débit de la phase mobile une fois l’analyse terminée.

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De velden “Run Name (prefix)” invullen met de namen van de stalen. Een typsiche sequentie begint met twee

vials gevuld met de extractie-oplossing (0.1M HNO3 3 %H

2O

2=BG;background)) (ten einde de achtergrondruis

en de aanwezigheid van eventuele verontreinigingen te evalueren), vervolgens komen de procedureblanco’s, de

As ijkstandaarden (in stijgende concentratie) en het QC-staal (5ppb); tenslotte een oplossing van 1 %

salpeterzuur, een BG-staal en een milliQ_water, )gevolgd door de CRM(S) en de stalen. Op het einde van de

sequentie, vlak voor de “low flow” oplossingen wordt de onafhankelijk ijkstandaard van As (5 ppb) opnieuw

gemeten om de stabiliteit van het signaal na te gaan.

Het veld “Run Id postfix” invullen. Het eerste veld van de kolom kiezen en daarin het getal 1 invullen. Klikken op

de hoofding van de kolom en het ikoon

kiezen, waardoor een venster verschijnt dat toelaat om de rest van de velden automatisch in te vullen.

De analysereeks (sequentie) opslaan.

De autosampler van de ICP-MS (SPS-3) uitschakelen.

In de balk “Systems”, het ondermenu ICP kiezen dat wordt vorgesteld met volgend ikoon en op de knop

“connect” drukken. Deze actie koppelt de HPLC aan de ICP-MS. In dit stadium is het systeem klaar om de

verwerving van gegevens te beginnen.

8.4.2.3. Instellen van de monsterwisselaar van de HPLC

Het laatste apparaat dat moet geconfigureerd worden is de monsterwisselaar van de HPLC. Hiertoe dienen een aantal

parameters ingegeven te worden via het controlepaneel van het apparaat.

Na aanzetten van de autosampler dient op de knop die overeenkomt met het commando ‘auto page’ gedrukt te worden

en kunnen de volgende gegevens ingegeven worden:

Het nummer van de eerste te analyseren vial (in principe 1)

Het nummer van het laatste te analyseren vial (in principe gelijk aan het totaal aantal vials aanwezig in de

carrousel)

De analysetijd per staal: 10 minuten

Deze tijd stemt overeen met de tijd voor verwerving van een chromatogram, + 2 minuten voor het spoelen

van de naald van de injector en om naar het volgende staal te gaan.

Het injectievolume (in principe 60µL)

Het aantal injecties per vial (in principe 1)

8.4.2.4. Start van de analyse

Om de analyse te starten volstaat het om op de groene pijl te klikken aanwezig boven de analysereeks. Het systeem

maakt zich dan klaar om de analyse te starten (before run, prerun, stabilisaton delay: zichtbaar als stappen in Galaxie).

Als “waiting for injection” verschijnt in Galaxie, dan “start auto” op autosampler indrukken. Het geheel van de verwerving

en de controle gebeurt volledig en automatisch door de Galaxie-software.

8.4.3. Einde van de analyse

8.4.3.1. ICP-MS

Op het einde van de analysereeks wordt het plasma manueel gedoofd door te klikken op het

icoon

Na het doven van het plasma:

-wachten tot het einde van het aftellen van 120 s wat moet toelaten om de cones volledig te laten

afkoelen.

-de leidingen van de peristaltische pomp losmaken

-de stalenwisselaar uitschakelen

-de toevoer van H2 afsluiten; nooit de Ar aanvoer afsluiten

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Remplir les champs “Run Name (prefix)” avec les noms des échantillons. Typiquement une séquence commencera

par deux vials contenant la solution d’extraction (HNO3 0.1 M dans 3% H

2O

2 =BG (background)) (afin d’évaluer

le bruit de fond ainsi que la présence d’éventuelles impuretés), puis par les blancs procédés, les solutions étalons

(par ordre croissant de concentration) puis la solution étalon indépendante (5 ppb) (QC) et enfin une solution de

rinçage de 1% en acide nitrique suivi d’unautres BG et un vial contenant de l’eau milliQ avant les MRC et les

échantillons. A la fin de la séquence, avant les deux échantillons ‘shutdown’, un vial contenant de la solution

étalon indépendante (5 ppb) sera ajouté de nouveau pour évaluer la stabilité du signal.

Remplir le champ « Run Id postfix », sélectionner le premier champ de la colonne et y introduire le chiffre « 1 ».

Cliquer sur l’entête de la colonne et choisir l’icône :

une fenêtre apparait vous permettant de numéroter automatiquement le restant des champs.

Enregistrer la séquence.

Eteindre l’autosampler de l’ICP-MS (SPS-3)

Dans l’onglet « Systems », sélectionner le sous menu ICP et appuyer sur le bouton ‘connect’.

Cette action couple l’HPLC à l’ICP-MS. A ce stade le system est prêt à commencer l’acquisition des données

8.4.2.3. Configuration de l’échantillonneur de l’HPLC

Le dernier instrument à configurer est l’échantillonneur de l’HPLC, cette étape nécessite d’introduire certains paramètres

via le panneau de contrôle de l’appareil.

Après allumage de l’appareil, appuyer sur le bouton correspondant à la commande ‘auto page’ et entrer les informations

suivantes :

Le numéro du premier vial à analyser (par défaut : 1)

Le numéro du dernier vial à analyser (par défaut : le nombre total de vial présent dans le carrousel)

La durée d’analyse par échantillon: 17 minutes

Cette durée correspond au temps d’acquisition, défini dans la méthode, augmenté de deux minutes, c’est le

temps nécessaire pour rincer l’aiguille de l’injecteur et aspirer l’échantillon suivant

Le volume d’injection (par défaut : 60 µL)

Le nombre d’injections par vial (par défaut : 1)

8.4.2.4. Démarrage de l’analyse

Pour démarrer l’analyse il suffit de cliquer sur la flèche verte présente au-dessus de la séquence d’analyse. Le système se

prépare alors pour commencer l’analyse (before run, prerun, stabilisaton dealy: visible comme étapes dans Galaxie).

Quand ‘waiting for injection’ se montre dans Galaxie, le bouchon « start auto » sur l’autampler doit être activé.

L’ensemble de l’acquisition et du contrôle est totalement et automatiquement géré par Galaxie.

8.4.3. Fin de l’analyse

8.4.3.1 ICP-MS

A la fin de la séquence d’analyse, éteindre le plasma en cliquant sur l’icône

Après l’extinction du plasma :

- Attendre la fin du compte à rebours de 120 secondes permettant le refroidissement complet des cônes

- Relâcher les tuyaux de la pompe péristaltique

- Eteindre l’échantillonneur de l’ICP-MS

- Fermer la vanne d’arrivé d’H2, ne jamais couper l’arrivée d’Ar

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8.4.3.2. HPLC

De analysesequentie opslaan en sluiten

De chromatogramen zijn automatisch opgeslagen in een dossier dat de datum draagt van de analyse

(C:\Galaxie\Data)

De leiding die de uitgang van de kolom met de verstuiver verbindt losmaken en in de afvalfles brengen.

De carrousel uit de monsterwisselaar nemen en eventueel de “vials” bewaren in de koelkast.

Het spoelen van de kolom uitvoeren door er een aangepast solvent door te sturen gedurende 1 uur aan een

snelheid van 0,5 mL/min . Het type aangepast solvent is afhankelijk van de verwachte duur dat de kolom nadien

niet gebruikt zal worden:

-indien de verwachte duur minder dan 3 dagen bedraagt, dient de kolom gespoeld te worden met

milliQ-water

-indien de verwachte duur meer dan 3 dagen bedraagt, moet de kolom gespoeld worden, eerst met

MilliQ-water en dan met een oplossing van minstens 50% methanol, om de groei van bacteriën in de

kolom te verhinderen

Eens de spoeling is beëindigd, het debiet op 0 mL/min brengen op een tijd van 5 minuten.

Niet vergeten om voor het stockeren van de kolom, de 2 plastiek doppen erop te vijzen om te verhinderen dat het

solvent verdampt tijdens de stockage en de kolom zo uitdroogt.

De peristaltische pompen uitschakelen, evenals de kolomoven, de monsterwisselaar en de HPLC-pompen.

8.5. Behandeling van gegevens

8.5.1. Integratie van de pieken

De integratie en identificatie van elke piek die gedetecteerd wordt in een chromatogram gebeurt automatisch en

afhankelijk van de parameters in de methode die gebruikt wordt voor de chromatografische scheiding van het staal.

Een menselijke interventie is soms nodig om tot correcte resultaten te komen, bijvoorbeeld wanneer onbekende pieken

zich zeer dicht bij één van de te quantificeren pieken bevinden.

De corrigerende maatregelen zijn bvb. een manuele toewijziging van de integratielimieten van de pieken en een check of

de identificatie van de betrokken species juist is verlopen.

Om de integratielimieten van de pieken te corrigeren kunnen de groene en rode merkers die respectievelijk het begin en

het einde van de integratie aanduiden verschoven worden met behulp van de knop

De cursor van de muis verandert dan van vorm, een klik op de merker zet hem in de veranderingsmodus, en en tweede

klik valideert de gekozen positie als nieuwe positie van de merker.

Na het behandelen van de chromatogrammen, dienen deze bewaard en gesloten te worden.

8.5.2. Calibratiecurve

De concentratie van anorganisch As wordt berekend aan de hand van een calibratiecurve van AsV

(lineair model); door

gebruik van het mengsel van HNO3 en H

2O

2 als extractiemiddel, wordt As

III

immers ook omgezet tot AsV

. Deze rechte

resulteert uit de chromatogrammen van de 5 standaardoplossingen.

Vooraleer de calibratiecurve op te maken, dienen de chromatogrammen van de standaarden correct geïntegreerd te zijn

en zo bewaard te worden (via ‘File- save chromatogram’).

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8.4.3.2 HPLC

Sauver et fermer la séquence d’analyse

Les chromatogrammes sont automatiquement sauvegardés dans un dossier (C:\Galaxie\Data) comportant la

date d’analyse.

Retirer le tuyau qui relie la sortie de la colonne au nébuliseur de l’ICP-MS et le raccorder à la bouteille de déchets

Sortir le carrousel de l’échantillonneur et au besoin stocker les vials au frigo

Procéder au rinçage de la colonne en faisant passer le solvant adéquat pendant une heure à un débit de 0,5 mL.

Le type du solvant adéquat est fonction de la durée d’inutilisation :

- Si la durée prévue est inférieure à 3 jours, la colonne doit être rincée avec de l’eau milliQ

- Si la durée prévue est supérieure à 3 jours, la colonne doit être rincée, d’abord avec eau MilliQ et après

avec une solution contenant au moins 50% de méthanol, ceci afin de prévenir la croissance de bactéries

à l’intérieur de la colonne

Une fois le rinçage terminé, amener le débit à 0 mL/min sur une durée de 5 minutes. Ne pas oublier avant de

stocker la colonne, de visser les 2 embouts plastiques qui empêcheront l’évaporation du solvant en dehors de la

colonne et le séchage de la colonne.

Eteindre les pompes péristaltiques, le four pour la colonne et enfin l’échantillonneur et les pompes HPLC

8.5. Traitement des données

8.5.1. Intégration de pics

Par défaut, l’intégration et l’identification sont automatiques pour tout pic détecté dans un chromatogramme et

dépendent des paramètres de la méthode choisie pour l’élution de l’échantillon.

Une intervention humaine est parfois nécessaire pour obtenir des résultats corrects, par exemple si des pics inconnus

sortent très près d’un pic à quantifier.

Les mesures correctives possibles sont une assignation manuelle des limites d’intégration des pics et la vérification de

l’identification correcte des composés d’intérêt présent dans le chromatogramme.

Pour corriger les limites d’intégration des pics, des marqueurs de couleurs vertes et rouges indiquant respectivement le

début et la fin de l’intégration d’un pic peuvent être déplacés à l’aide du bouton suivant :

Le curseur de la souris change alors de forme, un clic sur un marqueur le place en mode édition et un second clic valide

la position choisie comme nouvelle position du marqueur.

Après le traitement des chromatogrammes, ils doivent être sauvegardés et fermés.

8.5.2. Courbe de calibration

La concentration d’arsenic inorganique est calculée au moyen de la droite d’étalonnage d’AsV

. Par l’utilisation du

mélange HNO3 et H

2O

2 dans la solution d’extraction, l’As

III

est convertie également en AsV

. La droite d’étalonnage est

construite à partir des chromatogrammes des 5 solutions étalons.

Avant de créer la courbe de calibration, les chromatogrammes des étalons doivent avoir été correctement intégrés et

sauvés (via ‘File-save chromatogram’).

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Voor het opmaken van de calibratiecurve dient alsvolgt gewerkt te worden:

1. Open de chromatogrammen van de standaarden, evenals de methode SOP04_As

Inorganic_SolAjjmmdd.METH , die de datum draagt (jjmmdd) verwijzend naar de preparatie van de

gebruikte geconcentreerde individuele ijkstandaarden .

2. Ga naar het gedeelte “Calibration” van de methode en verander de naam van de calibratiefile (“Calibration

Curve File”) door de analysedatum en een referentie die verband houdt met de geanalyseerde stalen en kies

de folder met de datum van de dag als opslaglokatie.

3. Save de methode in de folder met de datum van de analysedag met een nieuwe naam die begint met

REPR_SOP04_SolAjjmmdd_x.METH en die tevens een verwijzing draagt naar de

geanalyseerde stalen (x) (en sluit ze.

Selecteer een chromatogram en klik op de “reprocess” knop die zich in de menubar bevindt.

Selecteer vervolgens de volgende opties:

Voor de balk Parameters

-in de optie “Method file” kies de methode “REPR_SOP04_SolAjjmmdd_ref. i.vm. stalen.METH “

-“Sample type” = “Standard”

-“Calibration mode”=”Clear old points”, voor de eerste standaard en “add” voor de volgende standaarden

-“Level” voor de volgorde van de standaarden (1 voor de 0,5ppb standaard; 2 voor de 5,0 ppb; etc.)

Voor de balk Opties

-duidt alleen de optie “Calibration” aan

5. Klik op de knop “ reprocess”

6. Volg dezelfde procedure voor de 4 overige standaard chromatogrammen

Wanneer de calibratiecurve is opgesteld, dient ze nog geassocieerd te worden met de chromatogrammen van de stalen.

Dit kan in één keer gebeuren voor alle stalen. Hiertoe dient een “Reprocessing list” aangemaakt te worden” in Galaxie

(via “File” –“new” –“new Reprocessing list”). Hierin plaatst men, de chromatogrammen van de te behandelen stalen

evenals de de methode ‘REPR_SOP_04_SolA_jjmmdd_ref. i.v.m stalen.METH’, waarin de betrokken calibratiecurve werd

opgeslagen Zoals voor de analysereeks (sequentie), volstaat het om alle chromatogrammen te sluiten en op de groene

pijl te klikken die zich boven de lijst bevindt om de berekeningen te starten. Wanneer de berekeningen gebeurd zijn

dienen de chromatogrammen van de stalen geopend te worden om de integratie van de pieken na te kijken en indien

nodig aan te passen (vb. start en stop van de piek, basislijn).

8.6. Uitvoer van de resultaten naar een Excel file.

In Galaxie kunnen de chromatogrammen op drie manieren worden voorgesteld:

Het chromatogram alleen

Het chromatogram samen met een tabel die de verschillende integraties van pieken samen brengt evenals de

basislijn die de gebruiker kan toevoegen in functie van de resultaten van de scheiding.

Het chromatogram en een tabel, waarbij alle gegevens voor elke piek die op het chromatogram gedetecteerd

werden, worden voorgesteld. Zo vindt men dan ondermeer de naam van de As-species (indien deze kon

geïdentificeerd worden), de retentietijd, de oppervlakte, de concentratie van de species (na calibratie).

Om de gegevens verbonden met de pieken te exporteren volstaat het rechts op de tabel te klikken en de optie “copy” te

kiezen en vervolgens een excel file te openen en de gegevens er in te plakken.

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Procédure pour la création d’une courbe de calibration :

1. Ouvrir les chromatogrammes des étalons ainsi que la méthode « SOP04_As Inorganic_SolAjjmmdd.METH» qui

porte la date de la préparation des standards individuels concentrés.

2. Dans la partie « Calibration » de la méthode, modifier le nom du fichier de calibration (« Calibration Curve File »)

et le remplacer par la date d’analyse et une référence liée aux échantillons analysés. Choisir le dossier avec la

date du jour comme endroit de stockage.

3. Enregistrer le méthode dans le fichier qui porte la date du jour d’analyse avec un nouveau nom qui commence

par « REPR_SOP04_SolAjjmmdd_x_.METH » et qui porte également une référence liée aux

échantillons analysés (x) , puis fermer la méthode

4. puis fermer la méthode

5. Sélectionner un chromatogramme puis cliquer sur le bouton « reprocess » situé dans la barre de

menu puis sélectionner les options suivantes :

Pour l’onglet Parameters :

- choisir l’option « Method file » et indiquer la méthode « SOP04_As Inorganic_SolAjjmmdd_ref lié aux

échantillons.METH »

- « Sample Type » = « Standard »

- « Calibration mode » = « Clear old points » pour le premier étalon pour les autres choisir l’option « add »

- « Level » pour l’ordre du standard (1 pour l’étalon 0,5 ppb ; 2 pour le standard 5,0 ppb etc.).

Pour l’onglet Options :

- Ne cocher que l’option « Calibration »

6. Appuyer sur le bouton « reprocess »

7. Effectuer la même procédure pour les 4 chromatogrammes restant

Lorsque que la courbe de calibration est terminée, il faut encore l’associer avec les chromatogrammes des échantillons. Il

est possible d’effectuer cette manipulation en une fois pour tous les chromatogrammes. Pour cela on crée un fichier de

‘reprocessing list’ dans Galaxie (via ‘File’ – ‘new’ – ‘new reprocessing list’). On indique alors la méthode contenant la

courbe de calibration correspondant à l’analyse (REPR_SOP_04_SolA_jjmmdd_ref. lié aux échantillons .METH’) et puis les

chromatogrammes des échantillons à traiter. Comme pour la séquence d’analyse, il suffit de fermer tous les

chromatogrammes et d’appuyer sur la flèche verte située au-dessus de la liste pour démarrer le traitement des

chromatogrammes. Quand les calculs sont faits, les chromatogrammes des échantillons doivent être ouverts et

l’intégration doit être vérifiée et ajustée si nécessaire (p.ex. start et stop du pic, ligne de base).

8.6. Exportation des résultats vers un fichier Excel

Dans le programme Galaxie les chromatogrammes peuvent être présentés de trois manières possibles:

Le chromatogramme seul

Le chromatogramme accompagné d’un tableau qui regroupe les différents évènements d’intégration des pics et

de détection de la ligne de base que l’utilisateur peut ajouter en fonction des résultats de l’élution

Le chromatogramme et un tableau reprenant les informations pour chaque pic détecté dans le chromatogramme

parmi ces informations on retrouve le nom de l’espèce (si elle a pu être identifiée), son temps de rétention, son

aire, la concentration de l’espèce (après calibration).

Pour exporter les données liées aux pics, il suffit de faire un clic droit sur le tableau et de choisir l’option « copier» puis

d’ouvrir un fichier Excel et d’y « coller » les données.

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8.7. Technische moeilijkheden en/of defecten

8.7.1. ICP-MS

Indien er een probleem optreedt, wordt dit onmiddellijk op het scherm ICP-MS EXPERT weergegeven onder de vorm van

een foutmelding die de details van de anomalie weergeeft en de mogelijkheden om het op te lossen.

8.7.2. HPLC

De hulp van Galaxie is minder duidelijk en in het merendeel van de gevallen betreft het een overschrijding van de

maximum druk waarna een melding verschijnt.

9.Specifieke voorschriften (veiligheid, bioveiligheid en milieu)

Bij de verschillende stappen in de voorbereiding van de stalen moeten de operatoren handschoenen dragen

(bescherming tegen zuren en vermijden van contaminaties).

Bij het gebruik van de microgolfoven moet de afzuiging van de trekkast in werking zijn (eventuele toxische dampen).

Voor het bereiden van de bufferoplossing (loopmiddel A), moeten een beschermingsmasker, een veiligheidsbril en

handschoenen verplicht gedragen worden. De samenstelling is irriterend bij contact, ingestie en inademing.

Geconcentreerd salpeterzuur kan ernstige brandwonden veroorzaken. Voorkom huidcontact en inademing van dampen.

Tijdens de metingen met de ICP: de afzuiging van de gassen moet aangekoppeld zijn (toxische dampen en koeling van

het systeem).

Hoge concentraties anorganisch As kunnen toxisch zijn en potentieel kankerverwekkend. Draag handschoenen bij de

prepartie en manipulatie van geconcentreerde standaarden (≥1000mg/L) of poeders.

10.Interne controle

Bij de aanvang van elke reeks van analysen, wordt een CRM die representatief is voor de te meten stalen (plantaardige

voedingsmatrices) 2 maal gemeten.

Om de stabiliteit van het meetsignaal van het apparaat te controleren wordt aan het begin en op het einde van de

analysereeks een onafhankelijke ijkstandaard (QC) gemeten. De QC aan het begin van de meetreeks mag maximum

5% afwijken ten opzichte van de 5 ppb standaard gebruikt voor de kalibratie. De QC op het einde van de meetreeks mag

maximum 15% afwijken ten opzicht van de initiële QC.

Wanneer een afwijking wordt vastgesteld tijdens een analysecyclus of wanneer de resultaten voor de CRM(s) buiten de

grenzen liggen die vastgelegd zijn in de file ‘Accept CRM’ of (zie ook de acceptatiecriteria in de PRO/5.5/01/DOC02),

dan worden de analyses hernomen na een nieuwe tuning en stabilisatie van het apparaat.

11.Rapportering

Het intern rapport wordt opgemaakt in Excel. De naam van de excel file heeft de vorm

Jaarjaarmaandmaanddagdag_Asi_accred_referentie i.v.m. stalen_DATA en wordt bewaard onder ‘71/ICP-MS

VARIAN/Inorganic As/jaar/.

Het intern rapport omvat:

-Excel Sheet ‘Cal’: de calibratiecurve van AsV

(in te voeren in excel via een ‘print screen’ van de calibratiefile),

-Excel Sheet ‘Standards’: de chromatogrammen en data van de standaarden gebruikt voor de calibratiecurve,

-Excel Sheet ‘Resolution’: Op basis van het chromatogram van de 5ppb ijkstandaard zal voor het piekenpaar AsV

-MMA

de piekresolutie berekend worden aan de hand van de formule Rs= 2(Tr2-Tr1)/W1+W2), met Tr2 en Tr1 de

retentietijden van de twee opeenvolgende pieken, en W2 en W1 de piekwijdte van de overeenkomstige pieken aan de

basis. Zoals beschreven in het validatiedossier is deze piekwijdte equivalent aan de piekwijdte bij 13.4% van de

piekhoogte. Zowel de retentietijden als de piekbreedte bij 13.4% van de piekhoogte worden in Galaxie weergegeven in

het ‘results’ scherm van een chromatogram. Het volstaat om dit results-scherm van de 5ppb ijkstandaard, via copy-paste,

in deze excel sheet te copiëren (inclusief het chromatogram) en vervolgens de nodige Rs berekening te maken.

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8.7. Difficultés techniques et/ou pannes

8.7.1 ICP-MS

Si un problème survient, il est directement affiché sur l'écran ICP-MS_EXPERT sous forme d’un message d'erreur contenant

des détails sur l'anomalie identifiée et les solutions possibles.

8.7.2 HPLC

L’aide de Galaxie est moins explicite et dans la plupart des cas c’est essentiellement en cas de dépassement de la limite

de pression maximum qu’un message apparait.

9.Mesures spécifiques (sécurité, biosécurité et environnement)

Lors des étapes de préparation, les opérateurs doivent porter des gants (protection aux acides et minimisation des

contaminations).

Lors de l’utilisation du minéralisateur à micro-ondes la hotte d’aspiration doit être en fonctionnement (vapeurs toxiques

éventuelles).

L’acide nitrique concentré peut causer des brulures en cas de contact avec la peau. Eviter le contact direct avec la peau et

l’inhalation des vapeurs.

Lors de la préparation de la solution tampon (éluant A), le port d’un masque de protection et de lunette de sécurité est

obligatoire, ce composé est irritant par contact, ingestion et inhalation.

Lors des mesures en ICP-MS : l’évacuation des gaz doit être branchée.

Les concentrations élevées en arsenic inorganique peuvent être toxiques, carcinogènes. Le port de gants en nitrile est

donc obligatoire pour manipuler les standards concentrés (concentration ≥ 1000 ppm ou poudre).

10.Contrôle interne

Au début de chaque série d’analyses, un CRM considéré comme représentatif du reste des échantillons est mesuré en 2

répliques.

Pour assurer le contrôle de la stabilité de la réponse de l’appareillage, toute séquence analytique comprendra au début

et à la fin un passage d’une solution étalon (QC). Le QC au début du passage peut dévier de maximum 5% par rapport

à l’étalon de 5 ppb utilisé pour la calibration. Le QC à la fin du passage peut dévier de maximum 15 % par rapport au

QC initial.

En cas de dérive ou quand les résultats pour ce(s) CRM sont en dehors des limites fixées dans le fichier ‘Accept CRM’ (voir

également critères d’acceptation dans le PRO/5.5/01/DOC2), les mesures seront recommencées après un nouveau

tuning et stabilisation du système.

11.Rapport interne

Le rapport interne est fait en Excel. Le nom du fichier Excel est du type suivant ‘

Jaarjaarmaandmaanddagdag_Asi_accred_reference lié aux échantillons_DATA. et est sauvé sous ‘71/ICP-MS

VARIAN/inorganic As/année’

Le rapport interne inclut:

- Feuille Excel « Cal… » : les courbes de calibration d’AsV

mesurées (importées par une copie d’écran du fichier de

calibration)

-Feuille Excel ‘Standards’ : les chromatogrammes et données des standards utilisés pour la courbe de calibration

- Feuille Excel « Resolution » : à partir du chromatogramme de la solution étalon de 5 ppb, on calculera la résolution de

la paire de pics AsV

-MMA au moyen de la formule Rs = 2(Tr2 – Tr

1)/(W

1+W

2) où Tr

2 et Tr

1 sont les temps de rétention de

deux pics consécutifs, W2 et W

1 la largeur des pics à la base. Comme décrit dans le dossier de validation, la largeur d’un

pic, W, peut être estimée en mesurant la largeur du pic à une hauteur égale à 13,4% de la hauteur du pic. Tout comme

le temps de rétention, la largeur (à h = 13,4%) est donnée par Galaxie en cliquant sur le bouton ‘results’ des

chromatogrammes. La feuille resolution doit donc regrouper les éléments suivants : une copie du chromatogramme de la

solution étalon 5ppb, une copie du tableau des résultats et le calcul des différentes résolutions Rs par paire de pics.

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-Excel Sheet ‘Results’: -minstens 1 chromatogram als voorbeeld voor elke staal, de CRM(s) en de procedure-blanco

-de concentratie AsV

in de procedure-blanco;

-de verdunningsfactoren van de stalen,


in de oplossing en in de matrix, zowel voor de stalen als voor de CRM(s),

-Excel Sheet ‘Summary’ (uit te printen voor de technisch verantwoordelijke):

-het dossiernummer,

-het staalnummer,


(en eventueel ook van andere aanwezige species) in de 2 replica’s van de CRMs en van de

stalen,

-de begin- en eindwaarden van de onafhankelijke ijkstandaard + het procentueel verschil tussen beide

-de berekende piekresolutie voor het piekenpaar MMA-AsV

.

Een pagina met de registratie van de technische parameters (SOP/TRA/ANA/04/DOC02 : Formulier voor de registratie

van de technische parameters zie template in bijlage 2) dient zowel in de labomap ‘Extracties’ te worden geplaatst als

bewaard te worden onder ‘71/ICP-MS VARIAN/Inorganic As/jaar/Extractie (technische parameters). De naam van deze

file heeft de vorm Jaarjaarmaandmaanddagdag_Asi_accred_referentie i.v.m. stalen_TP.

Wekelijks wordt een back-up van de in Galaxie gegenereerde files gemaakt op een externe harde schijf. Na het maken

van een back-up dient dit geregistreerd te worden op SOP/TRA/ANA/03/DOC06 (zie SOP/TRA/ANA/03).

12.Bijlagen

Bijlage 1: SOP/TRA/ANA/04/DOC01/V01 : Het opmaken van een nieuwe methode file voor de bepaling van

anorganisch As (Galaxie)

Bijlage 2: SOP/TRA/ANA/04/DOC02/V02 : Formulier voor de registratie van de technische parameters

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- Feuille Excel « Results » : - au moins 1 chromatogramme par échantillon comme exemple, le(s) MRC(s)et le blanc

-la concentration d’AsV

dans le blanc (quantité ppb) ;

-le facteur de dilution des échantillons,

-la concentration d’AsV

présentes dans l’extrait et dans la matrice, aussi bien pour les

échantillons que pour le(s) MRC(s),

- Feuille Excel « Summary » (à imprimer pour le responsable technique) comprenant :

le numéro du dossier

le numéro de l’échantillon

La concentration des espèces présentes dans les 2 répliques pour le(s) MRC et pour les échantillons,

les valeurs de la solution étalon indépendante (début et fin de séquence) et la différence en pourcentage entre

les deux

la résolution calculée de la paire de pics MMA-ASV.

Une page avec l’enregistrement des paramètres techniques (SOP/TRA/ANA/04/DOC02: Formulaire pour

l’enregistrement des paramètres techniques en annexe 2) sera ajoutée dans la farde ‘extractions’ et sera sauvé sous

‘71/ICP-MS VARIAN/InorganicAs/jaar/Extractie (technische parameters)’. Le nom de ce file est du type suivant ‘

Jaarjaarmaandmaanddagdag_Asi_accred_reference lié aux échantillons_TP.

Une fois par semaine, une sauvegarde des fichiers Galaxie générés est effectuée sur un disque dur externe. Ces back-ups

sont enregistrés sur le document SOP/TRA/ANA/03/DOC06 (zie SOP/TRA/ANA/03).

12.Annexes

Annexe 1 : SOP/TRA/ANA/04/DOC01/V01 : Configurer une nouvelle méthode chromatographique pour la spéciation de

l’As (Galaxie)

Annexe 2 : SOP/TRA/ANA/04/DOC02/V02 : Formulaire pour l’enregistrement des paramètres techniques

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BIJLAGE 1 :

SOP/TRA/ANA/04/DOC01/V01 : Het opmaken van een nieuwe methode file voor As-speciatie (Galaxie)

p1/2

Creëer een nieuwe methode in het programma Galaxie gebruik makend van het menu « File » en vervolgens het sub-menu “New Method”. Een configuratievenster wordt geopend en daarin kan worden nagegaan of de “Project name” wel degelijk overeenkomt met “Arsenic”. Op “volgende” klikken. Vervolgens de naam van de method ingeven evenals een beschrijving en vervolgens op OK klikken. De aldus gemaakte methode verschijnt in het kader « Data » dat zich bevindt onderaan links in het belangrijkste venster van Galaxie. Op de method klikken en er verschijnt een lijst in het kader dat zich er onmiddellijk onder bevindt. 1. Control - Pump - Elution

Compressiblity compensation ja

Time (min) Flow (mL/min) %A %B

Prerun 1.000 100.000 0

8.00 1.000 100.000 0

Equilibration Time (min) : 1.00 Hold Time (min) : 0.00 2. Control - Pump – Miscellaneous

Start mode Inject Trigger on pimp A End of Sequence Leave pump On On Manual Run Abort Stop gradient immediately 3. Control - Pump – Pressure

Min. pressure (Bar) 0 Max. pressure (Bar) 275 4. Control – ICP-MS

Scan Interval (s) 0 Use current ICPMS Method ja (de methode zoekt het actieve blad in ICP-MS_expert) 5. Acquisition

Acquisition parameters Acquisition length 8 (min) Injection Volume 60 (µL)

Solvent Compressibility (1/Mbar) Pressure Constant (bar) Refill Time (msec)

Ammoniumcarbonaat 60 mM pH9

46.0 3231.0 125

milliQ -water 46.0 3231.0 125

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6. Integration events

Used RT (min) Name On/Off Value 0.00 Set Peak Width 0.700 0.00 Set Threshold 1,000.000 3.5 Set Threshold 1.000

7. Peak identification

Peak Name RT (min) Abs. Window (min) Window % Cal Mode

AsV 6.20 1.00 0.00 yes Nearest

8. Calibration

Type External Standard

Standard Unit ppb

Calibration curve file naam van de directory voor de ijkcurve (te wijzigen voor elke nieuwe analysereeks op gevaar

af de oude directory te schrappen)

Response Area

Options

Factors Response unit

curve curve unit

Unknown compounds identical

none

Use references neen

1 / RF neen

Define Qty intervals neen

Level number 4

Average levels neen

Component Model (0,0) ? Add (0,0) ?

Weighting Level 1 Level 1 Level 2 Level 3 Level 4

AsV Linear

None Calibratie- blanco

standaard 1

standaard 2

standaard 3

standaard4

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ANNEXE 1 :

SOP/TRA/ANA/04/DOC01/V01 : Configurer une nouvelle méthode chromatographique pour la spéciation

de l’As (Galaxie)

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Créer une nouvelle méthode dans Galaxie en utilisant le menu « File » puis le sous-menu « New » et enfin l’option « New Method ». Une fenêtre de configuration s’ouvre vérifier que « Project Name » correspond bien à « Arsenic », cliquer sur suivant. Entrer ensuite le nom de la méthode et accessoirement une description, cliquer sur Ok. La méthode ainsi crée apparaît dans l’onglet « Data » située dans la partie inférieur gauche de la fenêtre principal de Galaxie. Cliquer sur la méthode, une liste de propriétés apparaît alors dans le cadre situé immédiatement en dessous. 1. Control - Pump - Elution

Compressiblity compensation oui

Time (min) Flow (mL/min) %A %B

Prerun 1.000 100.000 0

8.00 1.000 100.000 0

Equilibration Time (min) : 1.00 Hold Time (min) : 0.00 2. Control - Pump – Miscellaneous

Start mode Inject Trigger on pimp A End of Sequence Leave pump On On Manual Run Abort Stop gradient immediately 3. Control - Pump – Pressure

Min. pressure (Bar) 0 Max. pressure (Bar) 275 4. Control – ICP-MS

Scan Interval (s) 0 Use current ICPMS Method oui (la méthode cherchera donc la feuille active dans ICP-MS_expert) 5. acquisition

Acquisition parameters identifier

Acquisition length 8(min) Injection Volume 60 (µL)

autoscale

Solvent Compressibility (1/Mbar) Pressure Constant (bar) Refill Time (msec)

Carbonate d’ammonium 60 mM pH9

46.0 3231.0 125

Eau milliQ 46.0 3231.0 125

Ongek

ontro

leerde

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non c

ontrô

lée

6. integration events p2/2

Used RT (min) Name On/Off Value

oui 0.00 Set Peak Width 0.700

oui 0.00 Set Threshold 1,000.000

oui 3.5 Set Threshold 1.000

7. Peak identification

Peak Name RT (min) Abs. Window (min) Window % Cal Mode

AsV 6.20 1.00 0.00 yes Nearest

8. Calibration

Type External Standard

Standard Unit ppb

Calibration curve file nom du fichier pour la courbe de calibration (à modifier pour chaque nouvelle série d’analyse,

sous peine d’écraser l’ancien fichier)

Response Area

Options

Factors Response unit

curve curve unit

Unknown compounds identical

none

Use references non

1 / RF non

Define Qty intervals non

Level number 4

Average levels non

Component Model (0,0) ? Add (0,0) ?

Weighting Level 1 Level 1 Level 2 Level 3 Level 4

AsV Linear

None Calibratie- blanco

standaard 1

standaard 2

standaard 3

standaard4

Ongek

ontro

leerde

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non c

ontrô

lée

BIJLAGE 2 / ANNEXE 2

SOP/TRA/ANA/04/DOC02/V02 : Formulier voor de registratie van de technische parameters

Formulaire pour l'enregistrement des paramètres techniques

EXTRACTIE p 1/2

nr

tube naam nr extractie

gewicht

[mg] VF opm

1

2 1.0

3 1.0

4 1.0

5 1.0

6 1.0

7 1.0

8 1.0

9 1.0

10 1.0

11 1.0

12 1.0

13 1.0

14 1.0

15 1.0

16 1.0

17 1.0

18 1.0

19 1.0

20 1.0

21 1.0

22 1.0

23 1.0

24 1.0

staat van de monsters: matrix:

balans:

HNO3 0,11M: 3,63 ml HNO3 conc aanlengen tot 500ml met H2O Milli-Q NA0,11M -

+ 9ml HNO3 0,11M + 1ml H2O2 30% gebruikte pipetten:

vortexen

+ magnetische roerstaafje

microwave: prgrm:

centrifugeren: centrifuge:

filtreren:

tubes wassen in microwave: prgrm.:

datum extractie: operator:

As-inorganic (SOP04):

Ongek

ontro

leerde

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non c

ontrô

lée

p 2/2

ANALYSE

Calibratiestandaardreeks: As Mix

datum bereiding 250ppb: stock 250ppb lotnr.: solB As b -

datum v bereiding ijkreeks:

Vpip v s tock 250ppb[ul ] V HNO3 (µl ) V H2O2 30% (µl) aanlengen to t [ml] conc [ppb]

0 326 5000 50 0

100 326 5000 50 0.5

200 326 5000 50 1

400 326 5000 50 2

1000 326 5000 50 5

Quality check: QC: As Mix 5 ppb

datum bereiding 250ppb: stock 250ppb lotnr.: solB As b - ctrl

datum v bereiding:

Vpip v s tock 250ppb[ul ] V HNO3 (µl ) V H2O2 30% (µl) aanlengen to t [ml] conc [ppb]

500 163 2500 25 5

Mobiele fasen:

datum bereiding:

A: 40 mM (NH4)2CO3 12,56 mg afwegen en aanlengen tot 2 L met H2O Mill iQ

pH adjusteren tot 9,4 met NH3 25% gebruikte pH meter:

Analytische kolom: PRP-X100 Hamilton + guard: GA-1 Anion (Grace)

Serienummer:

Druk op kolom: bar

datum analyse: operator:

OPMERKINGEN

operator:

C O D A - C E R V A Centrum voor Onderzoek in ... · SOP/TRA/ANA/04 Vnr : 02 Datum/Date : 18/06/14...

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