Afstudeer presentatie MLO
-
Upload
patrick-dorst -
Category
Education
-
view
610 -
download
2
Transcript of Afstudeer presentatie MLO
08/04/11 Mycotoxines 3
Doel Methode ontwikkeling:
Bepalen van DON (Deoxynivalenol) Bepalen van 15-A-DON (15-Acetyl
Deoxynivalenol ) Met of zonder opzuiverings kolom 2 verschillende kolommen:
DONprep kolom (Biopharm) Bond Elute® Mycotoxine (Varian)
08/04/11 Mycotoxines 4
Mycotoxines Gif Organismen van de
schimmelfamilie Fusarium
Aëroob Vochtigheid/
temperatuur Mycotoxine niveau
stijgt
08/04/11 Mycotoxines 5
Mycotoxines (oorzaken) Primaire verontreiniging
(veld-mycotoxine): Granen kunnen tijdens de teelt besmet met
een mycotoxine producerende schimmel.
08/04/11 Mycotoxines 6
Mycotoxines (oorzaken) Secundaire verontreiniging
(mycotoxine vorming tijdens bewaring / transport): Opgeslagen granen / suikerbieten kunnen
beschimmeld raken door bijv.: Fusarium
08/04/11 Mycotoxines 7
Mycotoxines (oorzaken) Metabolisme:
Vee krijgt veevoeder dat beschimmeld is, de mycotoxine raakt gemetaboliseerd en komt terecht in de voedselketen
Aflatoxine in veevoeder: Kaas Melk
08/04/11 Mycotoxines 8
Onderzoek HPLC-analyse met UV-detector Benodigdheden en instellingen Analyse
Standaarden Breimonsters
Voorbereiden Analyse
Rechtstreeks Opgezuiverd
08/04/11 Mycotoxines 9
Benodigdheden / instellingen Loopvloeistoffen 2 soorten
Loopvloeistof A Water/acetonitrile/methanol 82,5% / 12,5% / 5%
Loopvloeistof B Water/acetonitrile/methanol 15% / 80% / 5%
08/04/11 Mycotoxines 10
Benodigdheden / instellingen Extractie vloeistof
H2O /Acetonitrile 10% / 90%
Stapgradiënt UV detector
Golflengte 240nm Kolommen
Biopharm Varian
08/04/11 Mycotoxines 11
Benodigdheden / instellingen
2,0100035,0
2,0100016,1
125757,1
1,5257516,0
2,0100018,0
1010035,1
101007
Flow (ml/min)% opl. B% opl. ATijd (min)
1010045,0
101000
08/04/11 Mycotoxines 12
Analysestandaarden
IJklijn DON en 15-A-DON Spike oplossing:
[DON] = 440 µg/ml [15-A-DON] = 420 µg/ml
Oplossing A
13ml spike 50ml opl. A4,374,586
25ml Std 6 50 ml opl. A1,751,835
25ml Std 5 50 ml opl. A0,70,734
25ml Std 4 50 ml opl. A0,280,293
25ml Std 3 50 ml opl. A0,110,122
25ml Std 2 50 ml opl. A0,0550,061
Verdunning[15-A-DON] (µg/ml)[DON] (µg/ml)Standaard
08/04/11 Mycotoxines 16
Analysestandaarden
Spike oplossing 5x verdund: 3,52 μg/ml
Analyseren Rechtstreeks DONprep
Area`s
045000Kolom 2
036000Kolom
125000146000Rechtstreeks 2
125000149000Rechtstreeks
15-A-DON
(area)
DON (area)Methode
08/04/11 Mycotoxines 17
Analysestandaarden
Spike oplossing DON 5x verdund: 3,52 μg/ml
Analyseren Rechtstreeks DONprep
µg/ml0,582e opvang
1,821ste opvang
3,46Rechtstreeks
DON (μg/ml)
Methode
08/04/11 Mycotoxines 22
Resultaten Monsters
Rechtstreeks Kolom Varian
Opzuiveren monster Aanwezigheid van:
DON 15-A-DON
08/04/11 Mycotoxines 23
Resultaten Monsters Afwezigheid van:
DON 15-A-DON ?
Rt DON= 7,5 min.
Rt 15-A-DON= 15 min.
08/04/11 Mycotoxines 24
Conclusie Kolom van Biofarm
Veel voorbewerking Specifieke binding, alleen voor DON De eiwitten kunnen maar een bepaalde
[DON] vasthouden (2,0µg/ml) [DON] geconcentreerder Duur in aanschaf
08/04/11 Mycotoxines 25
Conclusie Kolom van Varian
Weinig voorbereiding Niet specifiek
DON 15-A-DON
Onbeperkte [DON] & [15-A-DON] Zuivert het monster van verontreiniging Goedkoper in aanschaf
08/04/11 Mycotoxines 26
Conclusie Het monster moet eerst voorbewerkt worden
voor analyse De DONprep kolom is geschikt wanneer je
alleen DON moet bepalen, maar kan geen ander mycotoxines vasthouden.
De Bond Elute® Mycotoxin kolom van Varian laat meerdere mycotoxines door.
08/04/11 Mycotoxines 27
Aanbevelingen Nog beter opzuiveren van de monster Spiken of de desbetreffende component
aanwezig is. Gebruik Bond Elute® Mycotoxin kolommen om
kosten te besparen. Uitgebreider onderzoek nodig
Meerdere mycotoxines bepalen Methode verder ontwikkelen
Andere detectie methode testen