2015 Kuliah 13_Protein Ok.pdf

8/16/2019 2015 Kuliah 13_Protein Ok.pdf

1/29

Protein dan Kolesterol

Kimia Klinis AnKim Program Diploma 2015


2/29

2

Defisiensi protein merupakan

masalah dunia

KWASHIORKOR – defisiiensi protein tetapi kalorii mencukupi. Thn 1930, digambarkan

sebagai penyakit anak yang mempunyai adik baru. Karakteristiknya edema.

Anak umur 2 tahun ini dengan

kwashiokor, sebelum dan sesudah

pengobatan dengan protein yang

sesuai.

Yang mana gambar sebelum dan

sesudah pengobatan?


3/29

• Protein adalah komponen utama dalam

makanan (diet) mll

• Protein dicerna asam amino aliran

darah (molekul sdh berubah berbeda

dengan protein dalam diet).


4/29

Asam amino digunakan melalui 3 tahap di

dalam tubuh :

• Sintesis protein

Penting selama pertumbuhan. Sintesis

protein berlangsung secara konstanmenggantikan protein yang lebih dahulu

terbentuk atau terpakai


5/29

• Asam amino membentuk bbg macam

komponen a.l:- purines and pyrimidines (components of

nucleotids)

- catecholamines (adrenaline andnoradrenalin)

- neurotransmitters (serotonin)

- histamine

- porphyrins (the central oxygen binding -component of haemoglobin)


6/29

6

Berapa banyak protein yang dibutuhkan?

• Berbeda dengan lemak dan glukosa, utk Aa tidak ada

penampungannya ; kita harus makan protein setiap hari.• Kebutuhan protein tergantung pada umur, jenis kelamin dan

aktivitas.

•

ALLOWANCE FOR PROTEIN

AGE g/kg g/day

Infants (0-1) ~2.2 6.5-20

Children (1-10) 1.8 - 1.25 20- 38

Teens (11-18) 1.0 - 0.8 45-55

Adults (male) 0.8 56

(female) 0.8 44

Pregnant or lactating - 20 - 30% more

Athletes 1.2 -1.7

REQUIREMENT OF PROTEINFROM DIFFERENT SOURCES

(g/day for 70 kg human)

Meat/fish/eggs/milk ~ 20-25

Non-vegetarian ~ 25-30

mixed dietMixed vegetables ~ 30-35

Single vegetable* up to 75

* Except for soybeans


7/29

Metabolisme Protein dan Asam amino

Nitrogen excretion

dietary protein

amino acids

endogenous proteins

a-ketoacids, NH3

glucose, lipidsenergy

other N compounds

urea

Keseimbangan Nitrogen

Keseimbangan N

excretion = intake

(healthy adult)

Keseimbangan N positif

excretion < intake(growth, pregnancy,

tissue repair)

Keseimbangan N negatif

excretion > intake

(malnutrition, starvationillness, surgery, burns)

digestion


8/29

8

Mengapa kita perlu menganalisis Protein?

• Protein berperan penting pada proses biologis.

• Analisis protein mengeksplorasi bagaimana suatu

sekuens asam amino dapat menentukan suatu struktur

protein dan bagaimana protein tsb dapat mengikat pada

substrat atau molekul lainnya untuk memberi suatu

fungsinya.

• Analisis protein memberi kesempatan kepada kita untuk

memahami fungsi protein berdasarkan strukturnya


9/29

Metode untuk Penentuan Protein

• Uji Biuret

• Uji Folin-Ciocalteu (Lowry)

• Uji Bicinchoninic Acid ( BCA )

• Uji Ikatan pewarna (Bradford)

• Uji Kjeldahl

• Absorbansi Ultraviolet pd 200-225nm dan 270-

290nm


10/29


11/29


12/29


13/29

Protein Serum/Plasma

Albumin Globulin

- Berat molekul rendah

- Larut dalam larutan ammonium

sulfat ½ jenuh

- Berat molekul tinggi

- Tidak larut dalam larutan

ammonium sulfat ½ jenuh


14/29

Penentuan protein

Langkah

1- Estimasi total protein

2- Fraksionasi (mis. Fraksionasi garam) untuk presipitasi

globulin dan ukur albumin

3- Globulin = total protein – albumin


15/29

Uji Biuret

• Tergantung pada adanya ikatan peptida pada semua

protein. Ikatan peptida ini yang bereaksi dengan ion Cu2+

dalam larutan basa untuk hasilkan produk berwarna.

Diukur secara spektrofotometer pada 50nm

• Intensitas warna sesuai dengan jumlah ikatan peptida.

Dipeptida tidak bereaksi, tapi tripeptida, oligopeptida dan

polipeptida hasilkan warna merah-keunguan


16/29

Prinsip

Kompleks ion kuprat bereaksi dengan gugus ikatan

peptida dalam media basa dan ada ikatan peptida

minimal 2 buah, terbentuk khelat warna ungu Sebaiknya gunakan serum dan berpuasa

Sensitivitas rendah dan membutuhkan protein dalam

jumlah banyak (1-20 mg)

Metode:1- Manual

2- Kit

Uji Biuret


17/29

Uji Biuret

Rantai Peptide Kompleks Biuret (Warna ungu)

• Gornall, AG, CS Bardawill, and MM David. J. Biol. Chem. 177: 751. 1949.

• Layne, E. Spectrophotometric and Turbidimetric Methods for Measuring Proteins. Methods in Enzymology 10: 447-455. 1957.

• Robinson, HW and CG Hogden. J. Biol. Chem. 135: 707. 1940.

• Slater, RJ (ed.). Experiments in Molecular Biology. Clifton, New Jersey: Humana Press, 1986. P. 269.

• Weichselbaum, TE. Am. J. Clin. Pathol. Suppl. 10: 40. 1946.


18/29

Nilai Normal

Total protein: 4.2 - 5.6 g/dl Albumin: 2.3 - 3.5 g/dl

Globulin: 1.9 – 2.1 g/dl


19/29

Kelainan Klinis

Hyperproteinemia

Peningkatan protein total

plasma

PenyebabDehidrasi

Syok

Hypoproteinemia

Penurunan protein total

plasma

PenyebabPeny. ginjal/hati

Perdarahan

Malabsorpsi

MalnutrisiLuka bakar

Demam tinggi


20/29

Uji Folin-Ciocalteu (Lowry)

• Sebagian besar protein mengandung tirosin atau

triptofan atau keduanya, masing-masing memiliki proposi

yang unik

• Cth: albumin: triptofan hanya 0.2%, globulin 2-3%

• Asam amino tsb akan mereduksi reagen Folin-Ciocalteu

yang terdiri dari asam fosfotungstat dan fosfomolibdat

hasilkan warna kebiruan


21/29

Uji Folin-Ciocalteu (Lowry)

•Lowry, OH, NJ Rosbrough, AL Farr, and RJ Randall. J. Biol. Chem. 193: 265. 1951.

•Oostra, GM, NS Mathewson, and GN Catravas. Anal. Biochem. 89: 31. 1978.

•Stoscheck, CM. Quantitation of Protein. Methods in Enzymology 182: 50-69 (1990).

•Hartree, EF. Anal Biochem 48: 422-427 (1972).


22/29

Esai Folin-Ciocalteu (Lowry)

Kelebihannya• Sensitif untuk kisaran yang luas

• Dapat dilakukan pada suhu kamar

• 10-20 x lebih sensitif daripada deteksi dengan UV

• Dapat dilakukan secara mikroplat

Kekurangan

• Banyak senyawa yang mengganggu esai (asam kuat,ammonium sulfat)

• Perlu waktu yang lama

•

Fotosensitif• Intensitas warna berbeda untuk protein yg berbeda


23/29

Metabolisme Kolesterol

• Cholesterol adalah lemak yang memiliki

beberapa fungsi dalam tubuh:

– Meningkatkan fleksebilitas membran sel

–Bahan dasar struktural untuk pembentukan garamempedu

– Bahan dasar struktural untuk pembentukan hormon

steroid

–Bahan dasar struktural untuk pembentukan Vitamin D


24/29

metabolisme kolesterol

• Diperkirakan 85% kolesterol dalam tubuh

diproduksi oleh hati dan selebihnya 15% dari

intake makanan (diet)

• Kolesterol adalah suatu lipid, bersifat tidak larutdalam plasma sehingga harus berikatan dengan

proteins membentuk lipoproteins dalam sirkulasi

darah


25/29

• Teknik enzimatik akurat bila dikalibrasi dg baik

dan mudah diaplikasikan dengan alat analisis

otomatis.

• Reagen kolesterol komersial biasanya: – Campuran dg 3-10uL serum/plasma

– Diinkubasi utk terbentuk warna

– Absorbansi diukur pada 500nm

– Reagen biasanya kolesteril ester hidrolase dari

bakteri utk membelah kolesteril ester

Metode enzimatik kolesterol


26/29

metode enzimatik kolesterol

Kolesterol esterase membelah residu asam lemak dari

kolesteril ester,

Merupakan 2/3 bgn dari kolesterol yang bersirkulasi,

Mengkonversinya menjadi bentuk kolesterol bebas atau tidakteresterifikasi.

Kolesterol bebas direaksikan dengan kolesterol oksidase

menghasilkan hidrogen peroksidase

Reaksi enzimatik yang berwarna menggunakan enzimhorseradish peroxidase untuk mengubah 2 senyawa kimia tak

berwarna menjadi senyawa berwarna.

Instensitas warnanya sebanding dengan jumlah

kolesterolnya. 26


27/29


28/29


29/29

Metode enzimatik kolesterol

29

4 aminoantipirin kuinoneimin

2015 Kuliah 13_Protein Ok.pdf

Documents

Transcript of 2015 Kuliah 13_Protein Ok.pdf