Post on 02-Dec-2015
description
1
Voorkomen en screening van antioxidanten
Ian Cailliau
Promotor: Prof. dr. ir. K. Raes
2
Wat is ORAC? Oxygen Radical Absorbance Capacity
• Methode om antioxidanten te detecteren• Principe :
1 Fluoresceïne (probe) degraderen via radicalen2 In welke mate kan AO (staal) afbraak tegenhouden
3
Radicalen• Def. Molecule of Atoom met ongepaard electron
(Smiths, Marks & Lieberman, 2005) (CaymanChem, 2015)
4
Antioxidant• Def. Antioxidant is stof die oxidatieve schade bij een target molecule
vertraagt, verhindert of ongedaan maakt (Halliwell).• In praktijk context gebonden. • Twee mechanismen : HAT & ET
(HAT)
(ET)
5
Antioxidant• Def. Antioxidant is stof die oxidatieve schade bij een target molecule
vertraagt, verhindert of ongedaan maakt (Halliwell).• In praktijk context gebonden. • Synergiën complexiteit
Vitamine C
Vitamine E
6
Wat is ORAC? Oxygen Radical Absorbance Capacity
• Methode om antioxidanten te detecteren• Principe :
1 Fluoresceïne (probe) degraderen via radicalen2 In welke mate kan AO (staal) afbraak tegenhouden
(Schaich, 2015)(Sveinsdottir, 2014)
7
Opstelling - componenten• Radicaal-generator (AAPH)• Fluoresceïne (probe)• Trolox/Staal
AAPH Fluoresceïne
Trolox
8
Opstelling - parameters• Zuurstof-gehalte• Temperatuur• AAPH – AO – Fl concentraties• Metaalionen EDTA ? • Homogeen – heterogeen (Schaich, 2015)
9
Opstelling – Labo • Cuvette 2 ml • Plastic container 10 ml• Temperatuur ? ideaal: 37°C, bij cuvette : kamertemperatuur
10
Resultaten
0 5 10 15 20 250
200
400
600
800
1000
1200
tijd (min)
Abso
lute
inte
nsite
it
(Schaich, 2015)
11
Resultaten
0 5 10 15 20 250
200
400
600
800
1000
1200
tijd (min)
Abso
lute
inte
nsite
it 1 Afname te traag 2 Initiële intensiteit3 Intensiteit gaat omhoog
12
Resultaten - AAPH
0 5 10 15 20 25 30 350
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
160 mg 1 160 mg 2 160 mg 3 400 mg 1 400 mg 2
400 mg 3 1000 mg 1 1000 mg 2 1000 mg 3
tijd (min)
Rel
atie
ve a
bsor
bant
ie
13
Resultaten - Temperatuur
0 10 20 30 40 50 60 700
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
25°C 1 25°C 2 25°C 3 37°C 1 37°C 2 37°C 3 50°C 1 50°C 2 50°C 3
tijd (min)
Rel
atie
ve a
bsor
bant
ie
14
Conclusie• ORAC niet reproduceerbaar in labo• Literatuur ? 1,9 nM (Schaich) vs 14 uM (Prior) ?
15
Vragen?