1

Voorkomen en screening van antioxidanten

Ian Cailliau

Promotor: Prof. dr. ir. K. Raes

2

Wat is ORAC? Oxygen Radical Absorbance Capacity

• Methode om antioxidanten te detecteren• Principe :

1 Fluoresceïne (probe) degraderen via radicalen2 In welke mate kan AO (staal) afbraak tegenhouden

3

Radicalen• Def. Molecule of Atoom met ongepaard electron

(Smiths, Marks & Lieberman, 2005) (CaymanChem, 2015)

4

Antioxidant• Def. Antioxidant is stof die oxidatieve schade bij een target molecule

vertraagt, verhindert of ongedaan maakt (Halliwell).• In praktijk context gebonden. • Twee mechanismen : HAT & ET

(HAT)

(ET)

5

Antioxidant• Def. Antioxidant is stof die oxidatieve schade bij een target molecule

vertraagt, verhindert of ongedaan maakt (Halliwell).• In praktijk context gebonden. • Synergiën complexiteit

Vitamine C

Vitamine E

6

Wat is ORAC? Oxygen Radical Absorbance Capacity

• Methode om antioxidanten te detecteren• Principe :

1 Fluoresceïne (probe) degraderen via radicalen2 In welke mate kan AO (staal) afbraak tegenhouden

(Schaich, 2015)(Sveinsdottir, 2014)

7

Opstelling - componenten• Radicaal-generator (AAPH)• Fluoresceïne (probe)• Trolox/Staal

AAPH Fluoresceïne

Trolox

8

Opstelling - parameters• Zuurstof-gehalte• Temperatuur• AAPH – AO – Fl concentraties• Metaalionen EDTA ? • Homogeen – heterogeen (Schaich, 2015)

9

Opstelling – Labo • Cuvette 2 ml • Plastic container 10 ml• Temperatuur ? ideaal: 37°C, bij cuvette : kamertemperatuur

10

Resultaten

0 5 10 15 20 250

200

400

600

800

1000

1200

tijd (min)

Abso

lute

inte

nsite

it

(Schaich, 2015)

11

Resultaten

0 5 10 15 20 250

200

400

600

800

1000

1200

tijd (min)

Abso

lute

inte

nsite

it 1 Afname te traag 2 Initiële intensiteit3 Intensiteit gaat omhoog

12

Resultaten - AAPH

0 5 10 15 20 25 30 350

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

160 mg 1 160 mg 2 160 mg 3 400 mg 1 400 mg 2

400 mg 3 1000 mg 1 1000 mg 2 1000 mg 3

tijd (min)

Rel

atie

ve a

bsor

bant

ie

13

Resultaten - Temperatuur

0 10 20 30 40 50 60 700

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

25°C 1 25°C 2 25°C 3 37°C 1 37°C 2 37°C 3 50°C 1 50°C 2 50°C 3

tijd (min)

Rel

atie

ve a

bsor

bant

ie

14

Conclusie• ORAC niet reproduceerbaar in labo• Literatuur ? 1,9 nM (Schaich) vs 14 uM (Prior) ?

15

Vragen?