Diagnoscbiologiquedela* leptospirose...2015/03/31 · Diagnoscbiologiquedela leptospirose*...

Diagnos(c biologique de la leptospirose

Musso D, Ins(tut Louis Malardé, Papeete, Tahi(, Polynésie Française

Directeur du LABM et du Pôle de recherche et de veille sur les Maladies Infec8euses Emergentes

Forma8on médicale con8nue, Papeete, 30 mars 2 2015

Diagnos8c biologique

Ø  Examens biologiques d’orienta8on Ø  Diagnos8c biologique direct

Ø  Examen direct Ø  Mise en évidence de l’agent pathogène (culture) Ø  Mise en évidence d’an8gènes (streptocoque, dengue …) Ø  Mise en évidence du génome (PCR)

Ø  Diagnos8c biologique indirect Ø  Mise en évidence de la réponse immunitaire : sérologie


Diagnos8c biologique de cer8tude Ø  Examens biologiques d’orienta8on Ø  Diagnos8c biologique direct

Ø  Examen direct Ø  Mise en évidence de l’agent pathogène (culture) Ø  Mise en évidence d’an8gènes (streptocoque, dengue …) Ø  Mise en évidence du génome (PCR)

Ø  Diagnos8c biologique indirect Ø  Mise en évidence de la réponse immunitaire : sérologie


Leptospires

Ø  A savoir Ø  Non colorés par les colora8ons usuelles (gram, Ziehl …) Ø  Ne pousse pas sur milieu de culture usuel

Ø  Donc: si pas de demande spécifique, le diagnos8c biologique specifique ne sera jamais fait


Leptospirose: examens biologiques d’orienta8on

Ø  Numéra8on formule sanguine Ø   Hyperleucocytose à polynucléaires Ø   Thrombopénie

Ø   Augmenta8on Ø   Transaminases (< 200), phosphatases alcalines, bilirubine, amylase Ø  Urée créa8nine Ø   CRP

Ø   Si LCR Ø   Aspect de méningite asep8que (pas de germes au Gram, culture

néga8ve) Ø   < 500 leucocytes / mm3, prédominance lymphocytes +++ Ø   Glycorrachie habituellement normales Ø   Proteinorrachie entre 50 et 10 mg/ml


Leptospirose: examen direct

Ø  Diagnos8c biologique direct: recherche de leptospires en microscopie à fond noir Ø  Très peu sensible +++ Ø  Très peu spécifique (nombreux faux posi8fs) +++ Ø  Ne pas prescrire et ne pas faire (intérêt du fond noir uniquement pour la culture de leptospire)


Leptospirose: diagnos8c direct par culture

Ø  Sur milieux spécifiques +++ Ø  A par8r de sang, urines, LCR Ø  Prélèvement avant ATB Ø  Très long: jusqu’à 4 mois +++ Ø  Pas adapté au diagnos8c urgent Ø  Intérêt épidémiologique (si typage)


Leptospirose: diagnos8c direct par recherche an8génique

Ø  Pas de test disponible


Leptospirose: diagnos8c direct par PCR

Ø  Recherche de l’ADN bactérien Ø  Nombreux protocoles publiés Ø  Posi8f dans le sang jusqu’à J 10 en moyenne Ø  Technique de choix en phase aigue +++ Ø  Possibles dans urines et LCR plus tardivement Ø  Pas pris en charge par le CPS


Leptospirose: diagnos8c direct par PCR

Ø  A savoir : la bactériémie est faible dans la leptospirose (souvent < 104/ml) donc:

Ø  Une PCR néga8ve en phase aigue n’élimine pas le diagnos8c +++


Leptospirose: diagnos8c indirect par sérologie

Ø  3 types de techniques Ø  Microagglu8na8on (MAT) « gold standard » Ø  ELISA IgM Ø  Tests rapides IgM



Ø  Microagglu8na8on (MAT) Ø   « gold standard » ? Ø   Seuls les laboratoires de référence la font Ø   Très complexe et très long Ø   Dépiste IgG et IgM Ø   Réponse anamnes8que à d’anciennes infec8ons Ø   Ciné8que des an8corps variables suivant les cas Ø   Problème du cut-‐off en zone endémique « de 1/100 à 1/800 Ø   Intérêt épidémiologique mais pas diagnos8que

Ø  MAT posi8f = infec8on ac8ve, récente ou ancienne +++



Ø  ELISA Ø   Facile à réaliser en rou8ne Ø   Dépiste spécifique des IgM Ø   Ciné8que des an8corps variables suivant les cas +++ Ø   Problème du cut-‐off en zone endémique Ø   Pas d’intérêt épidémiologique

Ø  Tests rapides Ø  Même problème que l’ELISA et moins performant


Leptospirose: compara8f des techniques


Musso D, Lascola B: Diagnos8c biologique de la leptospirose. RFL 2013

Leptospirose: quel test prescrire


Haute autorité de santé, recommandations 2011

Leptospirose: prescrire le bon test au bon moment

Ø  Sérologie les 5 premiers jours: on va détecter des Ac faux posi8fs ou des Ac dus à une infec8on antérieure +++

Ø  PCR dans le sang après J 10: sera quasiment toujours néga8ve

Ø  Capital: prescrire le bon test en fonc8on du début présumé des signes cliniques +++


Problème de la sérologie

Ø  Tahi8 = zone d’endémie Ø  Les cut-‐off n’ont pas été calculés Ø  Valeur prédic8ve néga8ve d’une sérologie néga8ve très faible

Ø  Valeur prédic8ve posi8ve d’une sérologie posi8ve très faible

Ø  Exemples courants de sérum Ø  PCR lepto posi8ve + IgM dengue posi8fs Ø  PCR dengue posi8ve + IgM lepto posi8fs

Forma8on médicale con8nue, Papeete, 30 maris 2 2015

Problème du diagnos8c différen8el en Pf, principalement dengue

Ø  Diagnos8c biologique différen8el possible en phase aigue: Ø  Prescrire PCR dengue + PCR leptospirose Ø  PCR leptospirose néga8ve n’élimine pas le diagnos8c

Ø  Diagnos8c biologique différen8el en phase tardive: très difficile : Ø  IgM dengue très fréquent dans la popula8on, réac8on croisée dengue/Zika, les IgM peuvent persister longtemps


Autre problème d’interpréta8on de la sérologie: chikungunya

Ø  A priori peu de réac8ons croisées avec dengue et Zika mais

Ø  En début d’épidémie peut de pa8ents on des Ac Ø  En fin d’épidémie: si 30% de la popula8on a été infectée, 30% ont des Ac Ø  Sérologie posi8ve Chikungunya peut être due à

Ø  Chikungunya fait en début d’épidémie Ø  Leptospirose actuelle avec IgM chikungunya

Ø  La valeur prédic8ve du test va changer au fur et à mesure de l’épidémie (raison pour laquelle l’ILM a arrêté de rendre des sérologies Zika en fin d’épidémie)


Interpréta8on de la sérologie de la sérologie leptospirose

Ø   Exemple: MAT au 1/200 ou IgM lepto ELISA posi8f: Ø   employé de banque en région Parisienne qui revient d’un trekking

pluvieux au Brésil, VPP élevée Ø   Propriétaire d’un fa’apu à Raiatea, VPP ? Ø   Propriétaire d’un fa’apu à Futuna, VPP nulle


Défini8on biologiques des cas de leptospirose


Musso D, Lascola B: Laboratory diagnosis of leptospirosis: A challange: JMII 2013

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