C O D A - C E R V A Centrum voor Onderzoek in ......Prekolom (Hamilton PRP-X100 guard kolom)...
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Centrum voor Onderzoek in Diergeneeskunde en Agrochemie
Centre d’Etude et de Recherches Vétérinaires et Agrochimiques
SOP/TRA/ANA/04 Vnr : 02 Datum/Date : 18/06/14 Pg 1/25
Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Auteur Kwaliteitsverantwoordelijke
Responsable Qualité
Technisch verantwoordelijke
Responsable technique
Naam / Nom
Ruttens A.
Knapen K. Ruttens A.
Doel / Objet :
Dit werkvoorschrift heeft tot doel anorganisch arseen te bepalen. Van de gekende arseen species zijn de anorganische
vormen het meest schadelijk voor de gezondheid.
Cette instruction a pour objet la détermination de l’arsenic inorganique. Parmi ces composés d’As connus, les formes
inorganiques sont les plus dangereuses pour la santé.
Toepassingsgebied / Domaine d’application :
Dit werkvoorschrift wordt toegepast op voeding (inclusief dranken) en voeders van plantaardige oorsprong
(landplanten).
Cette instruction s’applique aux denrées alimentaires (y inclus des boissons) et aliments pour animaux d'origine
végétale (plantes terrestres).
Bestemmelingen / Destinataires : zie distributielijst /
Voir liste de distribution
Aantal copies in omloop / Copies en circulation : 5
Historiek / Historique
Vnr
Datum vrijgave
Date
d’application
Reden(en) wijziging / Motif(s) de changement
01
02
27/03/13
18/06/14
Eerste editie / Première édition
Uitbreiding voor voeders en dranken /
Extension pour des aliments pour animaux et boissons
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Centre d’Etude et de Recherches Vétérinaires et Agrochimiques
SOP/TRA/ANA/04 Vnr : 02 Datum/Date : 18/06/14 Pg 2/25
Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
1.Doel
Dit werkvoorschrift heeft tot doel anorganisch arseen te bepalen. Van de gekende arseen species zijn de anorganische
vormen het meest schadelijk voor de gezondheid.
2.Toepassingsgebied
Dit werkvoorschrift wordt toegepast op voeding (inclusief dranken) en voeders van plantaardige oorsprong (landplanten).
3.Definities, afkortingen, referenties en normen
3.1. Afkortingen
Ar argon
As arseen
AsB arsenobetaine
AsIII
arseniet
AsV
arsenaat
Asi anorganisch arseen
MMA monomethyl arsonate
DMA dimethyl arsinate
milliQ – water ultrazuiver water
H20
bidi home made bigedestilleerd water
CRI “Collision Reaction Interface”; dit systeem laat toe om via de introductie van bepaalde gassen
isobare interferenties te elemineren bij metingen op de ICP-MS
CRI-gas gas gebruikt door het CRI-systeem: H2 = waterstof
CRM gecertifieerd referentiemateriaal
g gram
kg kilogram
HPLC hoge performantie vloeistofchromatografie
ICP-MS massaspectrometer gekoppeld aan een inductief plasma
L liter
mL mililiter
RBS 25 professioneel detergent
VAR TUNE VAR-TS-MS Varian©multi-element oplossing gebruikt voor de optimalisatie van het signaal van
de ICP-MS waarin volgende elementen aanwezig zijn: Ba, Be, Ce, Co, In, Mg, Pb, Th, Tl
µg microgram
µL microliter
3.2. Referenties
Directive 2002/657/EC of 12/08/2002 (publication date: 17/08/2002), concerning the performance of analytical
methods and the interpretation of results, and implementing Council Directive 96/23/EC. Official Journal of the
European Communities L221/8 (2002)
SOP/TRA/PRE/01 : Voorbereiding van de stalen voor het bepalen van spoorelementen
PRO/5.5/01 : Interne controles
PRO/5.1/04 : Afvalverwijdering
SOP/TRA/ANA/03 : Arseenspeciatie in granen en graanproducten
4.Principe
4.1. Voorbereiding
De voorbereiding en de homogenisering van de stalen is beschreven in de SOP/TRA/PRE/01.
Na homogenisatie worden de stalen overgebracht in extractiebuizen en wordt de extractieoplossing -die bestaat uit een
mengels van een zuur en een oxidant (0.1 M HNO3 in 3% H
2O
2)- - en een magnetisch roerstaafje toegevoegd.
Vervolgens worden de extractiebuizen hermetisch afgesloten en in de houder van de microgolfoven geplaatst.
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
1.Objet
Cette instruction a pour objet la détermination de l’arsenic inorganique. Parmi ces composés d’As connus, les formes
inorganiques sont les plus dangereuses pour la santé.
2.Domaine d’application
Cette instruction s’applique aux denrées alimentaires (y inclus des boissons) et aliments pour animaux d'origine végétale
(plantes terrestres).
3.Définitions, abréviations, références et normes
3.1. Abréviations
Ar argon
As arsenic
AsB arsenobetaine
AsIII
arsenite
AsV
arsenate
Asi anorganisch arseen
MMA monomethyl arsonate
DMA dimethyl arsinate
CRI « Collision Reaction Interface », ce dispositif permet, par l’introduction de certaines gases,
d’éliminer des interférences isobariques lors de mesures en ICP-MS
Eau milliQ eau ultra pure
H20
bidi home made eau bidistillée
g gramme
Gaz CRI gaz employé dans le dispositif CRI : hydrogène (H2)
HPLC chromatographie liquide à haute performance
ICP-MS spectromètre de masse couplé à un plasma inductif
kg kilogramme
L litre
mL millilitre
MRC matériau de référence certifié
RBS 25 détergent professionnel
VAR TUNE solution multi-élémentaire (VAR-TS-MS Varian©) employée pour l’optimisation de l’ICP-MS et
contenant les éléments chimiques : Ba, Be, Ce, Co, In, Mg, Pb, Th et Tl
µg microgramme
µL microlitre
3.2. Références
Directive 2002/657/EC de 12/08/2002 (date de publication: 17/08/2002), concernant la performance des méthodes
analytiques et l’interprétation des résultats, implementing Council Directive 96/23/EC. Official Journal of the European
Communities L221/8 (2002).
SOP/TRA/PRE/01 : Préparation des échantillons pour le dosage des éléments traces
PRO/5.5/01 : Contrôles internes
PRO/5.1/04 : Elimination des déchets
SOP/TRA/ANA/03 : Spéciation de l’arsenic dans les céréales et produits céréaliers
4.Principe
4.1. Préparation
La préparation et l’homogénéisation des échantillons sont décrites dans la SOP/TRA/PRE/01.
Les échantillons homogénéisés sont introduits dans des récipients d’extraction. Après ajout de la solution d’extraction
acide et oxydante (HNO3 0.1M dans 3% H
2O
2), et après l’ajout des puces magnétiques, les récipients sont
hermétiquement fermés et placés dans le four à micro-ondes.
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Het gebruik van een doeltreffend opwarmingsprogramma en het roeren van de stalen m.b.v. een magnetische roerstaaf,
verzekert vervolgens de extractie van As uit het staal. De oxiderende omgeving zorgt ervoor dat het aanwezige AsIII
omgezet wordt in AsV
, zodat al het anorganisch As in het extract aanwezig is als AsV
. Na het doorlopen van het
opwarmingsprogramma, en na afkoeling van de buizen, is het extract klaar voor analyse met HPLC-ICP-MS.
4.2. Meting
De blanco’s, de ijkstandaarden evenals de oplossingen van de stalen worden in de carrousel van de monsterwisselaar
van de HPLC geplaatst. De keten HPLC-ICP-MS en de analyse worden gestuurd door de programma’s ICP_MS expert en
Galaxie en laten de controle van alle functies van het meetapparaat toe met inbegrip van de programmering van de
chromatografische scheiding van species in de stalen evenals de interpretatie, de behandeling en de archivering van de
ruwe data.
5.Validatieparameters
Zie validatiedossier
6.Goederen
6.1 Klein Laboratoriummateriaal
Maatkolven
Pipetpunten
Filters voor injectiespuiten (porositeit 0.45 µm)
Injectiespuiten van 10ml
Extractiebuizen van de microgolfoven
Handschoenen
Spatel
Vortex
Magnetische roerstaafjes
Conische buizen van 50 mL (aangepast voor centrifugatie op 10.000 t/min)
Conische buizen van 15 mL met schroefdop
Gegradueerde polypropyleen buizen 50 ml (PP tubes), klasse A geijkt
Destillatie systeem voor aanmaak van dubbel gedestilleerd water
Monsterwisselaar ICP-MS
HPLC: Monsterwisselaar HPLC
Vials voor de monsterwisselaar van de HPLC
Anionenuitwisselingskolom (Hamilton PRP-X100, 250x46 mm, deeltjes 10 µm)
Prekolom (Hamilton PRP-X100 guard kolom)
HPLC-pompen
Controller voor kolomoven
Oven voor de kolom
6.2. Specifieke reactieven
Alle reactieven worden bewaard bij omgevingstemperatuur (20±5 °C) tenzij anders is aangeduid.
VAR-TUNE 5ppb: Optimalisatieoplossing VAR-TS-MS Varian©multi-elementoplossing, verdund tot 5 µg.L-1. Om
deze oplossing te bereiden moet de stockoplossing VAR-TS-MS (10 mg.L-1
) verdund worden.Daartoe wordt 25µL
stockoplossing en 2 mL geconcentreerd HNO3 in een PP tube van 50 mL gebracht en aangevuld met dubbel
gedistilleerd water tot de maatstreep. Indien een grotere tube of maatkolf wordt gebruikt dienen de hoeveelheden
verhoudingsgewijs aangepast te worden.
Ammoniakoplossing NH3 25%, p.a.
Ammoniumcarbonaat poeder (CH6N
2O
2 * CH
5NO
3 (1:1)), p.a.
Ammoniumcarbonaatoplossing van 40mM op pH 9.4. Om deze oplossing te bereiden moet 6.28 g/L
ammoniumcarbonaat opgelost worden in milliQ-water, en aangepast worden met NH3 25% (~4.5ml per liter) tot
pH 9.4.
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L’application d’un programme de chauffe adéquat et l’agitation des échantillons au moyen d’une puce magnétique,
assure ensuite l’extraction de l’As de l’échantillon. Le milieu oxydant entraine l’oxydation de l’ AsIII
en AsV
. De ce fait tout
l’arsenic inorganique dans l’extrait sera présent sous forme d’AsV
. Après la fin du programme de chauffe et
refroidissement des tubes, les échantillons sont prêts à être analysés par HPLC-ICP-MS.
4.2 Mesure
Les blancs, les étalons et les solutions d’échantillons sont placés dans le carrousel du passeur d’échantillons de l’HPLC. Le
système HPLC-ICP-MS et l’analyse sont gérés par les logiciels ICP-MS_expert et Galaxie. Ils permettent de piloter et de
contrôler toutes les fonctions de l’appareil de mesure, la programmation de l’élution des échantillons ainsi que
l’interprétation, le traitement et l’archivage des résultats bruts.
5.Paramètres de validation
Voir dossier de validation
6.Fournitures
6.1. Petit matériel de laboratoire
Ballons jaugés
Tips pour pipettes
Seringues de 10ml
Filtres pour seringue (porosité 0.45 µm)
Récipients d’extraction du four micro-onde
Gants
Spatule
Vortex
Puces magnétiques
Tubes coniques de 50 mL (adapté pour la centrifugation à 10.000 tr/min)
Tubes coniques de 15 mL avec bouchon
Des tubes en polypropylène, gradués (tubes PP), jaugés classe A
Système de distillation pour la production de l’eau distillée
Echantillonneur ICP-MS
HPLC : Echantillonneur HPLC
Vials pour l’échantillonneur HPLC
Colonne échangeuse d’anions (Hamilton PRP-X100, 250x46 mm, particules 10 µm)
Précolonne (Hamilton PRP-X100 guard column)
Pompes HPLC
Four pour la colonne
Contrôleur four colonne
6.2. Réactifs spécifiques
Sauf mention contraire, tous les réactifs sont conservés à température ambiante (20±5°C)
VAR-TUNE 5ppb: solution d’optimisation VAR-TS-MS Varian©multi-element diluée à 5 ppb/L. Pour préparer cette
solution, il faut diluer la solution mère VAR-TS-MS (10 mg/L). Pour ce faire, mettre 25 µL de solution mère et 2
mL HNO3 concentré dans un tube PP de 50 mL et compléter jusqu’au trait avec de l’eau bidistillée. Si un tube ou
un ballon jaugé plus grand est utilisé, les quantités à pipeter doivent être ajustées proportionnellement.
Solution d’ammoniac NH3 25%, p.a.
Carbonate d’ammonium en poudre (CH6N
2O
2 * CH
5NO
3) p.a.
Carbonate d’ammonium, solution de 40mM à pH 9.4. Pour préparer la solution il faut dissoudre 6.28 g/L de
carbonate d’ammonium dans de l’eau MQ et ajuster le pH avec NH3 25% (~4.5ml per liter) jusque pH 9.4.
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pH buffers (pH4 en pH7) voor kalibratie pH meter
Aceton, technical
Methanol, HiPerSolv CHROMANORM, for HPLC gradient grade
Waterstof peroxide oplossing (30%), p.a
RBS 25
Salpeterzuur HNO3 conc
(68%), kwaliteit extra pur.
Salpeterzuur oplossing HNO3 0.11 M (bereiding: 7.26 ml HNO
3 conc in 1L milliQ-water)
Salpeterzuur oplossing HNO3 0.1 M in 3% H
2O
2 (bereiding: 650 µl HNO
3 conc en 10 mL H
2O
2 30% aanlengen
tot 100 mL met milliQ-water)
6.3. Referentiematerialen
CRM: “NMIJ 7503 a, Rice flour” of analoge CRM. NMIJ 7503 a: gecertificeerd totaal As gehalte: 98 ± 7 µg/kg;
gecertificeerde concentratie AsIII
: 71.1 ± 2.9 µg/kg; gecertificeerde concentratie AsV
: 13.0 ± 0.9 µg/kg. Som anorganisch
arseen 84.1 ± 3 µg/kg. Wordt bewaard bij
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Tampons pH pour la calibration du pH mètre (pH4 en pH7)
Solution de peroxide d’hydrogène (30%)
Acide nitrique HNO3
(68%), qualité extra pur
Acide nitrique HNO3 dilué 0.11 M
(préparation: 7.26 ml HNO
3 conc dans 1L eau milliQ)
Acide nitrique HNO3
dilué 0.1 M contentant 3% H2O
2 (préparation: 650 µl HNO
3 conc et 10 mL H
2O
2 30%
ajuster jusque 100 mL avec de l’eau milliQ)
Acetone, technical
Méthanol, HiPerSolv CHROMANORM, for HPLC gradient grade
RBS 25
6.3. Matériaux de référence
MRC : “NMIJ 7503 a, Rice flour” ou analogue. NMIJ 7503 a: concentrations certifiées : arsenic total: 98 ± 7 µg/kg; AsIII
:
71.1 ± 2.9 µg/kg; AsV
: 13.0 ± 0.9 µg/kg. Arsenic inorganique = AsIII
+AsV
= 84.1 ± 3 µg/kg. Est stocké à
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
De prekolom: Een spoeling van de prekolom met een 1 % oplossing van salpeterzuur kan nodig zijn indien de
gemeten druk te sterk varieert, of abnormaal hoog is (cf. C:\Documents and Settings\CODA\My
Documents\general\logbooks). Vooraleer de spoeling aan te vatten moet de prekolom verplicht van de kolom
afgekoppeld worden.
Gedetailleerde informtie i.v.m het onderhoud en het gebruik van de kolommen en prekolommen is terug te vinden in het
document : “SOP/TRA/ANA/03/DOC01” ‘Reinigen en onderhoud van de kolom, pre-kolom en
chromatografiesysteem’(zie SOP/TRA/ANA/03).
8.2. Voorbereiding van de stalen (Extractie)
1. Een deel van het gehomogeniseerde staal (zie SOP/TRA/PRE/01) afwegen in een extractiebuis (in tweevoud). Dit
gewicht is afhankelijk van het staal. Als richtlijn wordt maximum ± 2 g vers materiaal afgewogen en ± 0.5 g droog
materiaal, voor vloeistoffen is dit maximum ± 1mL. Het juiste afgewogen gewicht wordt genoteerd op het document
“SOP/TRA/ANA/04/DOC02 : Formulier voor de registratie van de technische parameters” (in bijlage 2) ten einde de
verdunningsfactor te kunnen berekenen. Na toevoegen van 9mL HNO3 0.11 M en 1 ml H
20
2 30%, waarbij zoveel
mogelijk materiaal dat op de wanden plakt naar beneden wordt gespoeld, wordt een magnetische roerstaaf
toegevoegd, wordt de buis gevortext (om materiaal te bevochtigen) en worden de extractiebuizen gesloten en in de
carrousel geplaatst. De resulterende verdunningsfactor ligt typisch tussen 6=(2+10)/2 en 68=(0,15+10)/0,15. De
procedureblanco’s en de CRM(s) (ook in 2 herhalingen) worden op dezelfde manier behandeld als de stalen.
2. De extractiebuizen worden per 16 of per 24 buizen in de carrousel van de microgolfoven geplaatst en dit zo
symmetrisch mogelijk om een zo gelijkmatig mogelijke temperatuurverdeling, die gemeten wordt met IR cellen, te
verkrijgen. De carrousel wordt in de microgolfoven geplaatst, de deur wordt gesloten en het
verwarmingsprogramma met roerfunctie wordt opgestart. Het programma is “MAE As 90.27” (temperatuurstijging
tot 90 °C gedurende 7 minuten waarna de temperatuur op 90 °C gehouden wordt gedurende 20 minuten;
roersnelheid op 3).
3. Na afkoelen worden de extractiebuizen geopend en wordt de oplossing in een conisch buisje (voor centrifugatie) van
50 mL gebracht. De oplossing wordt zo gecentrifugeerd gedurende 10 minuten bij een snelheid van 12500 g
(10000 rpm op Juan centrifuge). Het supernatans wordt overgebracht in een spuit waarvan voordien de zuiger werd
verwijderd en waarop een filter werd geplaatst (porositeit 0.45 µm). De oplossing wordt aldus gefiltreerd en het
filtraat wordt in buizen van 15 mL gebracht die afgesloten worden met een stop en in de koelkast (5±3°C) bewaard
worden tot de analyse aanvangt.
8.3. IJking, ijkstandaarden en procedureblanco’s
HPLC is een kwalitatieve en kwantitatieve analysemethode. De identificatie van de in het staal aanwezige verbindingen
gebeurt door vergelijking van de retentietijden van de verschillende geëlueerde species met de retentietijden van de As
species aanwezig in de standaardoplossing die naast AsV
, ook de organische species AsB, DMA en MMA bevat omdat
deze frequent aanwezig zijn in de betreffende matrices en zo, ten informatieve titel, tevens informatie over deze species
kan bekomen worden. De concentratie van de aanwezig species kan bepaald worden met behulp van een calibratiecurve
op vijf niveau’s (0; 0,5; 1; 2 en 5 µg.L-1
). In het kader van dit proefschrift is enkel de kwantificatie van AsV
verplicht.
Een intermediaire oplossing (‘SolB As b’) die de 4 As-species bevat aan 250 µg/L, wordt bereid door verdunning van
individuele geconcentreerde ijkstandaarden van 1000 µg/L. De bereiding van de afzonderlijke ijkstandaarden van 1000
µg/l wordt in detail weergegeven in tabel 1. As V
wordt als oplossing (1000 µg/L) aangekocht.
AsB DMA MMA
arsenobetaine dimethylarsinic
acid
monosodium
methylarsonate
afwegen (mg) 47,5 170,56 109,73
aanlengen tot (ml) 20 100 50
conc opl (ppm) 1000 1000 1000
Tabel 1 : Bereiding van de individuele standaarden van 1000 mg/L
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Pré-colonne : un rinçage de la pré-colonne avec une solution d’acide nitrique 1% peut s’avérer nécessaire si la
pression mesurée varie de manière importante, ou est anormalement élevée (cf. C:\Documents and
Settings\CODA\My Documents\general\logbooks). Il faut impérativement déconnecter la pré-colonne de la
colonne avant de procéder au nettoyage.
Des informations détaillées sur l’entretien et l’utilisation des colonnes et pré-colonnes sont décrites dans le document
“SOP/TRA/ANA/03/DOC01 : Nettoyage et entretien colonne, pré-colonne et système chromatographique” (voir
SOP/TRAANA/03).
8.2. Préparation des échantillons (Extraction)
1. Peser une partie de l’échantillon homogénéisé (voir SOP/TRA/PRE/01) dans le récipient d’extraction (2 répliques par
échantillon). Le poids dépend du type d’échantillon : un maximum de ± 2 g pour les échantillons frais, un maximum
de ± 0.5 g pour les échantillons secs et un maximum de ± 1 mL pour les boissons. Le poids exacte est noté dans le
document “SOP/TRA/ANA/04/DOC02 : Formulaire pour l’enregistrement des paramètres techniques » (cf. annexe 2)
afin de pouvoir calculer le facteur de dilution exacte. Ajouter 9,00 mL HNO3 0.11 M et 1 ml H
20
2 30%, en forçant le
matériel qui est resté attaché aux parois à descendre vers le fond du tube. Puis ajouter une puce magnétique, fermer
les récipients et les placer dans le carrousel. Le facteur de dilution est compris entre 6=(2+10)/2 et
68=(0,15+10)/0,15. Préparer les blancs procédé et les MRC, en 2 répliques, de la même manière.
2. Les récipients sont placés dans le carrousel du micro-onde au nombre de 16, 24 ou 40 de manière symétrique dans le
souci d’assurer une mesure homogène de la température par les cellules IR de la sonde. Introduire le carrousel dans le
four à micro-onde, fermer la porte et enclencher le programme de chauffe « MAE As 90.27 » qui correspond à
une montée en température jusqu'à 90°C pendant 7 minutes, ensuite la température est maintenue à 90°C durant 20
minutes (vitesse d’agitation : niveau 3).
3. Après refroidissement, ouvrir les récipients et transférer la solution dans un tube conique de 50 mL, destiné à la
centrifugation. Ces tubes sont ensuite centrifugés pendant 10 minutes à une vitesse de 12500 g (10000 rpm sur
centrifuge Juan). Les surnageants sont transférés dans une seringue préalablement séparée de son piston et munie
d’un filtre (porosité : 0.45 µm). La solution filtrée sera directement récupérée dans des tubes coniques de 15 mL,
fermés par un bouchon, et stockés au frigo (5±3°C) en attendant d’être analysés.
8.3. Etalonnage, étalons, « blancs procédé »
L’HPLC est une méthode d’analyse qualitative et quantitative. L’identification des espèces est rendue possible grâce à la
comparaison des temps de rétention des espèces présentes dans l’échantillon avec celles d’une solution étalon éluée
dans les mêmes conditions. La solution d’étalon utilisée contient en plus de l’AsV
, les espèces organiques AsB, DMA et
MMA qui peuvent être présentes dans les matrices concernées. Ceci permet, à titre informatif, d’obtenir en même temps
des informations sur les concentrations de ces espèces. La quantité de chaque espèce est déterminée au moyen d’une
courbe de calibration qui est construite à partir de cinq solutions étalons (0 ; 0,5 ; 1 ; 2 et 5 µg.L-1
). Dans le cadre de
cette instruction seulement la quantification d’AsV
est exigée.
A cet effet, une solution intermédiaire (‘SolB As b’) qui contient les quatre espèces d’intérêt à 250 µg/L, est préparée par
la dilution d’étalons individuels concentrés (1000 µg.L-1
). La préparation de ces étalons est détaillée dans le tableau 1.
AsV
est acheté en solution (1000 µg/L).
AsB DMA MMA
arsenobetaine dimethylarsinic
acid
monosodium
methylarsonate
afwegen (mg) 47,5 170,56 109,73
aanlengen tot (ml) 20 100 50
conc opl (ppm) 1000 1000 1000
Tableau 1 : Préparation des étalons individuels à 1000 mg/L
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Om de ‘SolB As b’ te bereiden wordt 62,5 µl van elke ijkstandaard aan 1000 mg/L genomen en overgebracht in een
maatkolf van 250 mL. Na aanlenging tot de maatstreep met MilliQ water bedraagt de uiteindelijke concentratie van elke
species 250 ppb. Deze oplossing mag maximaal gedurende 35 dagen gebruikt worden en dient gestockeerd te worden
in de koelkast (5±3°C).
Het gamma van werkstandaarden wordt bereid door opeenvolgende verdunningen van de intermediaire oplossing ‘SolB
As b’. De bereiding van deze standaarden is weergegeven in Tabel 2 voor gebruik van PP tubes van 50 mL. Indien
andere formaten worden gebruikt moeten de hoeveelheden proportioneel worden aangepast. Elke dag wanneer analyses
uitgevoerd worden moeten de ijkstandaarden vers bereid worden.
Volume van de oplossing
‘B inorganic’
(µL)
Volume HNO3 68%
(µL)
Volume H20
2 30%
(µL)
Calibratie blanco 0 326 5000
Standaard 1. 0,5 µg.L-1
100 326 5000
Standaard 2. 1,0 µg.L-1
200 326 5000
Standaard 3. 2,0 µg.L-1
400 326 5000
Standaard 4. 5,0 µg.L-1
1000 326 5000
Tabel 2: Bereiding van de 4 niveau’s van standaardoplossingen in tubes van 50 mL
Een onafhankelijke controlestandaard van 5 µg/l (QC) zal op dezelfde wijze gemaakt worden als beschreven in Tabel 2,
en vertrekkende vanaf een intermediaire oplossing ‘SolB As b ctrl’ die niet degenene is waarmee de standaarden van de
calibratiereeks werden gemaakt. Deze onafhankelijke standaard zal gemeten worden aan het begin en aan het einde
van de reeks stalen.
Nadat de maatkolven aangevuld zijn tot de maatstreep worden de oplossingen overgebracht in vials voor de meting.
De “procedureblanco’s” zijn bedoeld om de verschillende stappen in de voorbereiding van de stalen te controleren. Ze
omvatten dan ook alle behandelingen, het wassen en de gebruikte reactieven gedurende de extractie, maar dan zonder
staal. De “procedureblanco’s” worden uitgevoerd in twee herhalingen ten einde een representatief resultaat voor de
procedure te bekomen en de afwezigheid van contaminaties na te gaan.
In het geval de concentratie in een extract hoger is dan de geldende calibratierange (zei validatiedossier) moet deze
worden verdund voor analyse. Deze verdunning gebeurt met de oplossing gebruikt als ‘calibratie blanco’ (zie tabel 2).
8.4. Meting en export van resultaten
8.4.1. Opstarten van het apparaat.
8.4.1.1. ICP-MS
Omwille van de stabiliteit en het behoud van de luchtledigheid in de ICP-MS spectrometer, blijft het toestel steeds onder
spanning en blijven de vacuumpompen in werking.
Opstarten van de koeler (temperatuurregeling op 20°C)
De toevoer van de gassen controleren:
Ar: 7 bar (minimum 6,0 - maximum 8,3),
H2 :4 bar (minimum 2,75 - maximum 4,8)
Nagaan van de toestand van de leidingen van de peristaltische pomp en deze vervangen indien er zichtbare
slijtage wordt waargenomen (aanvoerleidingen zwart-zwart en afvoerleidingen blauw-blauw of grijs-grijs)
Indien nodig het reservoir met spoelvloeistof (HNO3 2%) aanvullen
Het niveau van de vloeistof in het reservoir voor de afvalvloeistoffen controleren en indien nodig ledigen
De autosampler van de ICP-MS aanschakelen
Opstarten van de computer en het programma ICP_MS Expert.
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Pour la préparation de la solution ‘SolB As b’’, on prélève 62,5 µL de chaque étalon à 1000 mg/L que l’on transfère
dans un ballon jaugé de 250 mL. Après mise au trait avec de l’eau milliQ, la concentration finale pour chaque espèce est
de 250 ppb. Cette solution peut être utilisée au maximum pendant 35 jours et doit être stockée au frigo (5±3°C).
Les solutions étalons utilisées pour la calibration sont obtenues par la dilution de la solution ‘SolB As b’ dans des ballons
jaugés de 25 mL. La préparation des étalons est détaillée dans le tableau 2, pour des tubes PP de 50 mL. Si des autres
formats sont employés, les quantités doivent être ajustées proportionnellement. Ces solutions doivent être préparées lors
de chaque nouvelle journée d’analyse.
Volume à prélever
de la solution ‘B inorganic’
(µL)
Volume HNO3 68%
(µL)
Volume H20
2 30%
(µL)
Blanc d’étalonnage 0 326 5000
Etalon 1. 0,5 µg.L-1
100 326 5000
Etalon 2. 1,0 µg.L-1
200 326 5000
Etalon 3. 2,0 µg.L-1
400 326 5000
Etalon 4. 5,0 µg.L-1
1000 326 5000
Tableau 2 : Préparation des quatre solutions étalons pour des tubes de 50 mL
Une solution étalon indépendante de concentration 5 µg/l (QC) sera préparée comme décrit dans le tableau 2, au départ
d’une solution intermédiaire ‘SolB As b ctrl’ qui n’est pas celle avec laquelle l'étalonnage a été réalisé. Cette solution
indépendante sera mesurée au début et à la fin de la séquence d’analyse.
Après avoir porté les solutions au trait avec de l’eau milliQ, celles-ci sont transvasées dans des vials pour l’analyse.
Les blancs procédé sont censés représenter l’ensemble des étapes de la préparation de l’échantillon. Ils comprennent
donc toutes les manipulations, la vaisselle et les réactifs utilisés dans le procédé sans que l’échantillon intervienne. Les
blancs procédé sont réalisés en deux répétitions afin d’assurer une réelle représentativité du procédé et pour vérifier
l’absence des contaminations.
Quand la concentration d’un extrait est plus haute que la courbe de calibration valide (cf dossier de validation), il faut le
diluer pour l’analyse. Cette dilution est faite avec la solution utilisée comme ‘blanc d’étalonnage’ (cf. tableau 2).
8.4. Mesures et exportation des résultats
8.4.1. Mise en route de l’appareillage
8.4.1.1 ICP-MS
Pour des raisons de stabilité et de conservation du vide dans les spectromètres ICP-MS, le spectromètre reste toujours sous
tension, pompes à vide en fonction.
Mettre sous tension le refroidisseur (température set à 20°C).
Vérifier les alimentations en gaz :
Ar : 7 bars (minimum 6,0 - maximum 8,3 bars)
H2 : 4 bars (minimum 2,75 - maximum 4,8 bars)
Vérifier l’état des tuyaux de la pompe péristaltique et les changer en cas d’usure visible (tuyau d’arrivée noir-noir
et tuyau d’évacuation bleu-bleu).
Compléter si besoin le bidon de rinçage du passeur (HNO3 2%).
Vérifier le niveau de liquide dans le bidon de récupération, si nécessaire procéder à l’évacuation du trop-plein.
Allumer le passeur d’échantillon de l’ICP-MS.
Démarrer le système informatique et le logiciel ICP-MS_Expert.
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Het plasma ontsteken via het icoon
Indien zich een probleem voordoet tijdens de ontsteking, op de oranje noodstopknop drukken die vooraan op de
spectrometer is aangebracht. Nadien nogmaals op dezelfde knop drukken om de ontsteking van het plasma
opnieuw mogelijk te maken.
Het CRI-gas openzetten en de leidingen spoelen door op ‘Actions’ – ‘CRI gas supply purge’ – ‘Test’ te clicken.
Het werkblad « speciationAs.MSWS » inladen en er de optimalisatieparameters van een vorige analysedag in
copiëren (C:\Program Files\Varian\ICP-MS Expert\Run\My Results\Speciation\jaar (jaar in omloop)). Indien deze
file beschadigd is kan een gelijkaardige file geopend worden vanaf een template met dezelfde naam via ‘File-
new- from template’.
Het document “SOP/TRA/ANA/03/DOC02 : Het opmaken van een nieuw werkblad voor anorganisch As (ICP-
MS_expert)” (zie SOP/TRA/ANA/03) beschrijft hoe dergelijk werkblad nieuw kan aangemaakt worden.
De bemonsteringssonde wordt in water of in aangezuurd water gedompeld en men laat het apparaat opwarmen
gedurende 30 minuten. Gebruik de knop ‘Instrument’ en vervolgens ‘Autosampler control’ om de positie van het
buisje aan te geven.
Nagaan of het pompen van de vloeistof correct verloopt : aankomst (aan de nebulizer) en afvoer (aan het
afvalvat).
Het document “SOP/TRA/ANA/03/DOC03 : Voorzorgen en onderhoudsacties voor de ICP-MS” (zie
SOP/TRA/ANA/03) beschrijft bijkomende acties en voorzorgsmaatregelen die regelmatig dienen genomen te
worden om voortdurend een goede functionaliteit van de ICP-MS te garanderen.
8.4.1.2. HPLC
De autosampler, 2 HPLC-pompen en de kolomoven aanschakelen
De fles die bedoeld is voor het spoelen van de injector vullen met H20
bid
De prekolom installeren in de houder en het geheel handvast aanschroeven
De kolom verbinden met de prekolom en de schroef die het geheel samenhoudt voldoende aanvijzen. Indien er
tijdens het gebruik lekken ontstaan kan het nodig zijn ze lichtjes verder aan te spannen of om de ferrule te
vernieuwen.
De blauwe leiding die van de autosampler komt aansluiten aan de prekolom en de rode leiding die naar de ICP-
MS gaat aansluiten aan de uitgang van de kolom. Vervolgens de kolomoven aanschakelen.
De solventenflessen die bestemd zijn voor pomp A en B bijvullen: Solvent A is een ammoniumcarbonaatbuffer
van 40 mM op pH 9.4 en solvent B is milliQ-water. Bereid een voldoende hoeveelheid van elk solvent om te
voorkomen dat de kolom droog komt in de loop van de analyse (risico op ingang van lucht in het systeem en
afname van de analytische performantie van de kolom). Elk staal zal ongeveer 11 mL verbruiken van solvent A.
Het niveau van het solvent in de afvalflessen controleren. Indien er te veel vloeistof aanwezig is wordt de fles
afgevoerd naar de kelder (zie PRO/5.1/04 : afvalverwijdering).
Het niveau controleren in de fles met dubbel gedistilleerd water voor de spoeling van de pompkoppen. Indien de
fles die onderaan staat vol is wordt ze overgegoten in of verwisseld met de bovenste fles; regel de
druppelsnelheid om een zo laag mogelijk debiet te bekomen.
Opstarten van het programma “Galaxie”
In de balk “Systems” klikt met op het het vakje “LC System” waardoor de pompen geïnitialiseerd worden. Deze
worden vanaf dan gecontroleerd door het programma Galaxie via de bovenvermelde weg en m.b.v het
volgende ikoon :
Een spoeling van het chromatografiesysteem met milliQ-water is noodzakelijk bij de aanvang van elke analyse.
Het debiet wordt geregeld op 0,5 mL/min, de samenstelling van het eluens op 100 % milliQ-water (solvent B), en
de tijd om tot het gewenste debiet te komen wordt op 5 minuten ingesteld. Deze spoeling (om het bewaarsolvent
uit de kolom te verwijderen) moet minstens 1 uur duren.
Wanneer de spoeling met milli-Q water beëindigd is, moet de kolom gespoeld worden met de mobiele fase met
100% solvent A bij een debiet van 1 mL/min gedurende minimum 30 minuten.
Wanneer de kolom voldoende geëquilibreerd is met het mengsel van de solventen dient het uiteinde van de rode
leiding die aangesloten is op de uitgang van de kolom verbonden te worden aan de verstuiver van de ICP-MS.
De aanvoerleiding op de peristaltische pomp van de monsterwisselaar van de ICP-MS wordt afgekoppeld.
De 2 peristaltische pompen die dienen voor de evacuatie van de spray-chamber worden aangezet en de tubings
worden erop gelegd.
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Allumer le plasma via l’icône suivante :
En cas d’allumage incorrect, appuyer sur le bouton orange d’arrêt d’urgence sur la face avant du spectromètre.
Ne pas oublier d’appuyer à nouveau sur le bouton orange sinon il n’est pas possible d’allumer le plasma.
Ouvrir l’arrivé des gaz CRI et purger le système en cliquant sur ‘Actions’ - ‘CRI gaz supply purge’-‘Test’.
Charger la feuille de travail « speciationAs.MSWS » et y copier les paramètres d’optimisation d’une journée
d’analyse précédente (C:\Program Files\Varian\ICP-MS Expert\Run\My Results\Speciation\AAAA (année en
cours)). Si ce fichier est endommagé, un fichier similaire, peut être ouvert à partir d’un template portant le même
nom, via ‘File-new-from template’.
Le document « SOP/TRA/ANA/03/DOC02: Configurer une nouvelle feuille de travail pour détermination de l’As
inorganic (ICP-MS_expert)» (voir SOP/TRA/ANA/03) décrit comment créer une telle feuille de travail.
Plonger la sonde dans une solution d’eau ou d’eau acidifiée, et laisser chauffer l’appareil pendant 30 min.
Utiliser
l’onglet ‘Instrument’ et ensuite ‘Autosampler control’ afin d’indiquer la position du tube.
Vérifier l’efficacité des pompages : arrivée (côté nébuliseur) et sortie (côté déchet).
Le document «SOP/TRA/ANA/03/DOC03: « Actions de précaution et maintenance pour l’ICP-MS” (voir
SOP/TRA/ANA/03) décrit des actions et précautions additionnelles à prendre régulièrement au niveau de l’ICP-
MS pour garantir en continu un bon fonctionnement.
8.4.1.2 HPLC
Mettre sous tension l’échantillonneur, les deux pompes pour HPLC et le four pour la colonne
Vérifier que la bouteille destinée au rinçage de l’injecteur soit remplie de H20bidi
Installer la pré-colonne dans son support, serrer l’ensemble mais pas de manière excessive
Connecter la colonne avec la pré-colonne, serrer suffisamment la vis qui maintient l’ensemble. Si éventuellement
lors de l’utilisation, des fuites apparaissent, resserrer légèrement ou remplacer la ferrule.
Connecter le tuyau bleu (sortant de l’échantillonneur) à la pré-colonne et le tuyau rouge à la sortie de la colonne
puis installer la colonne dans le four thermostaté. Allumer ensuite le four à colonne
Remplir les récipients pour les éluants avec les solvants suivant : le solvant A est une solution tampon de
carbonate d’ammonium 40 mM à pH 9.4 et le solvant B est de l’eau milliQ. Préparer une quantité suffisante de
chaque phase mobile afin d’éviter à la colonne de sécher en cours d’analyse (risque de laisser entrer de l’air
dans le système et de dégradation des performances analytiques). Chaque échantillon consommera 11 mL du
solvant A.
Contrôler le niveau du solvant dans les bouteilles de déchet, si nécessaire évacuer la bouteille vers la cave (voir
PRO/5.1/04 : élimination des déchets).
Contrôler le niveau de solvant dans les bouteilles contenant l’eau bidistillée pour la lubrification pour les têtes de
pompes. Si la bouteille du bas est remplie, transvaser son contenu dans (ou échanger avec) la bouteille du haut
et régler le goutte à goutte pour obtenir un débit le plus faible possible.
Démarrer le logiciel Galaxie
Dans l’onglet « Systems », cliquer sur la case à cocher « LC System », ce qui a pour conséquence d’initialiser les
pompes, elles sont désormais contrôlées par le logiciel Galaxie via l’onglet « Systems », dans le sous menu
symbolisé par l’icône suivante :
Un rinçage du système chromatographique par de l’eau milliQ est nécessaire avant toute analyse préalable.
Régler le débit sur 0,5 mL/min, la composition de l’éluant sur 100% d’eau milliQ (100 % solvant B), à atteindre
sur une durée de 5 min. Ce nettoyage doit durer au minimum une heure pour éliminer le solvant utilisé lors du
stockage de la colonne.
Lorsque le rinçage est terminé, il faut équilibrer la colonne en faisant passer de la phase mobile avec la
composition suivante : 100% du solvant A à un débit de 1 mL/min pendant au minimum trente minutes.
Lorsque la colonne a été suffisamment conditionnée avec le mélange d’éluants. connecter le tuyau rouge au
nébuliseur de l’ICP-MS. Relâcher le tuyau de l’échantillonneur de l’ICP-MS de la pompe péristaltique de l’ICP-MS.
Les 2 pompes péristaltiques pour l’évacuation de la chambre de nébulisation sont misent en marche et les
tubings sont fixés.
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8.4.2. Voorbereiding van de werkprogramma’s en van de analyse.
8.4.2.1. ICP-MS
Neem de file “speciationAs.msws”
Plaats de sonde in de VARTUNE 5 ppb en bekijk het signaal door op ‘start’ te klikken in het blad “optimization”
van het “Methode” menu. Wijzig eventueel de parameters in het menu, om het signaal te optimaliseren.
Er wordt aangeraden om minstens volgende waarden te bekomen:
Element (massa)
Benaderende intensiteit van het
signaal (in c/s)
In115
> 1,5.106
Th232
> 1,5.106
Be9
> 4.104
As75
< 4.102
Fractie oxiden en
dubbele ladingen
Ce/CeO < 3%
Ba/Ba++
< 3%
Na optimalisatie van het systeem, het aparaat nog gedurende 30 minuten laten stabiliseren met de
parameters van de dag, vooraleer de analyse te starten.
De ICP-MS is nu correct geconfigureerd en klaar voor de analyse van de stalen. Controleer of er geen
meetgegevens geregistreerd zijn in het deel ‘worksheet’ van de file. Indien dit wel het geval is dienen de
aanwezige cijfers uitgeveegd te worden gebruik makend van het menu “Edit/erase worksheet data” anders
zal de analyse niet opstarten.
BELANGRIJKE OPMERKINGEN
Zorg ervoor dat er slechts één werkblad geopend is op het ogenblik van de analyse.
Het plasma zal niet automatisch uitgaan, wat ook de gekozen regelingen zijn. Voor een langdurige
analysesequentie is het aan te raden een tijdvenster te kiezen dat moet toelaten verspilling van Ar te voorkomen.
8.4.2.2. HPLC
Maak een nieuwe analysereeks in Galaxie aan via het menu “Files”, “new”, “new sequence”. Geef een naam
aan de analysereeks en kies de optie “Arsenic” als analyse folder.
Begin met het invullen van het veld “method” met de analysemethode « SOP04_As Inorganic_SolA jjmmdd.METH
» (C:\Galaxie\Data\Arsenic), die de datum draagt verwijzend naar de aanmaak van de individuele
geconcentreerde standaardoplossingen.
Het document “SOP/TRA/ANA/04/DOC01 : Het opmaken van een nieuwe methode file voor As-speciatie in
Galaxie” (in bijlage 1) beschrijft hoe een nieuwe file voor de analysemethode kan aangemaakt worden voor het
geval hogergenoemde methodefiles verloren of beschadigd zijn.
Het volstaat een enkel veld in te vullen met de methode en vervolgens op de hoofding van de kolom te klikken en
ten slotte op het ikoon klikken om automatisch al de andere velden “method” voor de andere stalen in te
vullen.
Opgelet, op het einde van een analysereeks moeten 2 ‘shutdown’ stalen (vials gevuld met milliQ-Water)
toegevoegd worden en ingesteld worden met de respectievelijke methoden “lowflow0.2_20A80B_A.Meth” en
“lowflow02_20A80B_B.meth”. Deze twee methoden dienen om het debiet aan mobiele fase te verminderen eens
de analyse beëindigd is.
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8.4.2. Préparation des programmes de travail et d’analyse
8.4.2.1 ICP-MS
Accéder au fichier “speciationAs.msws”
Placer la sonde dans la solution VAR TUNE 5 ppb et regarder le signal qui en découle en cliquant sur ‘start’ dans
la feuille ‘Optimization’ dans le menu ‘Method’. Modifier éventuellement les paramètres du menu pour optimiser
le signal.
Il est conseillé d’avoir au moins les valeurs suivantes:
Elément (masse) Intensité approximative du signal
(en c/s)
In115
> 1,5.106
Th232
> 1,5.106
Be9
> 4.104
As75
< 4.102
Fraction des oxydes et des
doubles charges
Ce/CeO < 3%
Ba/Ba++
< 3%
Après optimisation du système, laisser encore l’appareil se stabiliser pendant 30 minutes avec les conditions du
jour, avant de démarrer les analyses.
L’ICP-MS est correctement configuré et prêt pour analyser les échantillons. Vérifier que la feuille de travail ne
contienne aucune donnée dans la partie ‘worksheet’. Dans le cas contraire effacer ces valeurs au moyen du
menu “Edit/Erase worksheet data ” ou sinon l’analyse ne pourra par démarrer.
REMARQUE IMPORTANTES
veiller à ce qu’une seule feuille de travail dans ICP-MS_expert soit ouverte au moment où l’analyse commence
Le plasma ne s’éteindra pas automatiquement quel que soit les réglages choisis. Pour de longue séquence
d’analyse, il est conseillé de choisir un créneau horaire permettant d’éviter le gaspillage de l’Ar
8.4.2.2 HPLC
Créer une nouvelle séquence d’analyse dans Galaxie, via le menu “Files”-“new”-“new sequence”. Attribuer un
nom à la séquence et choisir l’option “LC Arsenic” comme dossier d’analyse.
Commencer par remplir le champ « method » avec la méthode d’analyse « SOP04_As
Inorganic_SolAjjmmdd.METH qui porte la date de la préparation des standards individuelles concentrées »
(C:\Galaxie\Data\Arsenic)
Le document « SOP/TRA/ANA/04/DOC01 : Configurer une nouvelle méthode chromatographique pour la
spéciation (Galaxie)» (en annexe 1) décrit comment configurer une méthode d’analyse pour la spéciation).
Il suffit de remplir un seul champ avec le nom de la méthode puis de cliquer sur l’entête de la colonne et enfin
sur l’icône pour remplir automatiquement tous les autres champs « method ».
A la fin d’une séquence, deux échantillons ‘low flow’ (vial contenant de l’eau milliQ) doivent être ajoutés et réglés
respectivement sur les méthodes “ lowflow0.2_20A80B_A.Meth” et “ lowflow02_20A80B_B.meth.meth”. Ces deux
méthodes permettent de réduire le débit de la phase mobile une fois l’analyse terminée.
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De velden “Run Name (prefix)” invullen met de namen van de stalen. Een typsiche sequentie begint met twee
vials gevuld met de extractie-oplossing (0.1M HNO3 3 %H
2O
2=BG;background)) (ten einde de achtergrondruis
en de aanwezigheid van eventuele verontreinigingen te evalueren), vervolgens komen de procedureblanco’s, de
As ijkstandaarden (in stijgende concentratie) en het QC-staal (5ppb); tenslotte een oplossing van 1 %
salpeterzuur, een BG-staal en een milliQ_water, )gevolgd door de CRM(S) en de stalen. Op het einde van de
sequentie, vlak voor de “low flow” oplossingen wordt de onafhankelijk ijkstandaard van As (5 ppb) opnieuw
gemeten om de stabiliteit van het signaal na te gaan.
Het veld “Run Id postfix” invullen. Het eerste veld van de kolom kiezen en daarin het getal 1 invullen. Klikken op
de hoofding van de kolom en het ikoon
kiezen, waardoor een venster verschijnt dat toelaat om de rest van de velden automatisch in te vullen.
De analysereeks (sequentie) opslaan.
De autosampler van de ICP-MS (SPS-3) uitschakelen.
In de balk “Systems”, het ondermenu ICP kiezen dat wordt vorgesteld met volgend ikoon en op de knop
“connect” drukken. Deze actie koppelt de HPLC aan de ICP-MS. In dit stadium is het systeem klaar om de
verwerving van gegevens te beginnen.
8.4.2.3. Instellen van de monsterwisselaar van de HPLC
Het laatste apparaat dat moet geconfigureerd worden is de monsterwisselaar van de HPLC. Hiertoe dienen een aantal
parameters ingegeven te worden via het controlepaneel van het apparaat.
Na aanzetten van de autosampler dient op de knop die overeenkomt met het commando ‘auto page’ gedrukt te worden
en kunnen de volgende gegevens ingegeven worden:
Het nummer van de eerste te analyseren vial (in principe 1)
Het nummer van het laatste te analyseren vial (in principe gelijk aan het totaal aantal vials aanwezig in de
carrousel)
De analysetijd per staal: 10 minuten
Deze tijd stemt overeen met de tijd voor verwerving van een chromatogram, + 2 minuten voor het spoelen
van de naald van de injector en om naar het volgende staal te gaan.
Het injectievolume (in principe 60µL)
Het aantal injecties per vial (in principe 1)
8.4.2.4. Start van de analyse
Om de analyse te starten volstaat het om op de groene pijl te klikken aanwezig boven de analysereeks. Het systeem
maakt zich dan klaar om de analyse te starten (before run, prerun, stabilisaton delay: zichtbaar als stappen in Galaxie).
Als “waiting for injection” verschijnt in Galaxie, dan “start auto” op autosampler indrukken. Het geheel van de verwerving
en de controle gebeurt volledig en automatisch door de Galaxie-software.
8.4.3. Einde van de analyse
8.4.3.1. ICP-MS
Op het einde van de analysereeks wordt het plasma manueel gedoofd door te klikken op het
icoon
Na het doven van het plasma:
-wachten tot het einde van het aftellen van 120 s wat moet toelaten om de cones volledig te laten
afkoelen.
-de leidingen van de peristaltische pomp losmaken
-de stalenwisselaar uitschakelen
-de toevoer van H2 afsluiten; nooit de Ar aanvoer afsluiten
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Centrum voor Onderzoek in Diergeneeskunde en Agrochemie
Centre d’Etude et de Recherches Vétérinaires et Agrochimiques
SOP/TRA/ANA/04 Vnr : 02 Datum/Date : 18/06/14 Pg 17/25
Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Remplir les champs “Run Name (prefix)” avec les noms des échantillons. Typiquement une séquence commencera
par deux vials contenant la solution d’extraction (HNO3 0.1 M dans 3% H
2O
2 =BG (background)) (afin d’évaluer
le bruit de fond ainsi que la présence d’éventuelles impuretés), puis par les blancs procédés, les solutions étalons
(par ordre croissant de concentration) puis la solution étalon indépendante (5 ppb) (QC) et enfin une solution de
rinçage de 1% en acide nitrique suivi d’unautres BG et un vial contenant de l’eau milliQ avant les MRC et les
échantillons. A la fin de la séquence, avant les deux échantillons ‘shutdown’, un vial contenant de la solution
étalon indépendante (5 ppb) sera ajouté de nouveau pour évaluer la stabilité du signal.
Remplir le champ « Run Id postfix », sélectionner le premier champ de la colonne et y introduire le chiffre « 1 ».
Cliquer sur l’entête de la colonne et choisir l’icône :
une fenêtre apparait vous permettant de numéroter automatiquement le restant des champs.
Enregistrer la séquence.
Eteindre l’autosampler de l’ICP-MS (SPS-3)
Dans l’onglet « Systems », sélectionner le sous menu ICP et appuyer sur le bouton ‘connect’.
Cette action couple l’HPLC à l’ICP-MS. A ce stade le system est prêt à commencer l’acquisition des données
8.4.2.3. Configuration de l’échantillonneur de l’HPLC
Le dernier instrument à configurer est l’échantillonneur de l’HPLC, cette étape nécessite d’introduire certains paramètres
via le panneau de contrôle de l’appareil.
Après allumage de l’appareil, appuyer sur le bouton correspondant à la commande ‘auto page’ et entrer les informations
suivantes :
Le numéro du premier vial à analyser (par défaut : 1)
Le numéro du dernier vial à analyser (par défaut : le nombre total de vial présent dans le carrousel)
La durée d’analyse par échantillon: 17 minutes
Cette durée correspond au temps d’acquisition, défini dans la méthode, augmenté de deux minutes, c’est le
temps nécessaire pour rincer l’aiguille de l’injecteur et aspirer l’échantillon suivant
Le volume d’injection (par défaut : 60 µL)
Le nombre d’injections par vial (par défaut : 1)
8.4.2.4. Démarrage de l’analyse
Pour démarrer l’analyse il suffit de cliquer sur la flèche verte présente au-dessus de la séquence d’analyse. Le système se
prépare alors pour commencer l’analyse (before run, prerun, stabilisaton dealy: visible comme étapes dans Galaxie).
Quand ‘waiting for injection’ se montre dans Galaxie, le bouchon « start auto » sur l’autampler doit être activé.
L’ensemble de l’acquisition et du contrôle est totalement et automatiquement géré par Galaxie.
8.4.3. Fin de l’analyse
8.4.3.1 ICP-MS
A la fin de la séquence d’analyse, éteindre le plasma en cliquant sur l’icône
Après l’extinction du plasma :
- Attendre la fin du compte à rebours de 120 secondes permettant le refroidissement complet des cônes
- Relâcher les tuyaux de la pompe péristaltique
- Eteindre l’échantillonneur de l’ICP-MS
- Fermer la vanne d’arrivé d’H2, ne jamais couper l’arrivée d’Ar
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
8.4.3.2. HPLC
De analysesequentie opslaan en sluiten
De chromatogramen zijn automatisch opgeslagen in een dossier dat de datum draagt van de analyse
(C:\Galaxie\Data)
De leiding die de uitgang van de kolom met de verstuiver verbindt losmaken en in de afvalfles brengen.
De carrousel uit de monsterwisselaar nemen en eventueel de “vials” bewaren in de koelkast.
Het spoelen van de kolom uitvoeren door er een aangepast solvent door te sturen gedurende 1 uur aan een
snelheid van 0,5 mL/min . Het type aangepast solvent is afhankelijk van de verwachte duur dat de kolom nadien
niet gebruikt zal worden:
-indien de verwachte duur minder dan 3 dagen bedraagt, dient de kolom gespoeld te worden met
milliQ-water
-indien de verwachte duur meer dan 3 dagen bedraagt, moet de kolom gespoeld worden, eerst met
MilliQ-water en dan met een oplossing van minstens 50% methanol, om de groei van bacteriën in de
kolom te verhinderen
Eens de spoeling is beëindigd, het debiet op 0 mL/min brengen op een tijd van 5 minuten.
Niet vergeten om voor het stockeren van de kolom, de 2 plastiek doppen erop te vijzen om te verhinderen dat het
solvent verdampt tijdens de stockage en de kolom zo uitdroogt.
De peristaltische pompen uitschakelen, evenals de kolomoven, de monsterwisselaar en de HPLC-pompen.
8.5. Behandeling van gegevens
8.5.1. Integratie van de pieken
De integratie en identificatie van elke piek die gedetecteerd wordt in een chromatogram gebeurt automatisch en
afhankelijk van de parameters in de methode die gebruikt wordt voor de chromatografische scheiding van het staal.
Een menselijke interventie is soms nodig om tot correcte resultaten te komen, bijvoorbeeld wanneer onbekende pieken
zich zeer dicht bij één van de te quantificeren pieken bevinden.
De corrigerende maatregelen zijn bvb. een manuele toewijziging van de integratielimieten van de pieken en een check of
de identificatie van de betrokken species juist is verlopen.
Om de integratielimieten van de pieken te corrigeren kunnen de groene en rode merkers die respectievelijk het begin en
het einde van de integratie aanduiden verschoven worden met behulp van de knop
De cursor van de muis verandert dan van vorm, een klik op de merker zet hem in de veranderingsmodus, en en tweede
klik valideert de gekozen positie als nieuwe positie van de merker.
Na het behandelen van de chromatogrammen, dienen deze bewaard en gesloten te worden.
8.5.2. Calibratiecurve
De concentratie van anorganisch As wordt berekend aan de hand van een calibratiecurve van AsV
(lineair model); door
gebruik van het mengsel van HNO3 en H
2O
2 als extractiemiddel, wordt As
III
immers ook omgezet tot AsV
. Deze rechte
resulteert uit de chromatogrammen van de 5 standaardoplossingen.
Vooraleer de calibratiecurve op te maken, dienen de chromatogrammen van de standaarden correct geïntegreerd te zijn
en zo bewaard te worden (via ‘File- save chromatogram’).
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
8.4.3.2 HPLC
Sauver et fermer la séquence d’analyse
Les chromatogrammes sont automatiquement sauvegardés dans un dossier (C:\Galaxie\Data) comportant la
date d’analyse.
Retirer le tuyau qui relie la sortie de la colonne au nébuliseur de l’ICP-MS et le raccorder à la bouteille de déchets
Sortir le carrousel de l’échantillonneur et au besoin stocker les vials au frigo
Procéder au rinçage de la colonne en faisant passer le solvant adéquat pendant une heure à un débit de 0,5 mL.
Le type du solvant adéquat est fonction de la durée d’inutilisation :
- Si la durée prévue est inférieure à 3 jours, la colonne doit être rincée avec de l’eau milliQ
- Si la durée prévue est supérieure à 3 jours, la colonne doit être rincée, d’abord avec eau MilliQ et après
avec une solution contenant au moins 50% de méthanol, ceci afin de prévenir la croissance de bactéries
à l’intérieur de la colonne
Une fois le rinçage terminé, amener le débit à 0 mL/min sur une durée de 5 minutes. Ne pas oublier avant de
stocker la colonne, de visser les 2 embouts plastiques qui empêcheront l’évaporation du solvant en dehors de la
colonne et le séchage de la colonne.
Eteindre les pompes péristaltiques, le four pour la colonne et enfin l’échantillonneur et les pompes HPLC
8.5. Traitement des données
8.5.1. Intégration de pics
Par défaut, l’intégration et l’identification sont automatiques pour tout pic détecté dans un chromatogramme et
dépendent des paramètres de la méthode choisie pour l’élution de l’échantillon.
Une intervention humaine est parfois nécessaire pour obtenir des résultats corrects, par exemple si des pics inconnus
sortent très près d’un pic à quantifier.
Les mesures correctives possibles sont une assignation manuelle des limites d’intégration des pics et la vérification de
l’identification correcte des composés d’intérêt présent dans le chromatogramme.
Pour corriger les limites d’intégration des pics, des marqueurs de couleurs vertes et rouges indiquant respectivement le
début et la fin de l’intégration d’un pic peuvent être déplacés à l’aide du bouton suivant :
Le curseur de la souris change alors de forme, un clic sur un marqueur le place en mode édition et un second clic valide
la position choisie comme nouvelle position du marqueur.
Après le traitement des chromatogrammes, ils doivent être sauvegardés et fermés.
8.5.2. Courbe de calibration
La concentration d’arsenic inorganique est calculée au moyen de la droite d’étalonnage d’AsV
. Par l’utilisation du
mélange HNO3 et H
2O
2 dans la solution d’extraction, l’As
III
est convertie également en AsV
. La droite d’étalonnage est
construite à partir des chromatogrammes des 5 solutions étalons.
Avant de créer la courbe de calibration, les chromatogrammes des étalons doivent avoir été correctement intégrés et
sauvés (via ‘File-save chromatogram’).
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Voor het opmaken van de calibratiecurve dient alsvolgt gewerkt te worden:
1. Open de chromatogrammen van de standaarden, evenals de methode SOP04_As
Inorganic_SolAjjmmdd.METH , die de datum draagt (jjmmdd) verwijzend naar de preparatie van de
gebruikte geconcentreerde individuele ijkstandaarden .
2. Ga naar het gedeelte “Calibration” van de methode en verander de naam van de calibratiefile (“Calibration
Curve File”) door de analysedatum en een referentie die verband houdt met de geanalyseerde stalen en kies
de folder met de datum van de dag als opslaglokatie.
3. Save de methode in de folder met de datum van de analysedag met een nieuwe naam die begint met
REPR_SOP04_SolAjjmmdd_x.METH en die tevens een verwijzing draagt naar de
geanalyseerde stalen (x) (en sluit ze.
Selecteer een chromatogram en klik op de “reprocess” knop die zich in de menubar bevindt.
Selecteer vervolgens de volgende opties:
Voor de balk Parameters
-in de optie “Method file” kies de methode “REPR_SOP04_SolAjjmmdd_ref. i.vm. stalen.METH “
-“Sample type” = “Standard”
-“Calibration mode”=”Clear old points”, voor de eerste standaard en “add” voor de volgende standaarden
-“Level” voor de volgorde van de standaarden (1 voor de 0,5ppb standaard; 2 voor de 5,0 ppb; etc.)
Voor de balk Opties
-duidt alleen de optie “Calibration” aan
5. Klik op de knop “ reprocess”
6. Volg dezelfde procedure voor de 4 overige standaard chromatogrammen
Wanneer de calibratiecurve is opgesteld, dient ze nog geassocieerd te worden met de chromatogrammen van de stalen.
Dit kan in één keer gebeuren voor alle stalen. Hiertoe dient een “Reprocessing list” aangemaakt te worden” in Galaxie
(via “File” –“new” –“new Reprocessing list”). Hierin plaatst men, de chromatogrammen van de te behandelen stalen
evenals de de methode ‘REPR_SOP_04_SolA_jjmmdd_ref. i.v.m stalen.METH’, waarin de betrokken calibratiecurve werd
opgeslagen Zoals voor de analysereeks (sequentie), volstaat het om alle chromatogrammen te sluiten en op de groene
pijl te klikken die zich boven de lijst bevindt om de berekeningen te starten. Wanneer de berekeningen gebeurd zijn
dienen de chromatogrammen van de stalen geopend te worden om de integratie van de pieken na te kijken en indien
nodig aan te passen (vb. start en stop van de piek, basislijn).
8.6. Uitvoer van de resultaten naar een Excel file.
In Galaxie kunnen de chromatogrammen op drie manieren worden voorgesteld:
Het chromatogram alleen
Het chromatogram samen met een tabel die de verschillende integraties van pieken samen brengt evenals de
basislijn die de gebruiker kan toevoegen in functie van de resultaten van de scheiding.
Het chromatogram en een tabel, waarbij alle gegevens voor elke piek die op het chromatogram gedetecteerd
werden, worden voorgesteld. Zo vindt men dan ondermeer de naam van de As-species (indien deze kon
geïdentificeerd worden), de retentietijd, de oppervlakte, de concentratie van de species (na calibratie).
Om de gegevens verbonden met de pieken te exporteren volstaat het rechts op de tabel te klikken en de optie “copy” te
kiezen en vervolgens een excel file te openen en de gegevens er in te plakken.
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
Procédure pour la création d’une courbe de calibration :
1. Ouvrir les chromatogrammes des étalons ainsi que la méthode « SOP04_As Inorganic_SolAjjmmdd.METH» qui
porte la date de la préparation des standards individuels concentrés.
2. Dans la partie « Calibration » de la méthode, modifier le nom du fichier de calibration (« Calibration Curve File »)
et le remplacer par la date d’analyse et une référence liée aux échantillons analysés. Choisir le dossier avec la
date du jour comme endroit de stockage.
3. Enregistrer le méthode dans le fichier qui porte la date du jour d’analyse avec un nouveau nom qui commence
par « REPR_SOP04_SolAjjmmdd_x_.METH » et qui porte également une référence liée aux
échantillons analysés (x) , puis fermer la méthode
4. puis fermer la méthode
5. Sélectionner un chromatogramme puis cliquer sur le bouton « reprocess » situé dans la barre de
menu puis sélectionner les options suivantes :
Pour l’onglet Parameters :
- choisir l’option « Method file » et indiquer la méthode « SOP04_As Inorganic_SolAjjmmdd_ref lié aux
échantillons.METH »
- « Sample Type » = « Standard »
- « Calibration mode » = « Clear old points » pour le premier étalon pour les autres choisir l’option « add »
- « Level » pour l’ordre du standard (1 pour l’étalon 0,5 ppb ; 2 pour le standard 5,0 ppb etc.).
Pour l’onglet Options :
- Ne cocher que l’option « Calibration »
6. Appuyer sur le bouton « reprocess »
7. Effectuer la même procédure pour les 4 chromatogrammes restant
Lorsque que la courbe de calibration est terminée, il faut encore l’associer avec les chromatogrammes des échantillons. Il
est possible d’effectuer cette manipulation en une fois pour tous les chromatogrammes. Pour cela on crée un fichier de
‘reprocessing list’ dans Galaxie (via ‘File’ – ‘new’ – ‘new reprocessing list’). On indique alors la méthode contenant la
courbe de calibration correspondant à l’analyse (REPR_SOP_04_SolA_jjmmdd_ref. lié aux échantillons .METH’) et puis les
chromatogrammes des échantillons à traiter. Comme pour la séquence d’analyse, il suffit de fermer tous les
chromatogrammes et d’appuyer sur la flèche verte située au-dessus de la liste pour démarrer le traitement des
chromatogrammes. Quand les calculs sont faits, les chromatogrammes des échantillons doivent être ouverts et
l’intégration doit être vérifiée et ajustée si nécessaire (p.ex. start et stop du pic, ligne de base).
8.6. Exportation des résultats vers un fichier Excel
Dans le programme Galaxie les chromatogrammes peuvent être présentés de trois manières possibles:
Le chromatogramme seul
Le chromatogramme accompagné d’un tableau qui regroupe les différents évènements d’intégration des pics et
de détection de la ligne de base que l’utilisateur peut ajouter en fonction des résultats de l’élution
Le chromatogramme et un tableau reprenant les informations pour chaque pic détecté dans le chromatogramme
parmi ces informations on retrouve le nom de l’espèce (si elle a pu être identifiée), son temps de rétention, son
aire, la concentration de l’espèce (après calibration).
Pour exporter les données liées aux pics, il suffit de faire un clic droit sur le tableau et de choisir l’option « copier» puis
d’ouvrir un fichier Excel et d’y « coller » les données.
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
8.7. Technische moeilijkheden en/of defecten
8.7.1. ICP-MS
Indien er een probleem optreedt, wordt dit onmiddellijk op het scherm ICP-MS EXPERT weergegeven onder de vorm van
een foutmelding die de details van de anomalie weergeeft en de mogelijkheden om het op te lossen.
8.7.2. HPLC
De hulp van Galaxie is minder duidelijk en in het merendeel van de gevallen betreft het een overschrijding van de
maximum druk waarna een melding verschijnt.
9.Specifieke voorschriften (veiligheid, bioveiligheid en milieu)
Bij de verschillende stappen in de voorbereiding van de stalen moeten de operatoren handschoenen dragen
(bescherming tegen zuren en vermijden van contaminaties).
Bij het gebruik van de microgolfoven moet de afzuiging van de trekkast in werking zijn (eventuele toxische dampen).
Voor het bereiden van de bufferoplossing (loopmiddel A), moeten een beschermingsmasker, een veiligheidsbril en
handschoenen verplicht gedragen worden. De samenstelling is irriterend bij contact, ingestie en inademing.
Geconcentreerd salpeterzuur kan ernstige brandwonden veroorzaken. Voorkom huidcontact en inademing van dampen.
Tijdens de metingen met de ICP: de afzuiging van de gassen moet aangekoppeld zijn (toxische dampen en koeling van
het systeem).
Hoge concentraties anorganisch As kunnen toxisch zijn en potentieel kankerverwekkend. Draag handschoenen bij de
prepartie en manipulatie van geconcentreerde standaarden (≥1000mg/L) of poeders.
10.Interne controle
Bij de aanvang van elke reeks van analysen, wordt een CRM die representatief is voor de te meten stalen (plantaardige
voedingsmatrices) 2 maal gemeten.
Om de stabiliteit van het meetsignaal van het apparaat te controleren wordt aan het begin en op het einde van de
analysereeks een onafhankelijke ijkstandaard (QC) gemeten. De QC aan het begin van de meetreeks mag maximum
5% afwijken ten opzichte van de 5 ppb standaard gebruikt voor de kalibratie. De QC op het einde van de meetreeks mag
maximum 15% afwijken ten opzicht van de initiële QC.
Wanneer een afwijking wordt vastgesteld tijdens een analysecyclus of wanneer de resultaten voor de CRM(s) buiten de
grenzen liggen die vastgelegd zijn in de file ‘Accept CRM’ of (zie ook de acceptatiecriteria in de PRO/5.5/01/DOC02),
dan worden de analyses hernomen na een nieuwe tuning en stabilisatie van het apparaat.
11.Rapportering
Het intern rapport wordt opgemaakt in Excel. De naam van de excel file heeft de vorm
Jaarjaarmaandmaanddagdag_Asi_accred_referentie i.v.m. stalen_DATA en wordt bewaard onder ‘71/ICP-MS
VARIAN/Inorganic As/jaar/.
Het intern rapport omvat:
-Excel Sheet ‘Cal’: de calibratiecurve van AsV
(in te voeren in excel via een ‘print screen’ van de calibratiefile),
-Excel Sheet ‘Standards’: de chromatogrammen en data van de standaarden gebruikt voor de calibratiecurve,
-Excel Sheet ‘Resolution’: Op basis van het chromatogram van de 5ppb ijkstandaard zal voor het piekenpaar AsV
-MMA
de piekresolutie berekend worden aan de hand van de formule Rs= 2(Tr2-Tr1)/W1+W2), met Tr2 en Tr1 de
retentietijden van de twee opeenvolgende pieken, en W2 en W1 de piekwijdte van de overeenkomstige pieken aan de
basis. Zoals beschreven in het validatiedossier is deze piekwijdte equivalent aan de piekwijdte bij 13.4% van de
piekhoogte. Zowel de retentietijden als de piekbreedte bij 13.4% van de piekhoogte worden in Galaxie weergegeven in
het ‘results’ scherm van een chromatogram. Het volstaat om dit results-scherm van de 5ppb ijkstandaard, via copy-paste,
in deze excel sheet te copiëren (inclusief het chromatogram) en vervolgens de nodige Rs berekening te maken.
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
8.7. Difficultés techniques et/ou pannes
8.7.1 ICP-MS
Si un problème survient, il est directement affiché sur l'écran ICP-MS_EXPERT sous forme d’un message d'erreur contenant
des détails sur l'anomalie identifiée et les solutions possibles.
8.7.2 HPLC
L’aide de Galaxie est moins explicite et dans la plupart des cas c’est essentiellement en cas de dépassement de la limite
de pression maximum qu’un message apparait.
9.Mesures spécifiques (sécurité, biosécurité et environnement)
Lors des étapes de préparation, les opérateurs doivent porter des gants (protection aux acides et minimisation des
contaminations).
Lors de l’utilisation du minéralisateur à micro-ondes la hotte d’aspiration doit être en fonctionnement (vapeurs toxiques
éventuelles).
L’acide nitrique concentré peut causer des brulures en cas de contact avec la peau. Eviter le contact direct avec la peau et
l’inhalation des vapeurs.
Lors de la préparation de la solution tampon (éluant A), le port d’un masque de protection et de lunette de sécurité est
obligatoire, ce composé est irritant par contact, ingestion et inhalation.
Lors des mesures en ICP-MS : l’évacuation des gaz doit être branchée.
Les concentrations élevées en arsenic inorganique peuvent être toxiques, carcinogènes. Le port de gants en nitrile est
donc obligatoire pour manipuler les standards concentrés (concentration ≥ 1000 ppm ou poudre).
10.Contrôle interne
Au début de chaque série d’analyses, un CRM considéré comme représentatif du reste des échantillons est mesuré en 2
répliques.
Pour assurer le contrôle de la stabilité de la réponse de l’appareillage, toute séquence analytique comprendra au début
et à la fin un passage d’une solution étalon (QC). Le QC au début du passage peut dévier de maximum 5% par rapport
à l’étalon de 5 ppb utilisé pour la calibration. Le QC à la fin du passage peut dévier de maximum 15 % par rapport au
QC initial.
En cas de dérive ou quand les résultats pour ce(s) CRM sont en dehors des limites fixées dans le fichier ‘Accept CRM’ (voir
également critères d’acceptation dans le PRO/5.5/01/DOC2), les mesures seront recommencées après un nouveau
tuning et stabilisation du système.
11.Rapport interne
Le rapport interne est fait en Excel. Le nom du fichier Excel est du type suivant ‘
Jaarjaarmaandmaanddagdag_Asi_accred_reference lié aux échantillons_DATA. et est sauvé sous ‘71/ICP-MS
VARIAN/inorganic As/année’
Le rapport interne inclut:
- Feuille Excel « Cal… » : les courbes de calibration d’AsV
mesurées (importées par une copie d’écran du fichier de
calibration)
-Feuille Excel ‘Standards’ : les chromatogrammes et données des standards utilisés pour la courbe de calibration
- Feuille Excel « Resolution » : à partir du chromatogramme de la solution étalon de 5 ppb, on calculera la résolution de
la paire de pics AsV
-MMA au moyen de la formule Rs = 2(Tr2 – Tr
1)/(W
1+W
2) où Tr
2 et Tr
1 sont les temps de rétention de
deux pics consécutifs, W2 et W
1 la largeur des pics à la base. Comme décrit dans le dossier de validation, la largeur d’un
pic, W, peut être estimée en mesurant la largeur du pic à une hauteur égale à 13,4% de la hauteur du pic. Tout comme
le temps de rétention, la largeur (à h = 13,4%) est donnée par Galaxie en cliquant sur le bouton ‘results’ des
chromatogrammes. La feuille resolution doit donc regrouper les éléments suivants : une copie du chromatogramme de la
solution étalon 5ppb, une copie du tableau des résultats et le calcul des différentes résolutions Rs par paire de pics.
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Titel/Titre : Bepaling van anorganisch arseen via HPLC-ICP-MS / Détermination de l’arsenic inorganique via HPLC-ICP-MS
-Excel Sheet ‘Results’: -minstens 1 chromatogram als voorbeeld voor elke staal, de CRM(s) en de procedure-blanco
-de concentratie AsV
in de procedure-blanco;
-de verdunningsfactoren van de stalen,
-de concentratie AsV
in de oplossing en in de matrix, zowel voor de stalen als voor de CRM(s),
-Excel Sheet ‘Summary’ (uit te printen voor de technisch verantwoordelijke):
-het dossiernummer,
-het staalnummer,
-de concentratie AsV
(en eventueel ook van andere aanwezige species) in de 2 replica’s van de CRMs en van de
stalen,
-de begin- en eindwaarden van de onafhankelijke ijkstandaard + het procentueel verschil tussen beide
-de berekende piekresolutie voor het piekenpaar MMA-AsV
.
Een pagina met de registratie van de technische parameters (SOP/TRA/ANA/04/DOC02 : Formulier voor de registratie
van de technische parameters zie template in bijlage 2) dient zowel in de labomap ‘Extracties’ te worden geplaatst als
bewaard te worden onder ‘71/ICP-MS VARIAN/Inorganic As/jaar/Extractie (technische parameters). De naam van deze
file heeft de vorm Jaarjaarmaandmaanddagdag_Asi_accred_referentie i.v.m. stalen_TP.
Wekelijks wordt een back-up van de in Galaxie gegenereerde files gemaakt op een externe harde schijf. Na het maken
van een back-up dient dit geregistreerd te worden op SOP/TRA/ANA/03/DOC06 (zie SOP/TRA/ANA/03).
12.Bijlagen
Bijlage 1: SOP/TRA/ANA/04/DOC01/V01 : Het opmaken van een nieuwe methode file voor de bepaling van
anorganisch As (Galaxie)
Bijlage 2: SOP/TRA/ANA/04/DOC02/V02 : Formulier voor de registratie van de