Post on 30-May-2020
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
Analysemethode
Méthode d’analyse
Bepaling van het aantal coliformen en E. coli in ijsblokjes (36
°C) met rapid E.coli 2 agar
I-MET 076
Techniek
Technique
Filtratie
Isolatie op een chromogeen medium
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
ijsblokjes
Datum laatste aanpassing /
Date du dernière adaption
18/11/2013
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
Overzicht van de prestatiekenmerken :
De herhaalbaarheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.25 log en voor E. coli 0.28 log.
De intralabreproduceerbaarheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.25 log en voor E. coli 0.26
log. Deze laatste is lager dan de herhaalbaarheid zodat de intralabreproduceerbaarheid wordt
gelijkgesteld aan 0.28 log voor E. coli.
De meetonzekerheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.18 log en voor E. coli 0.19 log.
De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180
De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria
hieronder aangegeven voldaan zijn:
Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten.
Behalen van een herhaalbaarheid van 0.50 log en intralabreproduceerbaarheid van 1 log
Inhoud:
Versie Herziening
door / datum
Reden Wijzigingen
1
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan – Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 1/2
VALIDATIEPLAN – PLAN DE VALIDATION
Analysemethode
Méthode d’analyse
Bepaling van het aantal coliformen en Escherichia coli in water (Rapid’ E.coli 2)
I-MET 076
AFNOR BRD 07/20-03/11
Techniek
Technique
Filtratie
Isoloatie op een chromogeen medium
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Ijsblokjes
Type validatie
Type de validation
Verificatie
Verantwoordelijke
(Naam en functie)
Responsable
(Nom et fonction)
Elly Harnie
Sectieverantwoordelijke biologische analyses
Opgesteld door
Rédaction par
Naam – Nom: Elly Harnie
Functie - Fonction: sectieverantwoordelijke
biologische analyses
Datum - Date: 1/7/2013
Handtekeningen - Signatures:
Goedgekeurd door Naam – Nom: Ronny Martens
Functie - Fonction: QAM
Datum - Date: 01/07/2013
Handtekeningen - Signatures:
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan – Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 2/2
Toepassingsgebied : ijsblokjes
Overschakeling van ISO naar rapid E. coli 2 agar als gevolg van teveel stoorflora op TTC (beslissing
clustervergadering 4/6/2013).
Testen:
- Analyse proefstalen parallel met ISO methode: minimum 20
- Analyse referentiemonster: minimum 4 x
- Deelnemen aan een ringtest
- Analyse besmette monsters: minimum 10 op een te verwachten niveau. Voor de bepaling van de
herhaalbaarheid worden hiervan minimum 6 analyses in duplo uitgevoerd.
De validatieparameters worden bepaald volgens het schema beschreven in LAB 00 P 507:
- Herhaalbaarheid: vooropgesteld criterium 0.22 log
- Intralabreproduceerbaarheid (meetonzekerheid): vooropgesteld criterium 0.18 log
- Relatieve juistheid: < 0.50 log (referentiemonster) of < 0.40 log (besmette monsters)
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 1/11
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
Analysemethode
Méthode d’analyse
Bepaling van het aantal coliformen en E. coli in ijsblokjes (36
°C) met rapid E.coli 2 agar
I-MET 076
Techniek
Technique
Filtratie
Isolatie op een chromogeen medium
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
ijsblokjes
Type validatie
Type de validation
Verificatie
Verantwoordelijke (Naam
en functie)
Responsable
(Nom et fonction)
Elly Harnie
Sectieverantwoordelijke biologische analyses
Opgesteld door
Rédaction par
Naam – Nom: Elly Harnie
Functie - Fonction: sectieverantwoordelijke
biologische analyses
Datum - Date: 14/11/2013
Handtekeningen - Signatures: get.
Medewerkers
(Naam en functie)
Collaborateurs
(Nom et fonction)
Analisten microbiologie
Liesbeth Stas, Stefanie Vanbiesbrouck, Kristof De Greif, Mieke De Mits, Chantal Focquet,
Conny De Schepper, Sandra De Cocker, Hilde Van Remoortel, Anja Van Beversluys
Periode van validatie
Période de validation
Start - Début: 01/07/2013
Einde - Fin:7/11/2013
Methode goedgekeurd en
geschikt bevonden door
Méthode approuvée et jugé
convenable pour la routine
par
Naam – Nom: Ronny Martens
Functie - Fonction: QAM
Datum - Date: 18/11/2013
Handtekeningen - Signatures: get.
Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure
LAB 00 P 180.
Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB
P 00 180.
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 2/11
Samenvatting validatiegegevens – Résumé des données de validation
Overzicht matrices / validatieparameters / criteria
Matrix : water
Validatieparameters :
- Herhaalbaarheid
- Intralabreproduceerbaarheid / meetonzekerheid
- Relatieve juistheid
Criteria:
De bekomen resultaten voor proefmonsters en besmette monsters werden getoetst aan volgende
criteria (= criteria voor I-MET 043 bepaling E. coli en coliformen met TTC agar):
- Criterium voor de herhaalbaarheid: 0.22 log
- Criterium voor de intralabreproduceerbaarheid: 0.47 log
- Criterium voor de relatieve juistheid: 0.50 log
Validatierapport
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION ................................................................................. 1
BEPALING VAN HET AANTAL COLIFORMEN EN E. COLI IN IJSBLOKJES (36 °C) MET RAPID E.COLI 2 AGAR .................. 1
I-MET 076 ....................................................................................................................................................... 1
SAMENVATTING VALIDATIEGEGEVENS – RÉSUMÉ DES DONNÉES DE VALIDATION........................ 2
1 INLEIDING ................................................................................................................................................ 3
2 PROEFMONSTERS ................................................................................................................................... 3
3 BESMETTE MONSTERS ........................................................................................................................... 4
4 JUISTHEID ................................................................................................................................................ 8
5 RINGTEST ................................................................................................................................................. 9
6 BESLUIT .................................................................................................................................................... 9
7 FOTO’S VAN DE METHODE .................................................................................................................. 10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 3/11
1 Inleiding
In dit rapport worden de te testen beschreven uitgevoerd voor de implementatie van Rapid E. coli 2 agar
voor het bepalen van E. coli en coliformen in ijsblokjes.
Er werd water besmet met LGC referentiemateriaal.
2 Proefmonsters
In eerste instantie werden proefmonsters parallel met rapid E. coli 2 agar en TTC agar uitgevoerd. De
resultaten staan vermeld in onderstaande tabel.
De eerste resultaten werden bekomen tijdens een voorstudie.
Datum analist staalnummer TTC rapid E. coli
Eenheid
15/01/2013 AVB 13030888 < 1 < 1 cfu/100ml
13030943 < 1 < 1 cfu/100ml
13030946 < 1 < 1 cfu/100ml
13030946 < 1 < 1 cfu/100ml
13030951 < 1 < 1 cfu/100ml
17/01/2013 SDC 13031571 overgroei < 1 cfu/100ml
22/01/2013 SV 13040553 < 1 < 1 cfu/100ml
13040551 < 1 < 1 cfu/100ml
13040527 < 1 < 1 cfu/100ml
13040501 overgroei < 1 cfu/100ml
13040195 < 1 < 1 cfu/100ml
13040194 < 1 < 1 cfu/100ml
29/01/2013 CF 13080151 < 1 < 1 cfu/100ml
13050225 < 1 < 1 cfu/100ml
13050227 overgroei < 1 cfu/100ml
13050289 < 1 < 1 cfu/100ml
13050373 < 1 < 1 cfu/100ml
13050411 < 1 < 1 cfu/100ml
referentie colif 12 4 cfu/100ml
30/01/2013 AVB 13050029 < 1 < 1 cfu/100ml
13050594 < 1 < 1 cfu/100ml
23/01/2013 MDM 13040754 < 1 < 1 cfu/100ml
4/02/2013 CF referentie QC 39 29 cfu/100ml
14/02/2013 MDM 13071085 < 1 < 1 cfu/100ml
3/04/2013 CF 13140653 overgroei <1 cfu/100ml
28/08/2013 SV 13350612 < 1 < 1 cfu/100ml
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 4/11
11/09/2013 LS 13370911 < 1 < 1 cfu/100ml
13370958 < 1 < 1 cfu/250ml
13370967 < 1 < 1 cfu/250ml
05/09/2013 SV 13361132 < 1 < 1 cfu/250ml
Algemeen komen de resultaten overeen; Op rapid E. coli 2 agar wordt minder stoorflora aangetroffen.
3 Besmette monsters
Werkwijze:
- 4 referentiemonsters (RM 30; 05-0082-06246; LGC standaard) oplossen in 400 ml steriel water en
mengen
- Per persoon tweemaal 100 ml filtreren
- De filter incuberen op rapid E. coli 2 agar (24 h bij 37 °C)
Schema:
Monster
Analist 1: Analist
in duplo analyseren in duplo analyseren
conditie A conditie B
analyse blanco monsters
Belangrijk: conditie A en B moeten verschillen
- Pipetten
- Broedstoven
- Incubatietijd (conditie A: ondergrens; conditie B: bovengrens)
Resultaten:
Een samenvatting voor E. coli wordt in onderstaande tabel gegeven.
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 5/11
Datum Analist Cfu/100 ml Cfu/100 ml
8/07/2013 Liesbeth 12 13
Hilde 16 10
9/07/2013 Stefanie 10 7
Anja 9 10
6/08/2013 Stefanie 16 18
Liesbeth 14 10
19/08/2013 Stefanie 12 10
Sandra 8 10
20/08/2013 Liesbeth 7 9
Anja 7 7
5/09/2013 Chantal 16 10
Kristof 8 7
02/10/2013 Liesbeth 10 12
Stefanie 7 8
1/10/2013 Anja 8 17
8/10/2013 Stefanie 28 40
15/10/2013 Mieke 40 39
Mieke 41 40
15/10/2013 Sandra 42 43
Anja 35 49
21/10/2013 Conny 7 17
24 24
21/10/2013 Chantal 17 19
18 23
29/10/2013 Stefanie 13 8
Chantal 12 12
29/10/2013 Liesbeth 11 7
Anja 8 8
05/11/2013 Hilde 8
Conny 7
05/11/2013 Mieke 9
Sandra 9
Een samenvatting voor de coliformen wordt in onderstaande tabel gegeven.
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 6/11
Datum Analist Cfu/100 ml Cfu/100 ml
8/07/2013 Liesbeth 12 13
Hilde 16 10
9/07/2013 Stefanie 10 7
Anja 9 10
6/08/2013 Stefanie 16 18
Liesbeth 14 10
19/08/2013 Stefanie 12 10
Sandra 8 10
20/08/2013 Liesbeth 7 9
Anja 7 7
5/09/2013 Chantal 16 10
Kristof 8 7
5/09/2013 Chantal 14 11
Kristof 9 7
02/10/2013 Liesbeth 10 12
Stefanie 7 8
1/10/2013 Anja 8 17
8/10/2013 Stefanie 38 53
15/10/2013 Mieke 54 44
Mieke 48 48
15/10/2013 Sandra 56 54
Anja 43 55
21/10/2013 Conny 7 17
20 21
24 24
21/10/2013 Chantal 17 19
21 21
18 23
29/10/2013 Stefanie 20 17
Chantal 18 18
29/10/2013 Liesbeth 14 13
Anja 15 12
5/11/2013 Hilde 16
Conny 12
5/11/2013 Mieke 16
Sandra 19
Kleurcode:
Geel: enkel E. coli aanwezig
Groen: naast E. coli ook andere coliform aanwezig
Oranje: niet-E.coli coliform aanwezig
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 7/11
Bespreking proeven:
In de proef op 05/09/2013 werd het schema aangepast: er werden 5 pilletjes opgelost in 400 ml water in
plaats van 4. De besmetting werd uitgevoerd met RM 30 (E. coli) en met RM 34 (andere coliform). Tijdens de
testen was het duidelijk dat de pilletjes niet goed oplossen. Er werd hiervoor contact opgenomen met de
firma. Volgens hen moeten de pilletjes een tijdje bij bijvoorbeeld 37 °C staan vooraleer ze te analyseren.
In een volgende proef (02/10/2013) werd het water met opgeloste pilletjes gedurende 2 h bij 37 °C gezet
(resusciteren). In deze proef werden opnieuw lage aantallen bekomen.
Op 01/10/2013 werd een proef uitgevoerd volgens een ander protocol: de besmetting van water werd
uitgevoerd met een quanticult (Oxoid) van E. coli. De aantallen waren ook lager dan verwacht.
In de reeksen van 8/10/2013 en 15/10/2013 werden testen uitgevoerd op LGC ringtestmateriaal (2 x 100 ml
filtreren per persoon van het opgeloste ringstaal). Hier waren de aantallen opmerkelijk hoger.
In de reeks van 21/10/2013 werd het laatste protocol met de RM besmetting herhaald. Het water werd nu 3 h
bij 37 °C gezet vooraleer te analyseren.
Ook werd het volgende uitgeprobeerd: Los 600 µl van een opgeloste quanticult op in 400 ml water en meng
goed ; Analyseer per persoon tweemaal 100 ml (rapid E.coli agar) (laatste resultaten van Conny en Chantal
op 21/10/2013).
In de reeks van 29/10/2013 werd volgende protocol gebruikt: Los 4 referentiemonsters RM 30 + 2
referentiemonsters RM 34 op in 400 ml steriel water en meng; Incubeer dit water 3 h bij 36 °C ; Analyseer
per persoon tweemaal 100 ml
In de reeks van 5/11/2013 werd volgende protocol gebruikt: Los 5 referentiemonsters RM 30 + 2
referentiemonsters RM 34 op in 400 ml steriel water en meng; Incubeer dit water 3 h bij 36 °C ; Analyseer
per persoon 100 ml
Herhaalbaarheid
De herhaalbaarheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.25 log en voor E. coli 0.28 log. Dit ligt in de
lijn van de herhaalbaarheid bekomen door de leverancier namelijk 0.25 log.
Dit ligt ook in de lijn van de herhaalbaarheid bekomen op TTC agar (0.22 log) (ISO).
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 8/11
Meetonzekerheid en intralabreproduceerbaarheid
De intralabreproduceerbaarheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.25 log en voor E. coli 0.26 log.
Deze laatste is lager dan de herhaalbaarheid zodat de intralabreproduceerbaarheid wordt gelijkgesteld aan
0.28 log voor E. coli.
De meetonzekerheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.18 log en voor E. coli 0.19 log.
Deze liggen in de lijn van de prestatiekenmerken bekomem met TTC ager (meetonzekerheid van 0.13 log).
4 Juistheid
Bij de ringtest van LGC werd de juistheid van de methode vergeleken met TTC tergitol agar (zie hieronder).
Het logverschil met TTC en met de referentiewaarde van de organisator was aanvaardbaar (< 0.50 log).
Overzicht coliformen (referentiewaarde: 44 cfu/ml):
Datum Analist
cfu/100 ml
log cfu/100ml
Referentie LOGVERSCHIL
Rapid E. coli TTC Rapid E. coli TTC LGC Rapid TTC
8/10/2013 SV 38 46 1,58 1,66 1,64 -0,06 0,02
53 36 1,72 1,56 1,64 0,08 -0,09
15/10/2013 MDM 54 51 1,73 1,71 1,64 0,09 0,06
44 51 1,64 1,71 1,64 0,00 0,06
MDM 48 51 1,68 1,71 1,64 0,04 0,06
48 51 1,68 1,71 1,64 0,04 0,06
AVB 43 44 1,63 1,64 1,64 -0,01 0,00
55 44 1,74 1,64 1,64 0,10 0,00
SDC 56 44 1,75 1,64 1,64 0,10 0,00
54 44 1,73 1,64 1,64 0,09 0,00
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 9/11
Overzicht E. coli (referentiewaarde: 33 cfu/ml):
Datum Analist cfu/100 ml
log cfu/100ml
Referentie
LOGVERSCHIL
Rapid E. coli TTC Rapid E. coli TTC LGC Rapid TTC
8/10/2013 SV 28 46 1,45 1,66 1,52 -0,07 0,14
40 36 1,60 1,56 1,52 0,08 0,04
15/10/2013 MDM 40 51 1,60 1,71 1,52 0,08 0,19
39 51 1,59 1,71 1,52 0,07 0,19
MDM 41 51 1,61 1,71 1,52 0,09 0,19
40 51 1,60 1,71 1,52 0,08 0,19
AVB 35 44 1,54 1,64 1,52 0,03 0,12
49 44 1,69 1,64 1,52 0,17 0,12
SDC 42 44 1,62 1,64 1,52 0,10 0,12
43 44 1,63 1,64 1,52 0,11 0,12
Het referentiemonster van LGC werd getest maar de waarden lagen te laag. Volgens de leverancier groeien
bepaalde referentiemonsters niet goed op rapid E. coli 2 agar (selectief medium).
5 Ringtest
Op 7/10/2013 werd deelgenomen aan een ringtest van LGC. De resultaten werden op rapid E. coli 2 werden
vergeleken met TTC tergitol agar (zie punt 4.). De resultaten kwamen overeen.
Er werd voor E. coli een z-score van 0.24 bekomen en voor coliformen een z-score van 0.23.
6 Besluit
De herhaalbaarheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.25 log en voor E. coli 0.28 log.
De intralabreproduceerbaarheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.25 log en voor E. coli 0.26 log.
Deze laatste is lager dan de herhaalbaarheid zodat de intralabreproduceerbaarheid wordt gelijkgesteld aan
0.28 log voor E. coli.
De meetonzekerheid van de methode bedraagt voor coliformen 0.18 log en voor E. coli 0.19 log.
De bekomen prestatiekenmerken liggen in de lijn van de prestatiekenmerken bekomem met TTC ager (ISO).
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 10/11
7 Foto’s van de methode
Hieronder zijn enkele foto’s aanwezig van de methode.
Filtratie van het staal
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 11/11
Rapid E. coli 2 agar met typische kolonies