VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE

LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

Analysemethode

Méthode d’analyse

Bepaling van het aantal gisten en schimmels (25°C)

(I-MET 048)

Techniek

Technique

Aanmaken verdunningsreeks - uitplaten – aflezen platen

ISO 21527-1 en 2

Matrix / matrixgroep

Matrice / Groupe de

matrices

Voedingswaren

Datum laatste aanpassing /

Date du dernière adaption

12/12/2012



Overzicht van de prestatiekenmerken :

Herhaalbaarheid Intralab-

reproduceerbaarheid

Meetonzekerheid Relatieve juistheid

Categorie 2 DRBC: 0.26 log DRBC: 0.37 DRBC: 0.26 log DRBC: < I 0.35 log I

DG 18: 0.30 log DG 18: 0.41 log DG 18: 0.30 log DG 18: < I 0.35 log I

Categorie 3 DRBC: 0.19 log DRBC: 0.45 log DRBC: 0.32 log DRBC: < I 0.40 log I


De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180

De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn voor de betreffende matrices/parameters:

Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten.

Behalen van een herhaalbaarheid van 0.50 log en intralabreproduceerbaarheid van 1 log.

Historiek validatiedossier:

Versie Herziening

door / datum

Reden Wijzigingen

1 EH/ 12-12 Aanpassing dossier 2009, 2010 naar

de nieuwe template en procedure

P180

Samenvoegen dossier en

aanvullen met extra

gegevens en foto’s



LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 1/16

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

Analysemethode

Méthode d’analyse

Bepaling van het aantal gisten en schimmels (25°C)

(I-MET 048)

Techniek

Technique

Aanmaken verdunningsreeks - uitplaten – aflezen platen

ISO 21527-1 en 2

Matrix / matrixgroep

Matrice / Groupe de

matrices

Categorie 2 en 3 (volgens ISO 19036)

Type validatie

Type de validation

Verificatie

Verantwoordelijke (Naam

en functie)

Responsable

(Nom et fonction)

Elly Harnie

Sectieverantwoordelijke biologische analyses

Opgesteld door

Rédaction par

Naam – Nom: Elly Harnie

Functie - Fonction:

Sectieverantwoordelijke biologische

analyses

Datum - Date: 05/12/2012

Handtekeningen - Signatures: get.

Medewerkers

(Naam en functie)

Collaborateurs

(Nom et fonction)

Analisten microbiologie

Liesbeth Stas, Kristof De Greif, Sandra De Cocker, Anja Van Beversluys, Stefanie

Vanbiesbrouck, Conny De Schepper, Hilde Van Remoortel, Chantal Focquet, Mieke De

Mits

Periode van validatie

Période de validation

Start - Début:

Einde - Fin:

Dit rapport is een herwerking van het originele rapport, naar aanleiding van de

nieuwe template. De oorspronkelijke validatie werd uitgevoerd in 2009, 2010.

Methode goedgekeurd en

geschikt bevonden door

Méthode approuvée et jugé

convenable pour la routine

par

Naam – Nom: Ronny Martens

Functie - Fonction: QAM

Datum - Date: 06/12/2012

Handtekeningen - Signatures: get.

Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure

LAB 00 P 180.

Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB

P 00 180.




Samenvatting validatiegegevens – Résumé des données de validation

Overzicht matrices / validatieparameters / criteria

Matrices : (volgens ISO 19036)

- categorie 2: gemengde vaste stoffen (bijvoorbeeld paté)

- categorie 3: kleine (of zeer kleine) vaste stoffen (bijvoorbeeld versneden groenten)

Validatieparameters :

- Herhaalbaarheid

- Intralabreproduceerbaarheid / meetonzekerheid

- Relatieve juistheid

Criteria:

De bekomen resultaten voor proefmonsters en besmette monsters werden getoetst aan volgende

criteria (= criteria voor andere bepalingen binnen het laboratorium):

- Criterium voor de herhaalbaarheid: 0.22 log

- Criterium voor de intralabreproduceerbaarheid: 0.47 log

- Criterium voor de relatieve juistheid: 0.35 log

De bekomen resultaten voor het referentiemonster werden getoetst aan volgende criteria (= criteria

voor andere bepalingen binnen het laboratorium):

- Criterium voor de herhaalbaarheid is 0.22 log

- Criterium voor de relatieve juistheid is 0.20 log




VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION ................................................................................. 1

BEPALING VAN HET AANTAL GISTEN EN SCHIMMELS (25°C) ................................................................ 1

(I-MET 048) ....................................................................................................................................................... 1

SAMENVATTING VALIDATIEGEGEVENS – RÉSUMÉ DES DONNÉES DE VALIDATION........................ 2

1 INLEIDING ................................................................................................................................................ 4

2 BESMETTE MONSTERS CATEGORIE 2 ................................................................................................. 4

2.1 WERKWIJZE ............................................................................................................................................ 4

2.2 RESULTATEN CATEGORIE 2 ........................................................................................................................ 5

2.2.1 Resultaten categorie 2 DRBC .......................................................................................................... 5

2.2.2 Resultaten categorie 2 DG18 ........................................................................................................... 7

3 BESMETTE MONSTERS CATEGORIE 3 ............................................................................................... 10

3.1 WERKWIJZE .......................................................................................................................................... 10

3.2 RESULTATEN CATEGORIE 3 ...................................................................................................................... 10

3.2.1 Resultaten categorie 3 DRBC ........................................................................................................ 10

3.2.2 Resultaten categorie 3 DG 18 ........................................................................................................ 12

4 REFERENTIEMONSTER ........................................................................................................................ 13

5 RINGTESTEN .......................................................................................................................................... 14

6 BESLUIT VALIDATIEPARAMETERS ................................................................................................... 14

7 FOTO’S VAN DE METHODE .................................................................................................................. 15




Overzicht validatietesten

1 Inleiding

Dit dossier bevat een herwerking van het oorspronkelijke validatiedossier van de bepaling van gisten en

schimmels volgens ISO 21527-1 en 2, aangepast volgens de nieuwe validatieprocedure LAB 00 P 180.

De oorspronkelijke validatie werd uitgevoerd in 2009, 2010; voorheen werd in het labo de ISO methode 7954

(YGC-agar) gebruikt.

Volgens ISO 21527-1 en 2 wordt afhankelijk van de wateractiviteit (aw) van het product een verschillende

bodem gebruikt: indien de aw van het monster groter is dan 0.95 zal er gewerkt worden met Dichloraan Rose

Bengaal Chloramphenicol agar (DRBC). Indien de aw kleiner is dan of gelijk aan 0.95 wordt Dichloraan18%

glycerol agar (DG18) gebruikt. In dit medium werd 18% glycerol toegevoegd om de wateractiviteit van het

medium te verlagen.

In de validatieproeven werden beide media getest. Voor de bepaling van de aw wordt verwezen naar het

desbetreffende validatiedossier.

De validatieparameters werden bepaald aan de hand van besmette monsters. Het referentiemonster werd

getest alsook werd deelgenomen aan ringtesten.

2 Besmette monsters categorie 2

De validatieparameters werden bepaald aan de hand van besmette monsters.

2.1 Werkwijze

Besmettingsoplossing:

- Een öse van één gistcultuur en een öse van één schimmelcultuur (LMG stammen op plaat)

overbrengen in 10 ml BHI

- BHI gedurende 1 dag incuberen bij 25°C

- Aanmaken van de verdunningsreeks

- Uitplaten van de verdunningen 10-4

, 10-5

, 10-6

, 10-7

(0.1 ml / verdunning) op DRBC/DG18

- Incubatie zoals voorgeschreven in de I-MET

Besmetten van monsters:

- Weeg 10 g deelmonster van het proefmonster af in een Stomacherzak




- Voeg 300 µl van verdunning 10-1

(T) van de besmettingsoplossing toe

- Voeg 90 ml peptoonwater toe = 10-1

= T

- Homogeniseer

- Maak de verdere decimale verdunningsreeks aan en plaat uit (10-1

(T), 10-2

(H) en 10-3

(D); telkens

0.1 ml)

- Incubatie zoals voorgeschreven in de I-MET

Proefopstelling (cfr. ISO 19036):

Monster

Analist 1: Analist 2:

in duplo besmetten + analyseren in duplo besmetten + analyseren

conditie A conditie B

analyse blanco monsters analyse blanco monsters

tellen opkweek

Conditie A en B moeten verschillen in het gebruik van:

- balans en stomacher

- dilucupshaker en pipetten

- broedstoven

- incubatietijd (conditie A: ondergrens; conditie B: bovengrens)

Deze verschillende condities werden genoteerd in het analyseboekje.

2.2 Resultaten categorie 2

2.2.1 Resultaten categorie 2 DRBC

De gegevens voor de herhaalbaarheid (DRBC) zijn aanwezig in onderstaande tabel.

De herhaalbaarheid bedraagt 0.26 log en ligt in de lijn van de vooropgestelde waarde van 0.22 log.




Datum Monster Analist Resultaat 1

cfu/g Resultaat 2

cfu/g verschil

LOG

24/11/2009 Paté CDS 11000 14000 -0.10 MDM 9400 13000 -0.14

24/11/2009 Vleessalade CDS 16000 20000 -0.10 MDM 18000 18000 0

15/01/2010 Paté AVB 700 1100 -0.20 SDC 1500 2000 -0.12

15/01/2010 Vleessalade AVB 900 1100 -0.09 SDC 1500 2000 -0.12

29/01/2010 Paté LS 18000 15000 0.08 MDM 25000 12000 0.32

29/01/2010 Vleessalade LS 23000 30000 -0.12 MDM 30000 20000 0.18

5/02/2010 Paté KDG 9900 11000 -0.05 HVR 9500 9400 0.01

5/02/2010 Vleessalade KDG 10000 11000 -0.04 HVR 10000 9000 0.05

In onderstaande tabel staan de resultaten voor de bepaling van de meetonzekerheid op DRBC. De

intralabreproduceerbaarheid bedraagt 0.37 log en voldoet daarmee aan het vooropgestelde criterium van

0.47 log.

De meetonzekerheid bedraagt 0.26 log.

Resultaat A (kve/g of kve/ml)

Resultaat B

(kve/g of kve/ml)

Datum Staal

nummer

Matrix Analisten

11000 9400 24/11/2009 1 paté CDS/MDM

16000 18000 24/11/2009 2 vleessalade CDS/MDM

1100 1200 15/01/2010 3 paté AVB/SDC

1100 2000 15/01/2010 4 vleessalade AVB/SDC

18000 25000 29/01/2010 5 paté LS/MDM

23000 30000 29/01/2010 6 vleessalade LS/MDM

9900 9500 5/02/2010 7 paté KDG/HVR

10000 10000 5/02/2010 8 vleessalade KDG/HVR

1300 1100 7/09/2010 9 filet américain AVB/CF


Voor bovenstaande gegevens werd de relatieve juistheid (d) berekend. Deze wordt samengevat in

onderstaande tabel.

De blanco resultaten van de niet-besmette monsters zijn in de tweede tabel aanwezig.

De relatieve juistheid is kleiner dan het vooropgestelde criterium van ± 0.35 log.




Datum Monster Aard cfu / g log d (log)

24/11/2009 1 paté 11000 4.04 0.06

14000 4.15 -0.04

9400 3.97 0.13

13000 4.11 -0.01

24/11/2009 2 vleessalade 13200 4.12 -0.02

17200 4.24 -0.13

15200 4.18 -0.08

15200 4.18 -0.08

29/01/2010 3 paté 18000 4.26 -0.08

15000 4.18 0.00

25000 4.40 -0.22

12000 4.08 0.10

29/01/2010 4 vleessalade 23000 4.36 -0.19

30000 4.48 -0.30

30000 4.48 -0.30

20000 4.30 -0.12

5/02/2010 5 paté 9900 4.00 -0.09

11000 4.04 -0.13

9500 3.98 -0.07

9400 3.97 -0.06

5/02/2010 6 vleessalade 9900 4.00 -0.09

10900 4.04 -0.13

9900 4.00 -0.09

8900 3.95 -0.04

a, b = duplo's

Blanco Analist cfu / g

1 CDS < 100 2 CDS 2800 3 LS < 100 4 LS < 100 5 HVR < 100 6 HVR 100

2.2.2 Resultaten categorie 2 DG18

De gegevens voor de herhaalbaarheid (DG18) zijn aanwezig in onderstaande tabel.

De herhaalbaarheid bedraagt 0.30 log en ligt hoger dan de vooropgestelde waarde van 0.22 log.





cfu/g Resultaat 2

cfu/g verschil LOG

24/11/2009 Paté CDS 14000 14000 0

MDM 16000 16000 0

24/11/2009 Vleessalade CDS 16000 16000 0

MDM 17000 16000 0.03

15/01/2010 Paté AVB 910 600 0.18

SDC 500 1000 -0.30

15/01/2010 Vleessalade AVB 1700 1700 0

SDC 600 1400 -0.37

29/01/2010 Paté LS 20000 18000 0.05

MDM 15000 10000 0.18

29/01/2010 Vleessalade LS 18000 24000 -0.12

MDM 22000 22000 0

5/02/2010 Paté KDG 7400 6700 0.04

HVR 7500 5500 0.13

5/02/2010 Vleessalade KDG 8700 9400 -0.03

HVR 12000 8100 0.17

In onderstaande tabel staan de resultaten beschikbaar voor de bepaling van de meetonzekerheid op DG 18.

De intralabreproduceerbaarheid bedraagt 0.41 log en voldoet daarmee aan het vooropgestelde criterium

van 0.47 log.



Resultaat B

(kve/g of kve/ml)

Datum

Staal nummer

Matrix Analisten

14000 16000 24/11/2009 1 paté CDS/MDM

16000 17000 24/11/2009 2 vleessalade CDS/MDM

600 1000 15/01/2010 3 paté AVB/SDC

1100 1400 15/01/2010 4 vleessalade AVB/SDC

20000 15000 29/01/2010 5 paté LS/MDM

18000 22000 29/01/2010 6 vleessalade LS/MDM

7400 7500 5/02/2010 7 paté KDG/HVR

8700 12000 5/02/2010 8 vleessalade KDG/HVR







onderstaande tabel.


De relatieve juistheid is meestal kleiner dan het vooropgestelde criterium van ± 0.35 log.


24/11/2009 1 paté 14000 4.15 0.07 14000 4.15 0.07

16000 4.20 0.01 16000 4.20 0.01

24/11/2009 2 vleessalade 14700 4.17 0.05 14700 4.17 0.05

15700 4.20 0.02 14700 4.17 0.05

15/01/2010 3 paté 910 2.96 0.00 600 2.78 0.18

500 2.70 0.26 1000 3.00 -0.05

29/01/2010 4 paté 20000 4.30 -0.09

18000 4.26 -0.05

15000 4.18 0.03 10000 4.00 0.21

29/01/2010 5 vleessalade 18000 4.26 -0.05 24000 4.38 -0.17

22000 4.34 -0.13 22000 4.34 -0.13

5/02/2010 6 paté 7400 3.87 -0.35 6700 3.83 -0.31

7500 3.88 -0.36 5500 3.74 -0.22

a, b = duplo's


1 CDS < 100

2 CDS 1300

3 AVB < 100

4

LS < 100

5 LS < 100

6 HVR < 100




3 Besmette monsters categorie 3

3.1 Werkwijze

Zie 2.1

3.2 Resultaten categorie 3

3.2.1 Resultaten categorie 3 DRBC

De gegevens voor de herhaalbaarheid (DRBC) zijn aanwezig in onderstaande tabel.

De herhaalbaarheid bedraagt 0.19 log en is vergelijkbaar met het vooropgestelde criterium van 0.22 log.


cfu/g Resultaat 2

cfu/g verschil

LOG

24/11/2009 1 CDS 17000 15000 0.05

MDM 19000 21000 -0.04

29/01/2010 2 LS 28000 24000 0.07

MDM 32000 20000 0.20

5/02/2010 3 KDG 11000 10000 0.04

HVR 11000 10000 0.04

In onderstaande tabel staan de resultaten voor de bepaling van de meetonzekerheid op DRBC. De


0.47 log.






Resultaat B

(kve/g of kve/ml)

Datum

staal nummer

Matrix Analisten

17000 19000 24/11/2009 1 geraspte groenten CDS/MDM

7100 1400 15/01/2010 2 geraspte groenten AVB/SDC

28000 32000 29/01/2010 3 geraspte groenten LS/MDM

11000 11000 5/02/2010 4 geraspte groenten KDG/HVR

36000 37000 7/09/2010 5 versneden groenten AVB/CF


13000 15000 30/11/2010 7 versneden wortelen AVB/KDG

12000 13000 30/11/2010 8 versneden wortelen AVB/KDG

910 800 30/11/2010 9 10480627 AVB/KDG

55000 57000 23/11/2010 10 versneden wortelen AVB/LS


onderstaande tabel.

De blanco resultaten van de niet-besmette monsters zijn in de tweede tabel aanwezig. De relatieve juistheid

is kleiner dan het vooropgestelde criterium van ± 0.35 log.


24/11/2009 1 versneden CDS 8900 0.16

wortelen 6900 0.27

MDM 10900 0.07

12900 -0.01

29/01/2010 2 versneden LS 24900 -0.22

wortelen 20900 -0.14

MDM 28900 -0.28

16900 -0.05

5/02/2010 3 versneden KDG 11000 -0.13


HVR 11000 -0.13

10000 -0.09

a, b = duplo's


1 MDM 8100

2 MDM 3100

3 KDG < 100




3.2.2 Resultaten categorie 3 DG 18

De gegevens voor de herhaalbaarheid (DG18) zijn aanwezig in onderstaande tabel.

De herhaalbaarheid bedraagt 0.17 log en voldoet aan het vooropgestelde criterium van 0.22 log.


cfu/g Resultaat 2

cfu/g verschil LOG

24/11/2009 1 CDS 14000 13000 0.03

MDM 14000 12000 0.07

15/01/2010 2 AVB 900 800 0.05

SDC 500 910 -0.26

29/01/2010 3 LS 24000 23000 0.02

MDM 24000 19000 0.10

5/02/2010 4 KDG 8700 7700 0.05

HVR 6600 6600 0

In onderstaande tabel staan de resultaten voor de bepaling van de meetonzekerheid op DG18. De


0.47 log.



Resultaat B

(kve/g of kve/ml)

Datum

staal nummer

Matrix Analisten

14000 14000 24/11/2009 1 geraspte groenten CDS/MDM

800 910 15/01/2010 2 geraspte groenten AVB/SDC

24000 24000 29/01/2010 3 geraspte groenten LS/MDM

8700 6600 5/02/2010 4 geraspte groenten KDG/HVR

18000 26000 1/09/2009 5 geraspte groenten KDG/SV

23000 18000 1/09/2009 6 geraspte groenten KDG/SV

13000 14000 8/09/2009 7 geraspte groenten KDG/AVB

5500 4100 7/09/2010 8 versneden groenten KDG/AVB


1400 1800 30/11/2010 10 10480627 AVB/KDG

Voor bovenstaande gegevens werd de relatieve juistheid (d) op DG18 berekend. Deze wordt samengevat

in onderstaande tabel.


De relatieve juistheid is meestal kleiner dan het vooropgestelde criterium van ± 0.35 log.





24/11/2010 1 versneden CDS 14000 0.07

wortelen 13000 0.10

MDM 14000 0.07

12000 0.14

15/01/2010 2 versneden AVB 900 0.00

wortelen 800 0.05

SDC 500 0.26

910 0.00

29/01/2010 3 versneden LS 24000 -0.17


MDM 24000 -0.17

19000 -0.07

5/02/2010 4 versneden KDG 8700 -0.42

wortelen 7700 -0.37

HVR 6600 -0.30

6600 -0.30

a, b = duplo's


1 MDM < 100

2 AVB < 100

3 MDM < 100

4 KDG < 100

4 Referentiemonster

Gedurende de validatietesten werd het referentiemonster van Senate meegenomen op zowel DRBC als op

DG18-agar. Het monster werd telkens tweemaal uitgeplaat.

De resultaten (cfu/g) zijn aanwezig in onderstaande tabel.

Datum Analist DRBC 1 DRBC 2 DG18 1 DG18 2

01/09/2009 LS 13000 21000 18000 16000

01/09/2009 SV 18000 22000 21000 22000

08/09/2009 AVB 21000 17000 22000 20000

Deze waarden voldoen aan het criterium voor de herhaalbaarheid, namelijk 0.22 log. En voldoen ook aan

het criterium van het certificaat (14400 cfu/g).




In januari 2010 werd het referentiemonster viermaal geanalyseerd (cfu/g). Het gemiddelde logverschil was

kleiner dan 0.20 log.

Analist DRBC 1 DRBC 2 Logverschil

KDG 68000 69000 0.09

LS 56000 60000 0.01

AVB 80000 60000 0.09

HVR 50000 90000 0.08

5 Ringtesten

Op 07/12/2009 werd door SV een ringanalyse uitgevoerd voor gisten en schimmels bij QM en Senate. Het

staal werd in duplo geanalyseerd op 3 bodems: DRBC, DG18 en YGC.

De resultaten (cfu/g) worden samengevat in onderstaande tabel.

Organisator Monsternummer DRBC DG18 YGC

QM 09500068 600 GA 1100 800 GA

09500068 duplo 800 GA 1200

Senate 09500079 9800 15000 11000

09500079 duplo 9300 13000

GA = geschat aantal

Het logverschil met de resultaten op YGC is kleiner dan 0.2 log. De resultaten kwamen overeen met de

organisator.

6 Besluit validatieparameters

Een samenvatting van de validatieparameters is aanwezig in onderstaande tabel.

Herhaalbaarheid Intralab-

reproduceerbaarheid

Meetonzekerheid Rel. juistheid

Categorie 2 DRBC: 0.26 log DRBC: 0.37 DRBC: 0.26 log DRBC: < I 0.35 log I


Categorie 3 DRBC: 0.19 log DRBC: 0.45 log DRBC: 0.32 log DRBC: < I 0.40 log I





De herhaalbaarheid ligt hoger dan voor andere parameters, de intralabreproduceerbaarheid is vergelijkbaar

en de relatieve juistheid ook.

7 Foto’s van de methode

Hieronder volgen enkele foto’s van de methode.

Uitplaten van stalen

Uitwrijven van stalen




Aflezen van platen

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

Documents

Transcript of VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION