VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION · 2014. 3. 11. · Er werd deelgenomen aan een ringanalyse...

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE

LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

Analysemethode

Méthode d’analyse

DETECTIE VAN SALMONELLA SPP. MET PCR

(I-MET 039)

Bevestiging volgens ISO norm 6579 : 2002 “Microbiology of food and animal

feeding stuffs – Horizontal method for the detection of Salmonella spp.”

Techniek

Technique

PCR

Matrix / matrixgroep

Matrice / Groupe de

matrices

Categorie 1, 2, 3 en 4 (zie ISO 19036)

Datum laatste aanpassing /

Date du dernière adaption

21/12/2012


LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische analyses

Overzicht van de prestatiekenmerken :

detectielimiet ≤ 5 cfu / 25 g of 25 ml

De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180

De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn voor de betreffende matrices/parameters:

Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten.

Behalen van een detectielimiet van 10 cfu /swabs of /25 g

Historiek validatiedossier:

Versie Herziening

door / datum

Reden Wijzigingen

1 EH/ 12-12 Samenvoegen dossier 2008, 2009

volgens de nieuwe template en

procedure P180

Dossier aanvullen met extra

gegevens en foto’s


LABO: FLVVM SECTIE - SECTION: Biologische Analyses

LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 1/42

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

Analysemethode

Méthode d’analyse

DETECTIE VAN SALMONELLA SPP. MET PCR

(I-MET 039)

Bevestiging volgens ISO norm 6579 : 2002 “Microbiology of food and animal

feeding stuffs – Horizontal method for the detection of Salmonella spp.”

Techniek

Technique

PCR

Isolatie - bevestiging

Matrix / matrixgroep

Matrice / Groupe de

matrices

Categorie 1, 2,3 en 4 (zie ISO 19036)

Type validatie

Type de validation

Verificatie

Verantwoordelijke (Naam

en functie)

Responsable

(Nom et fonction)

Elly Harnie

Sectieverantwoordelijke biologische analyses

Opgesteld door

Rédaction par

Naam – Nom: Elly Harnie

Functie - Fonction:

Sectieverantwoordelijke biologische

analyses

Datum - Date: 21-12-2012

Handtekeningen - Signatures: get.

Medewerkers

(Naam en functie)

Collaborateurs

(Nom et fonction)

Analisten microbiologie:

K. De Greif, L. Stas, S. Vanbiesbrouck, A. Van Beversluys, C. De Schepper, M. De Mits, C.

Focquet, H. Van Remoortel, S. De Cocker

Periode van validatie

Période de validation

Start - Début:

Einde - Fin:

De validatie van de PCR methode werd uitgevoerd in 2008, 2009. Dit document bevat

een samenvatting van de validatietesten als gevolg van de nieuwe rapport-template

en procedure.

Methode goedgekeurd en

geschikt bevonden door

Méthode approuvée et jugé

convenable pour la routine

par

Naam – Nom: Ronny Martens

Functie - Fonction: QAM

Datum - Date: 21-12-2012

Handtekeningen - Signatures: get.

Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure

LAB 00 P 180.




Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB

P 00 180.

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION ................................................................................. 1

VALIDATIEPARAMETERS / MATRICES / CRITERIA .................................................................................. 4

VALIDATIEDOSSIER PCR METHODE .......................................................................................................... 4

1 INLEIDING ................................................................................................................................................ 4

2 OPLEIDING EXTERN ............................................................................................................................... 5

3 VALIDATIEPROEVEN ............................................................................................................................. 5

3.1 VALIDATIEPROEF 1: PROEFMONSTERS IN HET LABO GEMBLOUX ...................................................................... 6

3.1.1 Werkwijze ...................................................................................................................................... 6

3.1.2 Resultaten ...................................................................................................................................... 6

3.1.3 Besluit ........................................................................................................................................... 6

3.2 VALIDATIEPROEF 2: BPW + BCR(’S) EN PROEFMONSTERS ............................................................................ 7

3.2.1 Werkwijze ...................................................................................................................................... 7

3.2.2 Resultaten ...................................................................................................................................... 7

3.3 VALIDATIEPROEF 3: MELK + 1 BCR EN PROEFMONSTERS .............................................................................. 8

3.3.1 Werkwijze ...................................................................................................................................... 8

3.3.2 Resultaten ...................................................................................................................................... 8

3.3.3 Besluit ........................................................................................................................................... 9

3.4 VALIDATIEPROEF 4: CATEGORIE 1,3,4 + 1 BCR EN PROEFMONSTERS ............................................................ 10

3.4.1 Werkwijze .................................................................................................................................... 10

3.4.2 Resultaten .................................................................................................................................... 10

3.4.3 Besluit ......................................................................................................................................... 11

3.5 VALIDATIEPROEF 5: RAEMAB (RINGTEST) .................................................................................................. 12

3.5.1 Werkwijze .................................................................................................................................... 12

3.5.2 Resultaten .................................................................................................................................... 12

3.5.3 Besluit ......................................................................................................................................... 12

3.6 VALIDATIEPROEF 6: CATEGORIE 2,4 + 2 BCR’S EN PROEFMONSTERS ............................................................ 12

3.6.1 Werkwijze .................................................................................................................................... 12

3.6.2 Resultaten .................................................................................................................................... 13

3.6.3 Besluit ......................................................................................................................................... 14

3.7 VALIDATIEPROEF 7: CATEGORIE 2,3,4 + 2 BCR’S EN PROEFMONSTERS .......................................................... 14

3.7.1 Werkwijze .................................................................................................................................... 14

3.7.2 Resultaten .................................................................................................................................... 14

3.7.3 Besluit ......................................................................................................................................... 16




3.8 SAMENVATTING BESMETTE MONSTERS PROEVEN 2, 3, 4, 6 EN 7...................................................................... 16

3.9 VALIDATIEPROEF 8: DETECTIELIMIET IN GEHAKT ........................................................................................ 19

3.9.1 Werkwijze .................................................................................................................................... 19

3.9.2 Resultaten .................................................................................................................................... 19

3.9.3 Besluit ......................................................................................................................................... 21

3.10 VALIDATIEPROEF 9: PROEFMONSTERS ...................................................................................................... 21

3.10.1 Werkwijze .................................................................................................................................... 21

3.10.2 Resultaten .................................................................................................................................... 21

3.10.3 Besluit ......................................................................................................................................... 23

3.11 VALIDATIEPROEF 10: DETECTIELIMIET VAN S. TYPHIMURIUM EN S. ENTERITIDIS IN VLEES EN GEHAKT ................ 23

3.11.1 Bepalen niveau opkweek referentiestam .......................................................................................... 23

3.11.2 Besmetten gehakt/vlees met S. Typhimurium en S. Enteritidis ........................................................... 24

3.12 VALIDATIEPROEF 11: RESULTATEN SDC ................................................................................................... 26

3.12.1 Resultaten reeks 1 SDC ................................................................................................................. 26



4 ALGEMEEN BESLUIT ............................................................................................................................ 29

5 FOTO’S VAN DE METHODE .................................................................................................................. 38




Validatieparameters / matrices / criteria

Matrices :

- categorie 1: vloeistoffen en poeders (bijvoorbeeld melk )

- categorie 2: gemengde vaste stoffen (bijvoorbeeld gemalen vlees)

- categorie 3: kleine (of zeer kleine) vaste stoffen (bijvoorbeeld geraspte wortelen)

- categorie 4: overige vaste stoffen (bijvoorbeeld vlees, kaas)

Volgende parameters werden bepaald :

- Detectielimiet

Criteria:

- Detectielimiet ≤ 10 cfu/25 g of 25 ml

Gebruikte referenties : referentiemonster V.W.A., BCR (CRM)

Ringtest noodzakelijk

Validatiedossier PCR methode

1 Inleiding

Dit dossier is het verwerkte validatiedossier van de bepaling van Salmonella spp. met PCR. De

oorspronkelijke validatie werd uitgevoerd in 2008, 2009. Voorheen werd de klassieke methode uitgevoerd.

Naar analogie met het labo Gembloux werd ook in ons labo gekozen voor het ‘easy protocol’ van Biorad om

te valideren.




2 Opleiding extern

Een overzichtstabel van gevolgde externe opleidingen is aanwezig in onderstaande tabel.

Organisator Datum Plaats Aard Personen

Opleiding Biorad 2007 Biorad theorie + praktijk K. Orye (KO)

Ulg + FAVV 28/04/08 FAVV Brussel theorie K. De Greif (KDG)

L. Stas (LS)

E. Harnie (EH)

Opleiding labo

Gembloux

06/08/08 Labo Gembloux praktijk K. De Greif E. Harnie

Opleiding Biorad 26/08/08 Labo Melle theorie +

demonstratie

praktijk

K. De Greif

S. Vanbiesbrouck (SV)

L. Stas

K. Orye

E. Harnie

Opleiding Biorad 04/11/08 Labo Melle theorie +

demonstratie

praktijk

S. De Cocker (SDC)

M. De Mits (MDM)

C. De Schepper (CDS)

A. Van Beversluys (AVB)

Intern werden de mensen opgeleid tijdens de validatietesten (zie verder).

Zowel KDG als SV hebben ervaringen met (real-time) PCR uit vorige werkervaring en/of stage.

3 Validatieproeven

De validatie bestond uit de analyse van proefmonsters, besmette monsters, referentiestammen en

ringstalen.

De detectielimiet werd bepaald door aangekochte monsters te besmetten en te analyseren op detectielimiet

(< 10 cfu/25g of ml). Volgende categorieën werden besmet en geanalyseerd:

- categorie 1: vloeistoffen en poeders (bijvoorbeeld melk )

- categorie 2: gemengde vaste stoffen (bijvoorbeeld gemalen vlees)

- categorie 3: kleine (of zeer kleine) vaste stoffen (bijvoorbeeld geraspte wortelen)

- categorie 4: overige vaste stoffen (bijvoorbeeld vlees, kaas)

Ook werden stalen parallel volgens de ISO norm geanalyseerd.




Er werd deelgenomen aan een ringanalyse Raemab in oktober 2008.

3.1 Validatieproef 1: proefmonsters in het labo Gembloux

3.1.1 Werkwijze

In het labo van Gembloux werden een aantal stalen door KDG en EH onder begeleiding (06/08/08)

geanalyseerd.

3.1.2 Resultaten

De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De PCR plaat werd afgedekt met caps.

Tabel 1 Resultaten validatieproef 1

Monsternummer Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO

08310129 worst 2 + + (S. Paratyphi B)




08310863 separatorvlees 2 - -


08320090 roomijs 2 - -

08320059 babyvoeding 4 - -

08320080 radijzen 4 - -

08320053 kip 4 - -

blanco steriel water - - niet uitgevoerd

referentie referentiemonster* - + +

Aantal stalen 10

* S. Enteritidis.

3.1.3 Besluit

De resultaten met PCR en volgens de ISO methode kwamen overeen.




3.2 Validatieproef 2: BPW + BCR(’s) en proefmonsters

3.2.1 Werkwijze

In een tweede proef werden door KDG, SV en KO een aantal stalen geanalyseerd. Ook werden 1 en 2

BCR’s (respectievelijk 5 en 10 cfu’s Salmonella Typhimurium) toegevoegd aan gebufferd peptonwater.

De PCR plaat werd afgesloten met caps.

3.2.2 Resultaten

De PCR werd uitgevoerd op 24/09/08. Een overzicht is aanwezig in onderstaande tabel.



BPW+ 1 BCR referentie - + niet uitgevoerd

BPW + 2 BCR referentie - + niet uitgevoerd

08381291 ham 4 - -

08381547 worst 2 - -

08381319 schaaldieren 4 - -

08381629 chocomousse 2 - -

08381868 swabs 4 - -

08381869 swabs 4 - -

08381870 swabs 4 - -

08381871 swabs 4 - -

08381872 swabs 4 - -

08381900 weekdieren 4 - -


referentie - - + +

Aantal stalen 10

3.2.2.1 Besluit

De resultaten op PCR en volgens de ISO methode kwamen overeen.

Zowel 1 als 2 BCR’s werden teruggevonden.




3.3 Validatieproef 3: melk + 1 BCR en proefmonsters

3.3.1 Werkwijze

In een tweede reeks werden door SV, LS en EH een aantal stalen geanalyseerd. Ook werd melk besmet met

1 BCR en met 2 BCR’s. Deze besmette stalen werden zowel door SV, LS als EH geanalyseerd.

3.3.2 Resultaten

De PCR werd uitgevoerd op 01/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De PCR plaat

werd afgedekt met folie.


Monsternummer Analist Aard Categorie Resultaat

PCR

Resultaat

ISO

08391961 SV ham 4 - -

08391965 worst 2 - -



08391998 schaaldiersalade 2 - -


08392090 swabs 4 - -

08392091 swabs 4 - -

08392092 swabs 4 - -

08392093 swabs 4 - -

08392094 swabs 4 - -


Melk + 1 BCR melk 1 + niet uitgevoerd


Referentiestam* - - + +

08391859 LS eiproduct poeder 1 - -

08391861 eiproduct poeder 1 + -

08391964 eiproduct poeder 1 - -

08391966 worst 2 - -

08391970 worst 2 - -

08391973 ham 4 + -

08392051 NHC dierl. eiwitten 1 + + (S. Llandof)

08392052 NHC dierl. eiwitten 1 + + (S. Anatum)

08392053 NHC dierl. eiwitten 1 + + (S. Montevideo)








Referentiestam* melk 1 + +

Melk + 1 BCR EH melk 1 + niet uitgevoerd



08391961 ham 4 - -


Aantal stalen 22 + 2 in duplo

* S. Typhimurium

Het PCR signaal van het monster 08391861 stijgt pas na 45 cycli in FAM. Dit gaat over een zwak positief

staal dat volgens de ISO methode niet werd bevestigd.

Dit werd besproken met Biorad op 04/11/08: stalen die pas na 45 cycli positief zijn, zijn twijfelgevallen.

Het PCR signaal van het monster 08391973 is duidelijk positief terwijl het volgens de ISO methode niet werd

teruggevonden.

Bij de GGO groep in het labo is opgevallen dat het afdichten van een PCR plaat met folie problemen van

uitdamping kan geven op vooral de ‘H’-lijn. In deze reeks bevonden zich een negatief staal (08392091), de

negatieve PCR controle (NC) en een positief monster (08392052) op deze lijn. Deze 3 PCR reacties gaven

geen problemen (juiste curves, juiste resultaten).

Verschillende stammen van Salmonella werden in deze reeks met PCR teruggevonden.

3.3.3 Besluit

De resultaten op PCR en volgens de ISO methode kwamen niet overeen voor 2 monsters. Er wordt verwacht

dat de PCR methode gevoeliger is dan de ISO methode.

Zowel 1 als 2 BCR’s in melk werden teruggevonden zodat de detectielimiet < 10 cfu/25 ml.




3.4 Validatieproef 4: categorie 1,3,4 + 1 BCR en proefmonsters

3.4.1 Werkwijze

In een volgende reeks werden door SV en KDG telkens 2 producten per categorie besmet met 1 BCR (= 5

cfu) en geanalyseerd (uitzondering: categorie 1: zie validatieproef 3).

3.4.2 Resultaten

PCR werd door SV en KDG uitgevoerd op 08/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De

PCR plaat werd afgedicht met folie.


Monsternummer Analist Aard Categorie Resultaat

PCR

Resultaat

ISO

1a KDG groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd

1b groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd

2a kaas + BCR 4 - niet uitgevoerd

2b kaas + BCR 4 + niet uitgevoerd

3a gehakt + BCR 2 - niet uitgevoerd

3b gehakt + BCR 2 - niet uitgevoerd

4a vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd

4b vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd

3a blanco gehakt blanco 2 - niet uitgevoerd

3b blanco gehakt blanco 2 - niet uitgevoerd

4a blanco vlees blanco 4 - niet uitgevoerd

4b blanco vlees blanco 4 - niet uitgevoerd

08401342 kaas 4 - -

08401530 vacht 4 + + (S. Senftenberg)

08401531 vacht 4 - -

08401532 vacht 4 + + (S. Virchow)

08401533 vacht 4 - -

1a SV groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd

1b groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd

2a kaas + BCR 4 - niet uitgevoerd

2b kaas + BCR 4 + niet uitgevoerd

3a gehakt + BCR 2 + niet uitgevoerd

3b gehakt + BCR 2 - niet uitgevoerd

4a vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd




4b vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd

1a blanco groentemix blanco 3 - niet uitgevoerd

1b blanco groentemix blanco 3 - niet uitgevoerd

2a blanco kaas blanco 4 - niet uitgevoerd

2b blanco kaas blanco 4 - niet uitgevoerd

08401534 vacht 4 - -

08401559 vloeibaar eiproduct 1 - -

08401679 volledige vogels 4 - +

08401751 kant en klaar product 4 - -


Blanco steriel water - - niet uitgevoerd

Aantal stalen 9

* S. Typhimurium

Het monster 08401679 werd volgens de ISO norm als positief teruggevonden, maar niet met de PCR

methode. Het gaat over een monster vel, genomen van kippenkarkassen. Er kon geen verklaring gevonden

worden (het staal bevond zich niet op de ‘H’-lijn, normale HEX-curve,…).

Verschillende stammen van Salmonella werden in deze reeks met PCR teruggevonden.

De versneden groenten werden zowel door SV als KDG als positief teruggevonden met toevoeging van 1

BCR. Vlees werd door niemand teruggevonden. Voor het gehakt en de kaas werden sommige besmette

monsters teruggevonden. Dit kan erop wijzen dat de detectielimiet voor de methode hoger is dan 5 cfu.

In deze test werden geen stalen op de ‘H’-lijn meegenomen.

3.4.3 Besluit

De resultaten met PCR en volgens de ISO methode kwamen niet allemaal overeen: 1 staal werd niet met

PCR teruggevonden.

Niet alle besmette monsters werden teruggevonden zodat deze producten in een volgende proef (zie 3.6)

opnieuw werden besmet maar nu met 2 BCR’s.




3.5 Validatieproef 5: Raemab (ringtest)

3.5.1 Werkwijze

De 5 melkpoeder stalen van Raemab werden door SV geanalyseerd met PCR en volgens de ISO methode.

3.5.2 Resultaten

De test werd uitgevoerd op 16/10/08. De resultaten zijn aanwezig in de onderstaande tabel. De PCR plaat

werd afgedicht met folie.

Tabel 5 Resultaten Raemab

Monsternummer Analist Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO

08420244 SV melkpoeder 1 - -

08420245 + +

08420246 - -

08420247 - -

08420248 - -

Referentiestam - - + +


Er werden geen stalen geanalyseerd op de ‘H’-lijn.

3.5.3 Besluit

De resultaten met PCR en volgens de ISO norm kwamen overeen.

Volgens de organisator was Salmonella Anatum aanwezig in monster 08420245. Dit komt overeen met onze

resultaten.

3.6 Validatieproef 6: categorie 2,4 + 2 BCR’s en proefmonsters

3.6.1 Werkwijze

Er werden opnieuw monsters aangekocht om te besmetten en te analyseren. Deze keer werden 2 BCR’s (=

10 cfu) toegevoegd.




3.6.2 Resultaten

PCR werd door SV uitgevoerd op 29/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel.

Een aantal stalen werden op lijn A of B geanalyseerd en ook op H om eventuele verschillen na te gaan. De

PCR plaat werd afgedekt met folie.


Monsternr. Analist Aard Categorie Resultaat

PCR A/B

Resultaat

PCR H

Resultaat ISO

08431925 SV vleesbereidingen 2, 4 - - -

08431960 vleesbereidingen 2, 4 - niet uitgevoerd -

08440168 vleesproducten 4 - - -

08440176 vleesbereidingen 2, 4 - - -

Vlees 1 varken lage rib 4 + + niet uitgevoerd

vlees 1 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd

vlees 2 rumsteak rund 4

- - +

vlees 2 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd

gehakt 1 rund-varken 2

- - -

gehakt 1 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd

gehakt 2 varken-kalf 2

- - +

gehakt 2 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd

kaas camembert carref. 4 + + niet uitgevoerd

kaas blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd

referentiestam - - + + +

blanco steriel water - - - niet uitgevoerd

Aantal stalen 4

Opnieuw werden sommige besmette stalen niet teruggevonden, ookal werden 10 cfu’s toegevoegd (de

detectielimiet van de PCR methode is volgens de fabrikant < 10 cfu).

Een aantal zaken werden gecontroleerd:

- vervaldatum BCR’s: er werden BCR’s gebruikt die houdbaar waren tot 01/01/2009; een

mogelijke oorzaak bestaat erin dat deze BCR’s door deze lange bewaartermijn toch van mindere

kwaliteit waren

- in 1.6 % van de BCR’s zijn geen Salmonella spp. aanwezig; dit kan echter niet verklaren

waarom er in deze proef zoveel besmette monsters niet werden teruggevonden

- alle controles = OK

- de monsters geanalyseerd op A/B of op H geven dezelfde resultaten.




Bij het nakijken van de PCR curven echter is op H1 (monster vlees 1) wel een verschil aanwezig (zie

bijlage 6b) met hetzelfde monster geanalyseerd op A5: op H1 daalt de curve op het einde van de

PCR reactie en het signaal ligt lager. Toch is de eindconclusie dezelfde: beide waren positief.

Dit dalen van de curve wijst op het uitdampen van de well tijdens de PCR reactie.

- het is niet analist gebonden want alle analisten bekomen gelijkaardige resultaten

Vlees 2, gehakt 1 en gehakt 2 werden door SV ook verder volgens de ISO methode geanalyseerd. Gehakt 1

werd niet teruggevonden maar de twee andere stalen wel.

3.6.3 Besluit

Met toevoeging van 2 BCR’s werden niet alle besmette monsters teruggevonden. Vlees en gehakt geven

problemen.

Deze proef wijst erop dat de detectielimiet van de methode > 10 cfu, wat volgens de fabrikant niet mogelijk

is.

Het uitdampen van de wells was in deze proef geen probleem, maar zou het wel kunnen zijn in andere runs.

Daarom werd in een volgende proef enkel caps gebruikt.

Ook werden nieuwe, recente BCR’s besteld om te besmetten.

3.7 Validatieproef 7: categorie 2,3,4 + 2 BCR’s en proefmonsters

3.7.1 Werkwijze

Zie 3.6.

3.7.2 Resultaten

PCR werd door KDG en LS uitgevoerd op 30/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel.

De PCR plaat werd afgedicht met caps. In de reeks van KDG werden nieuwe BCR ’s meegenomen (met een

houdbaarheidstermijn tot oktober 2009). In de reeks van LS werden zowel ‘oudere’ als nieuw toegekomen

BCR’s meegenomen.





Monsternr. Analist Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO

Kaas KDG camembert 1 4

+ niet uitgevoerd

Kaas blanco -

Gehakt rund-varken

(cfr. SV in proef 6)

2 -

Vlees 1 hespensneden 4

-

Vlees 1 blanco -

Vlees 2 varken lage rib 4

+

Vlees 2 blanco -

blanco steriel water - -

referentiestam - - + +

08431443 kaas 4 - -

08440002 swabs 4 - -

08440003 swabs 4 - -

08440005 swabs 4 - -

08440006 swabs 4 - -

08440085 volledige vogels 4 - -


08440156 patisserie 4 - -



08440175 ber. rauwe eieren 4 - -

08440204 filet américain 2 - -

08440221 koude schotel 4 - -

08440227 filet américain 2 - -

Groenten 1 LS salade en rauwkost 3

+ niet uitgevoerd

Groenten 1 blanco -

Groenten 2 geraspte wortelen 3

+

Groenten 2 blanco -

Kaas 1 camemebert 1 4

+

Kaas 1 blanco -

Kaas 2 camembert GB 4 +

Kaas 2 blanco -

Vlees 1 rumsteak rund 4 -

Vlees 1 blanco -

Vlees 2 hespensneden 4 +

Vlees 2 blanco -

Gehakt 1 rund-varken 2 -




Gehakt 1 blanco -

Gehakt 2 varken-kalf 2 -

Gehakt 2 blanco -

Referentiestam - - + +

Aantal stalen 14

Opnieuw werden een aantal besmette monsters niet teruggevonden met dit easy protocol.

Het gebruik van caps en nieuwe BCR’s heeft het probleem niet verholpen. Alle positieve curves vertoonden

een goed exponentieel verloop.

3.7.3 Besluit

Met toevoeging van 2 BCR’s werden niet alle besmette monsters teruggevonden. Vlees en gehakt geven

problemen.

3.8 Samenvatting besmette monsters proeven 2, 3, 4, 6 en 7

In onderstaande tabel wordt een samenvatting gegeven van de besmette monsters.




Tabel 8 Samenvatting besmette monsters

Aard Monster Analist Proef Aantal BCR’s Resultaat PCR

GPW GPW KDG/SV 2 1 +

2 +

Melk UHT melk 1 SV 3 1 +

UHT melk 2 2 +

UHT melk 1 LS 1 +

UHT melk 2 2 +

UHT melk 1 EH 1 +

UHT melk 2 2 +

Groenten salademix 1 KDG 4

1 +

salademix 2 1 +

salademix 1 SV 1 +

salademix 2 1 +

salade en rauwkost LS 7 2 +

geraspte wortelen 2 +

Gehakt rundgehakt 1 KDG 4

1 -

varken-rund 2 1 -

rundgehakt 1 SV 1 +

varken-rund 2 1 -

rund-varken 3 SV 6 2 -

varken-kalf 4 2 -

varken-rund 3 KDG 7

2 -

rund-varken 5 LS 2 -

varken-kalf 6 2 -

Vlees vees 1 KDG 4

1 -

vees 2 1 -

vees 1 SV 1 -

vees 2 1 -

varken lage rib SV 6 2 +

rumsteak rund 2 -

hespensneden KDG 7

2 -

varken lage rib 2 +

rumsteak rund LS 2 -

hespensneden 2 +

Kaas camembert 1 KDG 4

1 -

camembert 2 1 +




camembert 1 SV 1 -

camembert 2 1 +

camembert GB SV 6 2 +

camembert KDG 7

2 +

camembert LS 2 +

camembert GB 2 +

Vlees en gehakt geven duidelijk problemen bij het bepalen van de detectielimiet.

Dit werd besproken met het labo te Gembloux. In Gembloux hebben ze geen problemen ondervonden met

het besmetten van deze matrices. Ze hebben wel geen BCR’s gebruikt bij het besmetten omdat ze daar

geen goede ervaring mee hadden in het verleden.

Deze resultaten werden ook besproken met Biorad op 04/11/08. Volgens hen kan het zijn dat gehakt en

vlees teveel interfererende flora hebben om de PCR reactie goed te laten doorgaan. Ze stellen voor om het

standaard protocol uit te proberen voor deze stalen omdat op die manier meer staal wordt genomen (alle

voorgaande proeven werden uitgevoerd met het easy protocol).

Er werd opgemerkt dat waarschijnlijk vanaf 2009 het easy protocol zal aangepast worden: i.p.v. 50 µl zal 100

µl BPW worden genomen. Dit kan een oplossing zijn voor ons probleem (meer staalafname zodat de

stoorflora minder belangrijk wordt) en zal in een volgende proef worden uitgetest.

Op 04/11/08 werd tijdens de training van Biorad een staal vlees en gehakt meegenomen in de reeks. Beide

besmet met 1 BCR en met 2 BCR’s. Zowel het easy als het standaard protocol werden uitgevoerd.

Het besmette vlees werd teruggevonden volgens beide protocols, zowel 1 BCR als 2 BCR’s. Het gehakt

besmet met 1 BCR werd niet teruggevonden volgens het easy protocol, maar wel volgens het standaard

protocol. Gehakt geënt met 2 BCR’s werd volgens beide protocols teruggevonden. Dit resultaat kan erop

wijzen dat het standaard protocol beter is voor deze stalen.

Er werden ook melkstalen geanalyseerd, maar deze bleken negatief te zijn a.g.v. een pipetteerfout van de

opleider.

Tijdens de opleiding van Biorad werd door onze analisten nagegaan of er verschillen waren in hun en onze

werkwijze. Het enige verschil in werken dat kon achterhaald worden was de monstername: wanneer in het

BPW een te dikke vetlaag aanwezig is, werd door onze analisten in voorgaande proeven een deel van het

staal overgegoten in een Stomacherzak met filter vooraleer het staal werd bemonsterd voor PCR.

Biorad stelde voor om met een grotere pipet eerst een deelmonster, voldoende onder de vetlaag genomen,

in een BO-potje te pipetteren om daaruit dan 50 µl monster te nemen voor PCR. Dit zal in een volgende

proef worden uitgetest.




In deze reeks werd folie gebruikt. Op de positie H 12 werd een extra positieve controle meegenomen. Het

bleek dat hier inderdaad verdamping optrad (zoals ook gezien bij de GGO’s). Dit is in de grafieken te zien als

een stijgende lijn (i.p.v. een exponentieel verloop). Op 05/11/08 werd het toestel door de fabrikant

gecontroleerd maar er werd geen technisch defect vastgesteld.

Biorad raadt het gebruik van caps aan in plaats van het gebruik van folie omdat het toestel de folie niet goed

aandrukt zodat verdamping mogelijk kan zijn.

Een andere opmerking van Biorad was in verband met de positieve controle: het wordt afgeraden om

stelselmatig in een reeks dergelijke hoge besmetting mee te nemen om contaminatie te voorkomen. Daarom

werd voorgesteld om de positieve controle zeker 1000 x te verdunnen zodat het signaal i.p.v. na 15 cycli pas

na 25 cycli zou stijgen.

In een volgende proef zal het referentiemonster worden meegenomen.

3.9 Validatieproef 8: detectielimiet in gehakt

Omdat in bovenstaande proeven problemen optraden met het bepalen van de detectielimiet in vlees en

vooral in gehakt, werd in deze proef de detectielimiet bepaald in gehakt volgens een nieuw protocol.

3.9.1 Werkwijze

Twee soorten gehakt werden aangekocht om te besmetten met verschillende verdunningen van het

referentiemonster van V.W.A. (lotnummer 6p-0712; 700 cfu/ml). De gebruikte verdunningen om te enten

werden ook uitgeplaat op Brilliance Salmonella om het aantal cfu te bepalen (1 ml / 3 platen Brilliance

Salmonella).

Omdat het easy protocol van Biorad zal wijzigen (in plaats van 50 µl GPW, wordt 100 µl genomen en zo ook

100 µl reagens A) werd dit in deze test ook uitgeprobeerd.

In deze proef werd ook voor ‘vuile’ stalen, op aanraden van Biorad, eerst een deelmonster in een BO potje

overgebracht om vervolgens 50 µl (of 100 µl) te nemen om mee verder te werken. Dit zou het contamineren

van de pipet voorkomen en de kans op verstoring van de PCR reactie wegnemen.

Omdat in de voorgaande proeven een te hoge besmetting van de positieve controle aanwezig was, werd in

deze test slechts 1 ml van het referentiemonster meegenomen (= 700 cfu/ml).

3.9.2 Resultaten

De proef werd door KDG uitgevoerd op 12/11/08. PCR werd uitgevoerd op 13/11/08.




De resultaten van de gebruikte verdunningen van het referentiemonster zijn aanwezig in onderstaande tabel.

Tabel 9 Overzicht verdunningsoplossingen

Verdunnings-

oplossing

Verdunning cfu/ml

Verwacht aantal * Geteld aantal

B 1/8 referentiemonster 88 23

C 1/2 B 44 9

D 1/2 C 22 6

E 1/2 D 11 4

F 1/2 E 6 4

* berekend aan de hand van de referentiewaarde

De resultaten van de PCR zijn aanwezig in onderstaande tabel.

Tabel 10 Overzicht resultaten validatieproef 8: detectielimiet gehakt

Monsternr. Protocol Type gehakt Verdunning Resultaat PCR

1 100 µl Varken-rund B +

2 C +

3 D +

4 E +

5 F -

6 geen -

7 Varken-kalf B +

8 C +

9 D +

10 E +

11 F +

12 geen -

13 50 µl Varken-rund B +

14 C +

15 D +

16 E +

17 F -

18 geen -

19 Varken-kalf B +

20 C +

21 D +

22 E +




23 F +

24 geen -

Referentie referentiemonster 1

ml

- +

Blanco water - -

3.9.3 Besluit

De detectielimiet van < 10 cfu/25 g werd met dit nieuwe besmettingsprotocol behaald.

Misschien zijn de Salmonella ’s aanwezig in BCR’s teveel gestresseerd om een goed PCR resultaat te

geven. Alle volgende proeven zullen met dit nieuwe protocol worden uitgevoerd. Er werd geen verschil

gevonden tussen het 50 µl en het 100 µl protocol.

In dit geval werd Salmonella Enteritidis toegevoegd. In een van de volgende proeven zal uitgetest worden of

Salmonella Typhimurium ook kan teruggevonden worden op een dergelijk laag niveau (validatieproef 10).

1 ml van het referentiemonster werd meegenomen als positieve controle, dit bleek nog te hoog te zijn omdat

het PCR signaal al na 18 cycli begon te stijgen. In een volgende proef werd dit niveau van besmetting nog

verlaagd.

3.10 Validatieproef 9: proefmonsters

3.10.1 Werkwijze

In deze proef werden door LS enkel proefstalen bemonsterd. ‘Vuile’ stalen werden eerst bemonsterd in een

BO potje vooraleer 50 µl te nemen voor het uitvoeren van de PCR.

3.10.2 Resultaten

De PCR werd door LS uitgevoerd op 15/11/08. De resultaten zijn samengevat in onderstaande tabel.





Monsternr. Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO

08460031 Filet americain 2 - -





08460041 Gehakt 2 - -

08460042 Gehakt 2 - -

08460043 Gehakt 2 - -

08460044 Gehakt 2 - -

08460045 Gehakt 2 - -






08460084 Roomijs 2 - -

08460132 Vacht 4 - -

08460133 Vacht 4 - -

08460134 Vacht 4 - -

08460135 Vacht 4 - -

08460136 Vacht 4 - -

08460203 2 kleppige weekdieren 4 - -

08460215 Versneden Vlees 4 - -



08460229 Vleesproducten 4 - -

08460237 Mayonaise 2 - -



08460266 Versneden vlees 4 - -


08460306 Koude zakouski 4 - -


08460056 Volledige vogels 4 - -

Referentie monster - + +

Blanco Steriel water - - -

Aantal stalen 34




3.10.3 Besluit

De resultaten kwamen overeen.

Er werd geen inhibitie teruggevonden bij mayonaise (= matrix waarbij inhibitie kan optreden volgens Biorad).

3.11 Validatieproef 10: detectielimiet van S. Typhimurium en S. Enteritidis in vlees en gehakt

In deze proef werd naast Salmonella Enteritidis ook met Typhimurium besmet.

3.11.1 Bepalen niveau opkweek referentiestam

Op 24/11/08 heeft LS de referentiestam (Salmonella Typhimurium) opgekweekt en geteld om na te gaan wat

de concentratie was na 3 u incubatie bij 37 °C (BHI). Er werden twee opkweken aangemaakt.

Na incubatie werd een verdunningsreeks aangemaakt om uit te platen (0.1 ml / Brilliance Salmonella).

Het resultaat is aanwezig in onderstaande tabel.

Tabel 12 Validatieproef 10a

Verdunning Platen opkweek 1 Platen opkweek 2

100 overgroeid overgroeid

10-1

overgroeid overgroeid

10-2


10-3


10-4

159 206

10-5

42 60

10-6

10 14

concentratie 4.7 x 106 cfu/ml 6.2 x 10

6 cfu/ml

Er werd in beide opkweken een vergelijkbaar aantal cfu’s teruggevonden.




3.11.2 Besmetten gehakt/vlees met S. Typhimurium en S. Enteritidis

3.11.2.1 Werkwijze

De werkwijze voor de besmetting met S. Typhimurium was als volgt:

- opkweken referentiestam gedurende 3 u bij 37 °C (BHI)

- aanmaken verdunningsreeks tot 10-7

- uitplaten verdunning 10-6

en 10-7

(0.1 ml / Brilliance Salmonella)

- gehakt (kalf-varken) en vlees (kotelet) besmetten met 1 ml van verdunning 10-6

en 1 ml van verdunning

10-7

- ook blanco monsters bepalen

Voor de besmetting met S. Enteritidis werd vertrokken van het verdund referentiemonster zoals beschreven

in validatieproef 8.

Als positieve controle werd 1 kolonie van de referentiestam meegenomen. Vooraleer PCR uit te voeren

werd het geïncubeerde BPW 1000 x verdund.

Het 50 µl protocol werd gevolgd.

3.11.2.2 Resultaten

De proef werd door LS uitgevoerd op 16/12/08 en PCR op 17/12/08. De resultaten zijn aanwezig in

onderstaande tabel.

De opkweek van de referentiestam bevatte 1.2 x 108 cfu/ml zodat het besmettingsniveau kon berekend

worden (zie tabel).




Tabel 13 Resultaten validatieproef 10b

Omschrijving Besmettingsniveau Resultaat PCR

S. Typhimurium Gehakt + verdunning 10-6

130 cfu +

Gehakt + verdunning 10-7

13 cfu +

Vlees + verdunning 10-6

130 cfu +

Vlees + verdunning 10-7

13 cfu +

S. Enteritidis Gehakt + SE 17 cfu +

Vlees + SE +

Blanco’s Gehakt geen -

Vlees -

Water -

Referentie Stam onverdund ongekend +

Stam 1000 x verdund ongekend +

3.11.2.3 Besluit

Zowel Salmonella Enteritidis als Salmonella Typhimurium werden op een laag besmettingsniveau

teruggevonden in gehakt en vlees.

De positieve controle (referentiestam), 1000x verdund gaf ook een positief signaal met PCR. Het signaal

van de onverdunde referentiestam ging na 16 cycli omhoog terwijl het signaal van de verdunde

referentiestam pas na 28 cycli de hoogte in ging. Dit lijkt een goede manier om in volgende runs toe te

passen.




3.12 Validatieproef 11: resultaten SDC

In de eerste reeks werd besmet met 1 BCR, in alle andere reeksen werd besmet volgens het nieuw protocol.

In de tweede reeks werden ook twee alternatieven uitgeprobeerd om mee te nemen als positieve controle:

- 100 µl van het referentiemonster (i.p.v. 1 ml) - referentiestam 1000 x verdunnen (i.p.v. een volledige kolonie mee te nemen)

3.12.1 Resultaten reeks 1 SDC

De eerste reeks werd uitgevoerd onder supervisie van KDG op 14/11/08.

Een samenvatting van de uitgevoerde testen door SDC is aanwezig in onderstaande tabel.

Tabel 14 Resultaten validatieproef 11: reeks 1

Datum PCR Monsternr. Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO

14/11/08 1 Melk 1 1 - niet uitgevoerd

2 Blanco melk 1 -

3 Melk 2 1 +

4 Blanco melk 2 -

5 Geraspte wortelen 3 +

6 Blanco wortelen -

7 Rauwkost 3 +

8 Blanco rauwkost -

08451713 Vleessla 2 - -

08451745 Kipsla 2 - -

08451750 Charc. worst 2 - -

08451824 Vleesber. pluimvee 4 + + (S. Typhimurium)





08451947 Kaas 4 - -

Referentie 1 ml referentiemonster - + +

Blanco Steriel water - - niet uitgevoerd

Aantal stalen 9

Melk geënt met 1 BCR werd niet teruggevonden. Dit werd herhaald in een volgende proef maar met het

nieuwe protocol zoals beschreven in validatieproef 8.





De proef werd op 10/12/08 uitgevoerd onder supervisie van SV.

De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel.

De besmettingsoplossing bevatte 1 cfu/ml (1 kolonie op Brilliance Salmonella).

In deze proef werd ook een test uitgevoerd i.v.m. de positieve controle: er werden twee protocols uitgetest

(zie tabel).

Tabel 15 Resultaten validatieproef 11: reeks 2

Datum PCR Monsternr. Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO

10/12/08 Kaas 1 Besmette kaas 4 + niet uitgevoerd

Kaas 1b Blanco kaas -

Kaas 2 Besmette kaas 4 +


Melk Besmette melk 1 +

Melkb Blanco melk -

08501406 Kipsla 2 - -

08501502 Weekdieren 4 - -

08501866 Kipsla 2 - -

PoscontA 100 µl van het

referentiemonster

- + niet uitgevoerd

PoscontB 1 kolonie van de

referentiestam 1000 x

verdund

- +

Referentiestam - - +

Blanco water - -

Aantal stalen 3

De besmette monsters werden correct teruggevonden.

Zowel PoscontA als PoscontB hadden te hoge DNA waarden (al na 20 cycli positief). Op 17/12/08 werd door

LS een ander protocol uitgetest (zie validatieproef 10).





De proef werd zelfstandig uitgevoerd op 19/12/08.

De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel.

De besmettingsoplossing bevatte 4 cfu/ml (4 kolonies op Brilliance Salmonella).

Tabel 16 Resultaten opleiding SDC reeks 3

Datum PCR Monsternr. Aard Categorie Resultaat

PCR

Resultaat ISO

17/12/08 gehakt a Besmet gehakt (varken-kalf) 2 + niet uitgevoerd

blanco Blanco gehakt * -

gehakt b Besmet gehakt (varken-rund) 2 +

blanco Blanco gehakt -

Vlees a Besmet vlees (kotelet) 4 +

Blanco Blanco vlees * -

Vlees b Besmet vlees (biefstuk) 4 +

blanco Blanco vlees -

08510049 pudding 4 - -

08510243 pudding 4 - -


08510422 versneden vlees 4 - -

08510438 braadkippen 4 - -


08510133 bereidingen met rauwe eieren 4 - -

08510468 vloeibare eiproducten 2 - -

08510544 koude zakoeski 4 - -

Blanco water - - niet uitgevoerd

referentie referentiemonster - + +

Aantal stalen 9

* blanco werd door LS geanalyseerd in proef 10 (SDC en LS hebben dezelfde stalen gebruikt om te

besmetten en te analyseren)




4 Algemeen besluit

De detectielimiet van de PCR methode voor de vier verschillende categorieën is < 10 cfu / 25 g of ml. Een

samenvattende tabel van alle besmette monsters wordt hieronder gegeven.

Tabel 17 Overzicht besmette monsters

Datum Monsternummer Aard Categorie Resultaat PCR

01/10/08* Melk + 1 BCR melk 1 +

Melk + 2 BCR melk 1 +





08/10/2008* 1a groentemix + BCR 3 +

1b groentemix + BCR 3 +

2a kaas + BCR 4 -

2b kaas + BCR 4 +

3a gehakt + BCR 2 -

3b gehakt + BCR 2 -

4a vlees + BCR 4 -

4b vlees + BCR 4 -

3a blanco gehakt blanco 2 -

3b blanco gehakt blanco 2 -

4a blanco vlees blanco 4 -

4b blanco vlees blanco 4 -

1a groentemix + BCR 3 +

1b groentemix + BCR 3 +

2a kaas + BCR 4 -

2b kaas + BCR 4 +

3a gehakt + BCR 2 +

3b gehakt + BCR 2 -

4a vlees + BCR 4 -

4b vlees + BCR 4 -

1a blanco groentemix blanco 3 -

1b blanco groentemix blanco 3 -

2a blanco kaas blanco 4 -

2b blanco kaas blanco 4 -




29/10/2008* Vlees 1 varken lage rib 4 +

vlees 1 blanco -

vlees 2 rumsteak rund 4

-

vlees 2 blanco -

gehakt 1 rund-varken 2

-

gehakt 1 blanco -

gehakt 2 varken-kalf 2

-

gehakt 2 blanco -

kaas camembert carref. 4 +

kaas blanco -

30/10/2008* Kaas camembert 1 4

+

Kaas blanco -

Gehakt rund-varken

(cfr. SV in proef 6)

2 -

Vlees 1 hespensneden 4

-

Vlees 1 blanco -

Vlees 2 varken lage rib 4

+

Vlees 2 blanco -

Groenten 1 salade en rauwkost 3

+

Groenten 1 blanco -

Groenten 2 geraspte wortelen 3

+

Groenten 2 blanco -

Kaas 1 camemebert 1 4

+

Kaas 1 blanco -

Kaas 2 camembert GB 4 +

Kaas 2 blanco -

Vlees 1 rumsteak rund 4 -

Vlees 1 blanco -

Vlees 2 hespensneden 4 +

Vlees 2 blanco -

Gehakt 1 rund-varken 2 -

Gehakt 1 blanco -

Gehakt 2 varken-kalf 2 -

Gehakt 2 blanco -

12/11/2008 Gehakt + 23 cfu Varken-rund

100 µl protocol

B +

Gehakt + 9 cfu C +

Gehakt + 6 cfu D +

Gehakt + 4 cfu E +

Gehakt + 4 cfu F -




Blanco geen -

Gehakt + 23 cfu Varken-kalf

100 µl protocol

B +

Gehakt + 9 cfu C +

Gehakt + 6 cfu D +

Gehakt + 4 cfu E +

Gehakt + 4 cfu F +

blanco geen -

Gehakt + 23 cfu Varken-rund

50 µl protocol

B +

Gehakt + 9 cfu C +

Gehakt + 6 cfu D +

Gehakt + 4 cfu E +

Gehakt + 4 cfu F -

blanco geen -

Gehakt + 23 cfu Varken-kalf

50 µl protocol

B +

Gehakt + 9 cfu C +

Gehakt + 6 cfu D +

Gehakt + 4 cfu E +

Gehakt + 4 cfu F +

blanco geen -

14/11/08 Melk 1 Besmette melk 1 -

Blanco melk 1 Blanco -

Melk 2 Besmette melk 1 +

Blanco melk 2 Blanco -

Geraspte wortelen Besmette Geraspte

wortelen

3 +

Blanco wortelen Blanco -

Rauwkost Besmette Rauwkost 3 +

Blanco rauwkost Blanco rauwkost -

24/11/2008 Gehakt + 130 cfu

Besmet monster 2 +

Gehakt + 13 cfu Besmet monster +

Vlees + 130 cfu Besmet monster 4 +

Vlees + 13 cfu Besmet monster +

Gehakt + 17 cfu Besmet monster 2 +

Vlees +17 cfu Besmet monster 4 +

Gehakt Blanco -

Vlees blanco -

10/12/08 Kaas 1 Besmette kaas 4 +





Kaas 2 Besmette kaas 4 +


Melk Besmette melk 1 +

Melkb Blanco melk -

17/12/08 gehakt a Besmet gehakt (varken-

kalf)

2 +

blanco Blanco gehakt * -

gehakt b Besmet gehakt (varken-

rund)

2 +

blanco Blanco gehakt -

Vlees a Besmet vlees (kotelet) 4 +

Blanco Blanco vlees * -

Vlees b Besmet vlees (biefstuk) 4 +

blanco Blanco vlees -

*BCR protocol (werkte niet altijd)

Verdere aanvulling van de besmette monsters is aanwezig in onderstaande tabel.

Tabel 18 Overzicht vervolg besmette monsters

Datum/analist Besmettingsniveau Monster Type Resultaat

(/ 25 g of ml)

08/01/09

AVB

6 cfu ME 1 Melk

Categorie 1

Aanwezig

ME 1 blanco Afwezig

ME 2 Aanwezig

ME 2 blanco Afwezig

GR 1 Versneden groenten

Categorie 3

Aanwezig

GR 1 blanco Afwezig

GR 2 Aanwezig

GR 2 blanco Afwezig

12/01/09

AVB

1 cfu KA 1 Kaas Aanwezig

KA 1 blanco Afwezig

KA 2 Aanwezig

KA 2 blanco Afwezig

15/01/09

AVB

4 cfu VL 1 Vlees Aanwezig

VL 1 blanco Afwezig

VL 2 Aanwezig

VL 2 blanco Afwezig

GE 1 Gehakt Aanwezig




GE 1 blanco Afwezig

GE 2 Aanwezig

GE 2 blanco Afwezig

14/01/09

CDS

3 cfu ME 1 Melk Aanwezig

ME 1 blanco Afwezig

ME 2 Aanwezig

ME 2 blanco Afwezig

GR 1 Versneden groenten Aanwezig

GR 1 blanco Afwezig

GR 2 Aanwezig

GR 2 blanco Afwezig

19/01/09

CDS


KA 1 blanco Afwezig

KA 2 Aanwezig

KA 2 blanco Afwezig

VL 1 Vlees Aanwezig

VL 1 blanco Afwezig

VL 2 Aanwezig

VL 2 blanco Afwezig

29/01/09

CDS

3 cfu GE 3 Gehakt Aanwezig

GE 3 blanco Afwezig

GE 4 Afwezig

(laag niveau)

GE 4 blanco Afwezig

30/01/09

CDS


GE 5 blanco Afwezig

15/01/09

MDM

3 cfu ME 1 Melk Aanwezig

ME 1 blanco Afwezig

ME 2 Aanwezig

ME 2 blanco Afwezig

GR 1 Versneden groenten Aanwezig

GR 1 blanco Afwezig

GR 2 Aanwezig

GR 2 blanco Afwezig

19/01/09

MDM


KA 1 blanco Afwezig

KA 2 Aanwezig




KA 2 blanco Afwezig

VL 1 Vlees / gehakt Aanwezig

VL 1 blanco Afwezig

VL 2 Aanwezig

VL 2 blanco Afwezig

GE 2 Aanwezig

GE 2 blanco Afwezig

29/01/09

MDM

5 cfu GE 3 Gehakt Afwezig

(laag niveau)

GE 3 blanco Afwezig

GE 4 Aanwezig

GE 4 blanco Afwezig

30/01/09

MDM


GE 5 blanco Afwezig

Een samenvatting van alle proefmonsters die parallel volgens de ISO norm en met de PCR methode werden

uitgevoerd is aanwezig in onderstaande tabel. De resultaten kwamen grotendeels overeen..

Tabel 19 Overzicht monsters parallel PCR en ISO








08320090 roomijs 2 - -

08320059 babyvoeding 4 - -

08320080 radijzen 4 - -

08320053 kip 4 - -

08381291 ham 4 - -

08381547 worst 2 - -

08381319 Schaaldieren 4 - -

08381629 chocomousse 2 - -

08381868 swabs 4 - -

08381869 swabs 4 - -

08381870 swabs 4 - -




08381871 swabs 4 - -

08381872 swabs 4 - -


08391961 ham 4 - -

08391965 worst 2 - -





08392090 swabs 4 - -

08392091 swabs 4 - -

08392092 swabs 4 - -

08392093 swabs 4 - -

08392094 swabs 4 - -


08391861 eiproduct poeder 1 + -


08391966 worst 2 - -

08391970 worst 2 - -

08391973 ham 4 + -


08392052 NHC dierl. eiwitten 1 + + (S. Anatum)




08391961 ham 4 - -


08401342 kaas 4 - -

08401530 vacht 4 + + (S. Senftenberg)

08401531 vacht 4 - -

08401532 vacht 4 + + (S. Virchow)

08401533 vacht 4 - -

08401534 vacht 4 - -

08401559 vloeibaar eiproduct 1 - -

08401679 volledige vogels 4 - +

08401751 kant en klaar product 4 - -

08431925 vleesbereidingen 2, 4 - -

08431960 vleesbereidingen 2, 4 niet uitgevoerd -

08440168 vleesproducten 4 - -




08440176 vleesbereidingen 2, 4 - -

08431443 kaas 4 - -

08440002 swabs 4 - -

08440003 swabs 4 - -

08440005 swabs 4 - -

08440006 swabs 4 - -






08440175 ber. rauwe eieren 4 - -

08440204 Filet américain 2 - -

08440221 koude schotel 4 - -

08440227 Filet américain 2 - -






08460041 gehakt 2 - -

08460042 Gehakt 2 - -

08460043 Gehakt 2 - -

08460044 Gehakt 2 - -

08460045 Gehakt 2 - -






08460084 Roomijs 2 - -

08460132 Vacht 4 - -

08460133 Vacht 4 - -

08460134 Vacht 4 - -

08460135 Vacht 4 - -

08460136 Vacht 4 - -

08460203 2 kleppige weekdieren 4 - -







08460229 Vleesproducten 4 - -

08460237 Mayonaise 2 - -





08460306 Koude zakouski 4 - -


08460056 Volledige vogels 4 - -

08451713 Vleessla 2 - -

08451745 Kipsla 2 - -

08451750 Charc. worst 2 - -






08451947 Kaas 4 - -

08501406 Kipsla 2 - -

08501502 Weekdieren 4 - -

08501866 Kipsla 2 - -

08510049 pudding 4 - -

08510243 pudding 4 - -



08510438 braadkippen 4 - -


08510133 bereidingen met rauwe

eieren

4 - -

08510468 vloeibare eiproducten 2 - -

08510544 koude zakoeski 4 - -




5 Foto’s van de methode

Hieronder volgen enkele foto’s van de methode.

PCR met bijhorende computer




PCR plaat in het PCR toestel brengen en starten van het toestel




Enten RVS en MKTTn

+ XLD plaat




+ Brilliance Salmonella




Bevestigingstest met API

VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION · 2014. 3. 11. · Er werd deelgenomen aan een ringanalyse...

Documents

Transcript of VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION · 2014. 3. 11. · Er werd deelgenomen aan een ringanalyse...