2012-05-04 Aanvullende informatie aanvraag 1 Ml 2-002.doc

AANVULLENDE INFORMATIE INTRODUCTIE IN HET MILIEU IM 12-002

Maatregelen rondom radicale prostatectomieHet is niet uit te sluiten dat het GGD na 3 weken nog aanwezig is in de prostaat,alhoewel op basis van de literatuur de te verwachten hoeveelheid virus gering zalzijn.1 Zoals beschreven in de aanvraag wordt het milieurisico van het GGD alsverwaarloosbaar klein beschouwd en zijn daarom specifieke veiligheidsmaatregelenniet noodzakelijk. Voor de operatieve verwijdering van de prostaat en drainerendelymfeklieren wordt de Erasmus MC “Veilig werken in de operatiekamer”Infectiepreventie richtlijn ZHOO6WIP gevolgd. Deze richtlijn is opgesteld omziekenhuispersoneel te beschermen tegen infectie met pathogene micro-organismenwaarmee de patiënt potentieel besmet kan zijn. Het volgen van deze richtlijn wordtals voldoende beschouwd om het risico van besmetting van ziekenhuispersoneel teminimaliseren. Dit is nu aangegeven onder A4.8 en de richtlijn ZHO06WIP isbijgevoegd als Attachment 8. Daarnaast is onder A4.l (punt 7) en A4.3 (punt 5)blootstelling aan prostaatweefsel toegevoegd als mogelijk scenario voor blootstellingvan het milieu aan het GGD.

Werkinstructies ziekenhuisapotheekDe werkinstructies voor de ziekenhuisapotheek zijn samengevat in de HospitalHygiene Regulations (Appendix 3). Deze zijn afgeleid van de werkinstructies dieopgesteld zijn voor het oncolytisch adenovirus AdV-Delta24-RGD en die door hetMinisterie van l&M zijn goedgekeurd (vergunning lM 08-008). Deze instructies zijn nutoegevoegd aan de aanvraag als Attachment 6 en 7, met verwijzing onder Al .3. Inverband met de nieuwbouw van het Erasmus MC zal de huidige productielocatie vande ziekenhuisapotheek binnen een jaar vervangen worden door een nieuwe locatie.De verwachting is dat de voorgestelde trial na deze vervanging zal starten. Debestaande werkinstructies voor het werken met een oncolytisch adenovirus(Attachment 6 en 7) zullen daarom afgestemd gaan worden op de situatie in denieuwe locatie en vervolgens als definitieve werkinstructies beschikbaar wordengesteld aan het Ministerie van l&M. De aanpassingen zullen geen structurelewijzigingen betreffen maar met name van logistieke aard zijn.

ML-ll laboratorium ziekenhuisapotheekUit veiligheidsoverwegingen voor de patiënt wordt het virus in de ziekenhuisapotheekstandaard voor toediening gereed gemaakt in een biologische veiligheidskast. Voorhet voor toediening gereed maken van het GGD zal worden voldaan aan de ML-llwerkvoorschriften. Dverigens voldoet de ruimte tevens aan de ML-ll inrichtingseisen.De handelingen die noodzakelijk zijn voor het gereedmaken voor toediening vallenonder de IM vergunning.

Sample analyse onder aangevraagde IM vergunningHet is correct dat de analyse van de samples die het GGD kunnen bevatten zalplaatsvinden onder de aangevraagde IM vergunning.

1 Freytag SO et al. Phase 1 study of replication-competent adenovirus-mediated double-suicide genetherapy in combination with conventional-dose three-dimensional conformal radiation therapy for thetreatment of newly diagnosed, intermediate- to high-risk prostate cancer. Cancer Res 2003;63:7497-506.

Pagina 1 van 3

2012-05-04 Aanvullende informatie aanvraag 1 Ml 2-002.doc

Herkomst regulatoire sequentieDe drie elementen in de regulerende sequentie, i.e. TARP promoter, PSA enhanceren PSMA enhancer, zijn allen van humane herkomst. Deze informatie is toegevoegdonder A2.7 en A2.9.

Toxiciteitsstudie en diermodelDe toxiciteitsstudie is uitgevoerd in NMRI muizen. NMRI muizen zijn een outbredmuizenstam die veelvuldig wordt gebruikt in geneesmiddelonderzoek, met name voortoxicologie (http:Ilwww.criver. com/sitecollectiondocuments/nmri-mice.pdf). Dezeinformatie is toegevoegd aan A3.1.

Er bestaat geen optimaal proefdiermodel om de effecten van dit GGD in demens na te bootsen. Het tropisme van het GGD is beperkt tot de mens en anderediersoorten hebben een sterk mindere permissiviteit. Daarnaast repliceert het GGDalleen in humane prostaatcellen. Er is daarom gekozen voor de NMRI muis alsgeschikt model voor een toxiciteitsstudie. Deze muizen zijn een goedgekarakteriseerd proefdiermodel voor toxicologie onderzoek en hebben een intactimmuunsysteem waardoor immunologische effecten op het GGO ook geanalyseerdkunnen worden. Bij de proefopzet is gekozen om de effecten van grotehoeveelheden circulerend GGO op andere organen te bestuderen en hiermee teanalyseren of lekkage van het GGD uit de prostaat in de circulatie veiligheidsrisicosvoor de patiënt met zich meebrengt. Aangezien het GGD niet repliceert in eenmuizenprostaat en onbekend is of eventuele lekkage vergelijkbaar is met de humanesituatie, is gekozen is voor een intraveneuze toediening. Deze informatie istoegevoegd aan A3.1.

Glycogeenstapeling in de lever in de toxiciteitsstudieGlycogeenstapeling in de lever is waargenomen 30 dagen na behandeling met de lxen lOx dosering. De oorzaak is onbekend, maar er wordt aangenomen dat ditgerelateerd is aan de intraveneuze behandeling met het GGD. Het is belangrijk omop te merken dat er geen data beschikbaar zijn over voedselinname. Het is bekenddat er voorafgaand aan necropsie sprake kan zijn van verhoogde voedselinname,wat kan resulteren in verhoogde glycogeenwaarden in de lever. Deze informatie istoegevoegd aan A3.1.

Shedding analyse in eerder uitgevoerde trialIn de eerder door ons uitgevoerde suicide gene therapy trial is op dag 2 en dag 7 nainjectie shedding geanalyseerd in urine en keeluitstrijkjes. Deze informatie istoegevoegd aan A3.1.

Genoomgrootte GGO ten opzichte van wildtype Ad5De genoomgrooffe van het GGD (35659 bp) is 99.2% ten opzichte van het wildtypeAd5 (35935 bp). Deze informatie is toegevoegd onder A2.7.

Binding aan heparan sulfaat proteoglycanen als infectie routeInfectie van de lever via binding aan heparan sulfaat op hepatocyten is beschreven inmuizen en non-humane primaten. Deze binding wordt gemoduleerd door factor X uitde stollingscascade. De rol van heparan sulfaat proteoglycanen binding als infectieroute in de mens wordt als beperkt beschouwd door een snelle inactivatie van Ad5 inde circulatie via binding aan erythrocyten. Deze route van infectie is daarom nietrelevant voor de huidige trial wat betreft verspreiding en toxiciteit. Binding aan de

Pagina 2 van 3

2012-05-04 Aanvullende informatie aanvraag 1M12-002.doc

CAR receptor is de belangrijkste infectie route voor Ad5 in de mens. In A3.1 is dit nuduidelijker beschreven.

Toelichting op oncolytische adenovirussen die in eerdere studies zijn gebruiktOnder A2.13 is een toelichting toegevoegd over de vier oncolytische adenovirussendie in eerdere studies zijn gebruikt.

Beschrijving in vitro assay voor virale besmetting in productiecellijnIn de in vitro assay voor virale contaminanten zijn indicator cellijnen geïnoculeerd metcellysaten van de Master CelI Bank en Working Celi Bank door middel van een 70 ±10 minuten incubatie bij 36°C ± 2°C. Vervolgens zijn deze kweken gedurende 14dagen tenminste drie keer per week geanalyseerd op virale cytopathische effecten.Na 14 dagen is het kweekmedium getest op haemadsorptie en haemagglutinatiewaarbij gebruik is gemaakt van erythrocyten van kippen, cavia’s en rhesusapen.Daarnaast is kweekmedium van dag 14 gebruikt voor een nieuwe inoculatie en isdeze tweede inoculatie getest op virale cytopathische effecten tot en met dag 28.Tevens is haemadsorptie en haemagglutinatie na 28 dagen getest. De Master CeilBank en Working Ceil Bank dienden negatief te zijn voor virale cytopathischeeffecten, haemadsorptie en haemagglutinatie.

Als indicator cellen zijn een humane longcellijn (MRC-5 cellen), een niercellijnvan de Afrikaanse groene aap (Vero cellen) en een humanebaarmoederhaiskankercellijn (HeLa cellen) gebruikt. Deze cellijnen zijn gekozenomdat in deze cellen een groot spectrum van virussen, met name humane virusseninclusief humaan adenovirus, kan groeien. Als positieve controle voor de MRC-5cellen is het mazelenvirus gebruikt en voor de Vero cellen en de HeLA cellen hetparainfluenza virus type 3. Er zijn geen gegevens bekend over de gevoeligheid vandeze assay voor wildtype adenovirus.

In de context van deze vraag is het belangrijk om op te merken dat het klinischGGO product zelfs bij een extreem hoge dosering van MOl 500 (500 GGO deeltjesper cel) geen replicatie laat zien in humane primaire bronchiale epitheelcellen,endotheelcellen, hepatocyten en urotheelcellen, in tegenstelling tot wildtypeadenovirus.2 Er zijn dus geen aanwijzingen dat wildtype adenovirus afkomstig uit deMaster Celi Bank of Working Celi Bank aspecifieke replicatie van het klinisch GGO

Q product zou veroorzaken.Onder A.3.3 is een beknopte beschrijving voor de in vitro assay toegevoegd.

Openbare kwal iteitscontrole gegevensEen meer uitgebreide samenvatting van de resultaten van de kwaliteitscontrole voorparameters die relevant zijn voor de milieurisicoanalyse is opgenomen onder A3.4.

2 Referentie 28: Adamson RE, Frazier A, Evans H, Chambers K, Schenk E, Essand M, Mitry R,Dhawan A and Maitland NJ. In vitro primary celi culture as a physiologically relevant method for preclinical testing of human oncolytic adenovirus. Hum Gene Ther 201 2;23:218-30.

Pagina 3 van 3

c0

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *

* KOPIE *