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364 Hortic. bras., v. 26, n. 3, jul.-set. 2008 O tomateiro é uma entre as muitas espécies autógamas cultivadas que teve sua diversidade genética reduzida drasticamente. Primeiro, devido à domesticação fora do seu centro de ori- gem e, segundo, pelo melhoramento genético que tem sido realizado ao lon- go dos anos com base em um número limitado de genótipos. Além disso, mui- tos genótipos foram perdidos ao longo do tempo, em conseqüência da substi- tuição ou do desaparecimento de espé- cies silvestres, cultivares obsoletas e cultivares locais (Saavedra et al., 2001). Conseqüentemente, se observa alto grau de uniformidade nas cultivares, tornan- do a cultura altamente vulnerável a pra- gas e doenças (Carelli, 2003). GONÇALVES LSA; RODRIGUES R; SUDRÉ CP; BENTO CS; MOULIN MM; ARAÚJO ML; DAHER RF; PEREIRA TNS; PEREIRA MG. 2008. Divergência genética em tomate estimada por marcadores RAPD em comparação com descritores multicategóricos. Horticultura Brasileira 26: 364-370. Divergência genética em tomate estimada por marcadores RAPD em comparação com descritores multicategóricos Leandro SA Gonçalves 1 ; Rosana Rodrigues 1 ; Cláudia P Sudré 1 ; Cíntia dos S Bento 1 ; Monique M Moulin 1 ; Maria Luiza de Araújo 2 ; Rogério F Daher 1 ; Telma Nair S Pereira 1 ; Messias G Pereira 1 1 UENF-LMGV, Av. Alberto Lamego, 2000, Pq. Califórnia, 28013-620 Campos dos Goytacazes-RJ; 2 Pesagro, Br 465, km 7, 23851-970 Seropédica-RJ; [email protected] Estudos de diversidade genética em tomateiro utilizando marcadores moleculares revelaram uma estreita base genética das cultivares modernas (Saavedra & Spoor, 2002). Por isso os bancos de germoplasma são de suma importância, pois colocam à disposição dos pesquisadores ampla fonte de recur- sos genéticos, que podem fornecer genes que conferem adaptação a diferentes estresses abióticos e resistência a inú- meras pragas e doenças. Entretanto, os acessos conservados em bancos de germoplasma são pouco utilizados de- vido a uma série de dificuldades e defi- ciências, tais como falta de documenta- ção, falta de descrição adequada e falta de avaliação das coleções, o que limita a ação de melhoristas (Gepts, 2006). A caracterização e a avaliação de acessos dos bancos de germoplasma são de fundamental importância, pois con- tribuem para maior conhecimento des- tes, viabilizando a detecção de possíveis genótipos a serem utilizados em progra- mas de melhoramento de plantas e detecção de possíveis duplicatas nos bancos de germoplasma (Valls, 1988). A presença de acessos duplicados em coleções de germoplasma aumenta o tra- balho do curador e reduz o espaço dis- ponível para conservação de outras amostras, sem contribuir para o enrique- cimento da variabilidade genética (Van Hintum & Vissen, 1995). Para complementar as informações e aumentar a base de conhecimento ge- RESUMO A estimativa da variabilidade genética existente em um banco de germoplasma é importante não só para a conservação dos recur- sos genéticos, mas também para aplicações no melhoramento de plantas. O presente trabalho teve como objetivo estudar a divergên- cia genética entre 78 acessos de uma coleção de germoplasma de tomateiro, com base em 74 marcadores RAPD e correlacionar esses resultados àqueles da caracterização morfoagronômica realizada para 27 descritores. Foi utilizado o agrupamento hierárquico UPGMA para analisar os dados, observando-se a formação de 13 grupos. Es- ses grupos foram correlacionados a cinco descritores (hábito de cres- cimento, tipo de folha, cor do fruto, número de lóculos e formato do fruto). Alguns grupos apresentaram peculiaridades, a exemplo do grupo IV, que reuniu acessos com frutos no formato de pêra; o gru- po VII com acessos resistentes a murcha-bacteriana e o grupo IX, que englobou acessos com folhas do tipo batata. As análises por bootstrap revelaram poucos agrupamentos consistentes. Houve cor- relação positiva e altamente significativa entre as matrizes geradas pelos 27 descritores qualitativos e pelos marcadores RAPD (t = 14,02). A correlação de Mantel (r = 0,39) foi altamente significativa, porém de baixa magnitude. O baixo valor verificado para esta correlação sugere que ambas as etapas de caracterização (morfoagronômica e molecular) são importantes para um conhecimento mais amplo e me- lhor discriminação entre os acessos de tomate. Palavras-chave: Solanum lycopersicum, recursos genéticos, UPGMA, marcadores moleculares, descritores morfológicos. ABSTRACT Genetic divergence among tomato accessions using RAPD markers and its comparison with multicategoric descriptors The estimation of genetic variability in a germplasm bank is important not only for the conservation of the genetic resources, but also for applications in plant breeding. The genetic divergence among 78 tomato accessions was studied, based on 74 RAPD markers. Also, a correlation between the molecular profile and 27 morphological and agronomic data was performed. Cluster analysis (UPGMA), used to study the data, resulted in 13 groups that were correlated with five descriptors (growth habit, leaf type, fruit color, locule number, and fruit shape). Some groups had particularities, such as group IV that assembled accessions with pear shape fruits; group VII, that clustered accessions with bacterial wilt resistance, and group IX, that gathered accessions with potato leaf type. Bootstrap analysis revealed few consistent clusters. The results showed a positive and significant correlation between the matrixes generated out of qualitative and molecular data (t = 14.02). Mantel’s correlation was highly significant, but with a low value (r = 0.39), which suggests that for a wise use of the germplasm bank accessions, both characterization, molecular and morphoagronomic, should be carried out. Keywords: Solanum lycopersicum, genetic resources, UPGMA, molecular markers, morphological descriptors. (Recebido para publicação em 25 de abril de 2007; aceito em 26 de agosto de 2008)

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O tomateiro é uma entre as muitasespécies autógamas cultivadas que

teve sua diversidade genética reduzidadrasticamente. Primeiro, devido àdomesticação fora do seu centro de ori-gem e, segundo, pelo melhoramentogenético que tem sido realizado ao lon-go dos anos com base em um númerolimitado de genótipos. Além disso, mui-tos genótipos foram perdidos ao longodo tempo, em conseqüência da substi-tuição ou do desaparecimento de espé-cies silvestres, cultivares obsoletas ecultivares locais (Saavedra et al., 2001).Conseqüentemente, se observa alto graude uniformidade nas cultivares, tornan-do a cultura altamente vulnerável a pra-gas e doenças (Carelli, 2003).

GONÇALVES LSA; RODRIGUES R; SUDRÉ CP; BENTO CS; MOULIN MM; ARAÚJO ML; DAHER RF; PEREIRA TNS; PEREIRA MG. 2008.Divergência genética em tomate estimada por marcadores RAPD em comparação com descritores multicategóricos. Horticultura Brasileira 26: 364-370.

Divergência genética em tomate estimada por marcadores RAPD emcomparação com descritores multicategóricosLeandro SA Gonçalves1; Rosana Rodrigues1; Cláudia P Sudré1; Cíntia dos S Bento1; Monique M Moulin1;Maria Luiza de Araújo2; Rogério F Daher1; Telma Nair S Pereira1; Messias G Pereira1

1UENF-LMGV, Av. Alberto Lamego, 2000, Pq. Califórnia, 28013-620 Campos dos Goytacazes-RJ; 2Pesagro, Br 465, km 7, 23851-970Seropédica-RJ; [email protected]

Estudos de diversidade genética emtomateiro utilizando marcadoresmoleculares revelaram uma estreita basegenética das cultivares modernas(Saavedra & Spoor, 2002). Por isso osbancos de germoplasma são de sumaimportância, pois colocam à disposiçãodos pesquisadores ampla fonte de recur-sos genéticos, que podem fornecer genesque conferem adaptação a diferentesestresses abióticos e resistência a inú-meras pragas e doenças. Entretanto, osacessos conservados em bancos degermoplasma são pouco utilizados de-vido a uma série de dificuldades e defi-ciências, tais como falta de documenta-ção, falta de descrição adequada e faltade avaliação das coleções, o que limitaa ação de melhoristas (Gepts, 2006).

A caracterização e a avaliação deacessos dos bancos de germoplasma sãode fundamental importância, pois con-tribuem para maior conhecimento des-tes, viabilizando a detecção de possíveisgenótipos a serem utilizados em progra-mas de melhoramento de plantas edetecção de possíveis duplicatas nosbancos de germoplasma (Valls, 1988).A presença de acessos duplicados emcoleções de germoplasma aumenta o tra-balho do curador e reduz o espaço dis-ponível para conservação de outrasamostras, sem contribuir para o enrique-cimento da variabilidade genética (VanHintum & Vissen, 1995).

Para complementar as informaçõese aumentar a base de conhecimento ge-

RESUMOA estimativa da variabilidade genética existente em um banco

de germoplasma é importante não só para a conservação dos recur-sos genéticos, mas também para aplicações no melhoramento deplantas. O presente trabalho teve como objetivo estudar a divergên-cia genética entre 78 acessos de uma coleção de germoplasma detomateiro, com base em 74 marcadores RAPD e correlacionar essesresultados àqueles da caracterização morfoagronômica realizada para27 descritores. Foi utilizado o agrupamento hierárquico UPGMApara analisar os dados, observando-se a formação de 13 grupos. Es-ses grupos foram correlacionados a cinco descritores (hábito de cres-cimento, tipo de folha, cor do fruto, número de lóculos e formato dofruto). Alguns grupos apresentaram peculiaridades, a exemplo dogrupo IV, que reuniu acessos com frutos no formato de pêra; o gru-po VII com acessos resistentes a murcha-bacteriana e o grupo IX,que englobou acessos com folhas do tipo batata. As análises porbootstrap revelaram poucos agrupamentos consistentes. Houve cor-relação positiva e altamente significativa entre as matrizes geradaspelos 27 descritores qualitativos e pelos marcadores RAPD (t = 14,02).A correlação de Mantel (r = 0,39) foi altamente significativa, porémde baixa magnitude. O baixo valor verificado para esta correlaçãosugere que ambas as etapas de caracterização (morfoagronômica emolecular) são importantes para um conhecimento mais amplo e me-lhor discriminação entre os acessos de tomate.

Palavras-chave: Solanum lycopersicum, recursos genéticos,UPGMA, marcadores moleculares, descritores morfológicos.

ABSTRACTGenetic divergence among tomato accessions using RAPD

markers and its comparison with multicategoric descriptors

The estimation of genetic variability in a germplasm bank isimportant not only for the conservation of the genetic resources, butalso for applications in plant breeding. The genetic divergence among78 tomato accessions was studied, based on 74 RAPD markers. Also,a correlation between the molecular profile and 27 morphologicaland agronomic data was performed. Cluster analysis (UPGMA), usedto study the data, resulted in 13 groups that were correlated withfive descriptors (growth habit, leaf type, fruit color, locule number,and fruit shape). Some groups had particularities, such as group IVthat assembled accessions with pear shape fruits; group VII, thatclustered accessions with bacterial wilt resistance, and group IX, thatgathered accessions with potato leaf type. Bootstrap analysis revealedfew consistent clusters. The results showed a positive and significantcorrelation between the matrixes generated out of qualitative andmolecular data (t = 14.02). Mantel’s correlation was highly significant,but with a low value (r = 0.39), which suggests that for a wise use ofthe germplasm bank accessions, both characterization, molecular andmorphoagronomic, should be carried out.

Keywords: Solanum lycopersicum, genetic resources,UPGMA, molecular markers, morphological descriptors.

(Recebido para publicação em 25 de abril de 2007; aceito em 26 de agosto de 2008)

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nético sobre os acessos de um banco degermoplasma, os marcadoresmoleculares têm sido de grande valia.Esses marcadores revelam diferençasgenéticas em um maior nível dedetalhamento e sem as interferênciascausadas pelo efeito ambiental, ofere-cendo vantagens em termos de discri-minação e rapidez (Binneck et al.,2002). Os estudos com marcadoresmoleculares trazem contribuições sig-nificativas para a compreensão da diver-sidade genética (Spooner et al., 2005).O benefício principal de se usarmarcadores moleculares é que estes sãobons indicadores da distância genéticaentre acessos, por causa da sua neutra-lidade seletiva. Assim, os marcadoresmoleculares estão sendo utilizados paraauxiliar o curador nas atividades demanutenção, caracterização e avaliaçãode germoplasma (Rao & Riley, 1994).

Este trabalho teve como objetivoscaracterizar parte do banco degermoplasma de tomateiro da UENFutilizando marcadores RAPD,quantificar a divergência genética entreacessos, identificar possíveis duplicatase correlacionar os dadosmorfoagronômicos aos moleculares.

MATERIAL E MÉTODOS

Na caracterização molecular foramutilizados 78 acessos de Solanumlycopersicum do banco de germoplasmada Universidade Estadual do NorteFluminense Darcy Ribeiro (UENF) (Ta-bela 1). Todos os acessos foram cedidospela Empresa de Pesquisa Agropecuáriado Estado do Rio de Janeiro (Pesagro–Rio), Estação Experimental deSeropédica. Desse total, 58 acessos fo-ram caracterizados também com base em27 descritores morfoagronômicos(Karasawa, 2005). Nesta caracterizaçãoforam utilizados os descritores: cor epubescência do hipocótilo, hábito decrescimento, densidade da pubescênciae comprimento do internódio do caule,densidade da folhagem, tipo de folha, tipoe número de inflorescências, número deflores por inflorescência, cor da corola edo fruto imaturo, frutos porinflorescência, pubescência e forma dofruto, presença de ombro verde no fruto,cor do fruto maduro, intensidade da cor

externa do fruto, cor da pele do fruto edo pericarpo, presença de fruto oco, nú-mero de locos, forma do corte transver-sal do fruto, da cicatriz do pistilo no fru-to e do ápice do fruto, rachadura radialno fruto e rachadura concêntrica.

Os acessos de tomateiro foram se-meados em bandejas de poliestireno de128 células. Após 15 dias do semeio asmudas foram transplantadas para potesplásticos com capacidade para 0,5 Lcontendo substrato Plantmax®. As plan-tas foram cultivadas em casa-de-vege-tação, na Unidade de Apoio à Pesquisada UENF, em Campos dos Goytacazes(RJ). Trinta e cinco dias após o semeio,amostras de 3,0 g de folhas jovens fo-ram coletadas, identificadas e imediata-mente mergulhadas em N

2 líquido. Uma

vez no laboratório, este material foiacondicionado em ultrafreezer a -86ºC.Posteriormente, estas folhas forammaceradas em N

2 líquido e acondicio-

nadas em tubos de 15 mL.

Cerca de 300 mg de tecido maceradoforam transferidos para tubos de 2,0 mLe imersos em N

2 líquido para a extração

de DNA (Daher et al., 2002). Aquantificação foi realizada em géis deagarose 0,8% (p/v) submetidos àeletroforese. Alíquotas de DNA foramaplicadas nos poços do gel ao lado deum marcador com concentração conhe-cida (λ). A concentração das amostrasfoi estimada por comparação visual daintensidade de fluorescência das bandasdo DNA (λ). Posteriormente, o DNA foidiluído (10 ng µL-1) para as reações deRAPD.

As reações de amplificação foramfeitas em termociclador modeloMastercycler gradient (Eppendorf), em20 µL contendo: 10 mmol L-1 Tris HCl,pH 8,3; 50 µmol L-1 KCl; 2,4 mmol L-1

MgCl2; 100 µM dATP, dCTP, dGTP e

dTTP; 0,4 µM de iniciador; 20 ng deDNA genômico e 0,75 unidade de TaqDNA-polimerase. Foram utilizadosmicrotubos em que foram colocados 2µL de DNA e, paralelamente, prepara-do um mix contendo todos os demaisreagentes nas concentrações menciona-das, cada mix contendo um iniciadordiferente. Desta solução, foram retira-dos 18 µL e adicionados aos microtubos,totalizando os 20 µL da reação. As rea-ções foram submetidas a 45 ciclos de

amplificação após desnaturação iniciala 95°C por 1 minuto. Cada ciclo consis-tiu de 1 minuto a 94°C, 1 minuto a 36°Ce 2 minutos a 72°C. Ao final de 45 ci-clos, foi realizada uma extensão final de7 minutos a 72°C. Os produtos de am-plificação foram submetidos aeletroforese (100 V durante 90 minutos)em géis de agarose 1,4% (p/v), utilizan-do o tampão de corrida TBE 1 X. Osgéis foram corados com brometo deetídeo e fotografados sob luz UV (EagleEye II - Stratagene).

Efetuou-se uma triagem de iniciado-res que fossem capazes de detectarpolimorfismo. Para esta verificação,foram selecionados quatro acessos di-vergentes com base nos dadosmorfoagronômicos (UENF 155, UENF166, UENF 196 e UENF 197). Consi-derando-se os quatro acessos, foram tes-tados 358 iniciadores dos respectivoskits OPA, OPAA, OPAB, OPAC, OPAD,OPAH, OPB, OPC, OPD, OPE, OPG,OPI, OPK, OPN, OPO, OPT, OPW,OPV e OPX da Operon Technologies,selecionando-se como polimórficos osiniciadores OPAA 03, OPAA 04, OPAA18, OPAB 05, OPAB 07, OPAB 09,OPAB 14, OPAC O6, OPAH 01, OPC08, OPC 09, OPC 11, OPC 15, OPE 06,OPE 07, OPE 18, OPG 16, OPI 12, OPI20, OPK 16, OPN 06, OPN 08, OPO10, OPT 16, OPW 06, OPW 13 e OPV12.

As bandas foram avaliadas visual-mente em todos os acessos, consideran-do-se para análise apenas aquelas maisevidentes e consistentes nos 78 acessosavaliados. Foi elaborada uma matriz dedados binários correspondente à presen-ça (1) ou ausência (0) das bandas. Paraformação da matriz de dissimilaridadefoi utilizado o complemento aritméticodo Índice de Jaccard. A partir destesdados, foi realizado o agrupamento dosacessos utilizando o método hierárqui-co de UPGMA (Unweighted Pair-Group Method Using an ArithmeticAverage). A validação dos nós apresen-tados no dendrograma foi feita por meioda metodologia do bootstrap, que é uminstrumento de simulação estatística quetem como princípio estudar e avaliar aestabilidade dos agrupamentos obtidosa partir de matrizes de dissimilaridade.Essa técnica consiste em compor uma

Divergência genética em tomate estimada por marcadores RAPD em comparação com descritores multicategóricos

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amostra comum originada da junção dasamostras individuais de cada população.A partir dessa amostra, são obtidas porreamostragem com reposição amostrasdo mesmo tamanho daquelas extraídasindividualmente de cada população. Aestatística do teste é computada e o pro-cedimento é repetido milhares de vezes.Com os milhares de valores da estatísti-ca é possível obter uma distribuição deprobabilidade empírica e efetuar testesde hipóteses e estimação de parâmetros(Lavoranti, 2003). No presente trabalho,a análise de bootstrap foi conduzidaconsiderando-se 1000 reamostragens.

Com base nos dados moleculares, foirealizada uma comparação com os cin-co descritores importantes na discrimi-nação dos acessos na etapa de caracte-rização morfoagronômica. Com exce-ção do descritor “tipo de folha”, os ou-tros quatro descritores foram apontadospelos melhoristas como sendo de impor-tância para a caracterização dos aces-sos dos bancos de germoplasma(Rodrigues et al., 2002).

No intuito de comparar os resulta-dos moleculares aos resultados de ca-racterização morfoagronômica já dispo-níveis, foi necessária a transformaçãodos dados qualitativos obtidos a partirdos 27 descritores morfoagronômicosem dados binários, para a realização daanálise de dissimilaridade por meio docomplemento aritmético do índice deJaccard. Obtidas as matrizes dedissimilaridade morfoagronômica emolecular, ambas foram comparadaspelo teste de correlação de Mantel e peloteste t. Todos os dados foram analisa-dos pelo programa GENES (Cruz,2006), com exceção do dendrogramaobtido pelo método UPGMA, geradocom auxílio do programa STATISTICA(1995).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Cada iniciador produziu bandas deintensidade variável, facilmente detec-tadas, e bandas inespecíficas que foramdescartadas. Os 27 iniciadores utiliza-dos produziram 132 bandas. Destas, 74foram polimórficas, ou seja, em média,cada iniciador gerou 2,74 bandaspolimórficas. O número total de bandaspolimórficas por iniciador variou de 1 a

6, sendo os iniciadores OPE 18 e OPG16 os mais polimórficos, gerando seisbandas cada um.

Detectou-se diversidade genéticaentre os acessos de tomateiro estudadoscom base na técnica do RAPD, confor-me já descrito em outros trabalhos comtomateiro (Williams & St. Clair, 1993;Villand et al., 1998; Noli et al., 1999;Carelli et al., 2006). Utilizando a ma-triz de Jaccard, identificou-se como maisdistantes os acessos UENF 202 e UENF1662, com distância de 0,34, enquantoos acessos UENF 1667 e UENF 1701foram os mais similares, com distânciade 0,01. A distância média observadaentre os acessos foi 0,19 (± 0,04). Carelliet al. (2006) analisando 35 acessos detomateiro com 20 iniciadores RAPDobtiveram uma distância que variou en-tre 0,43 e 0,82, com média de 0,65 (±0,09). Entretanto, Villand et al. (1998)analisaram 96 acessos de tomateiro com41 iniciadores RAPD e obtiveram dis-tâncias que variaram entre 0,01 e 0,50,com média de 0,16 (±0,08). Essas dife-renças se devem provavelmente à ori-gem dos acessos estudados.

Um corte realizado na distância de0,18, considerando-se o ponto de mu-dança abrupta, possibilitou a formaçãode 13 grupos (Figura 1). O grupo I foiconstituído pelo maior número de aces-sos, totalizando 51 acessos, ou seja, 65%do total (Tabelas 1 e 2). Este foi o grupoque apresentou o maior número de ban-das polimórficas, evidenciando umamaior variabilidade genética em relaçãoaos demais grupos formados. Conside-rando-se o fato desse grupo apresentaruma alta variabilidade intra-grupo e reu-nir um número grande de acessos, op-tou-se por subdividi-lo em doissubgrupos. O subgrupo I.A foi consti-tuído por 26 acessos e o subgrupo I.Bfoi formado por 25 acessos. Ainda as-sim, foi possível notar que os subgruposformados tiveram uma maior presençade bandas polimórficas, associadas a ummaior número de acessos agrupados emrelação a todos os demais grupos.

Embora formados exclusivamente apartir dos perfis moleculares, os gruposapresentaram algumas característicasfenotípicas peculiares. Em relação aohábito de crescimento, observou-se queo crescimento indeterminado foi predo-

minante nos acessos estudados, comexceção dos acessos UENF 160 e UENF157 (Tanzimech), de crescimento deter-minado e semi-determinado, respectiva-mente. O acesso UENF 157 permane-ceu isolado no grupo X. Para o tipo defolha, três acessos (UENF 209, UENF222 e UENF 224), cujas plantas foramas únicas a possuírem folhas do tipobatata, característica que determina avariedade botânica grandifolium, fica-ram reunidos no grupo IX.

O grupo VII reuniu os acessos UENF1662 (C38 D Novo) e UENF 1663 (San-ta Bárbara) provenientes de um progra-ma de melhoramento visando resistên-cia a Ralstonia solanacearum (murcha-bacteriana) conduzido na Amazônia(Cheng & Chu, 2002). Embora o grupopossa ser caracterizado pela sua resis-tência e por outros caracteres similarescomo a presença de plantas de hábitode crescimento indeterminado, folhas dotipo normal e frutos vermelhos emultiloculares, em relação ao formatodo fruto, o acesso C38 D Novo produ-ziu frutos no formado globular, enquantoo acesso Santa Bárbara produziu frutosno formato cilíndrico alongado. O gru-po VIII reuniu dois acessos (Seco eRoquesso) que entre as similaridadesproduziram frutos vermelhos,multiloculares e de formato globular.Esses acessos são provenientes de cole-tas junto a pequenos produtores e trata-se de sementes conhecidas na literaturacomo heirloom, ou seja, mantidas hámuitas décadas por produtores.

Noli et al. (1999), utilizando demarcadores RAPD, não conseguiramdistinguir cultivares de tomate com ca-racterísticas fenotípicas distintas. Nopresente estudo foi possível identificargrupos contendo acessos com caracte-rísticas fenotípicas idênticas entre si ediferentes dos demais acessos de outrosgrupos. Por exemplo, os grupos VII eXII reuniram respectivamente os aces-sos resistentes a Ralstoniasolanacearum e os acessos com frutosamarelos. Por outro lado, o único aces-so de hábito determinado (UENF 160)não pode ser distinguido de outros dehábito indeterminado com base nosmarcadores RAPD.

Ramos (2003) descreve que são con-siderados ramos consistentes em uma

LSA Gonçalves et al.

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análise de agrupamentos, para a varia-ção entre locos, aqueles com valores debootstrap superiores a 60%. Com basenessa premissa, no presente trabalho osagrupamentos referentes aos acessosUENF 1667 e UENF 1701 (99,4%,

subgrupo IB); UENF 1702 e UENF1704 (64,5%, grupo XII); UENF 177 eUENF 225 (67,9%, subgrupo IB);UENF 155 e UENF 179 (62,7%,subgrupo IB), UENF 1702 e UENF 178(82,6%, grupo XII); UENF 1662 e

UENF 1663 (61,8%, grupo VII); UENF104 e UENF 140 (100%, subgrupo IA),e UENF 104 e UENF 155 (80,1%, gru-po I) podem ser considerados consisten-tes. Os outros ramos formados devemser considerados pouco consistentes,

Tabela 1. Acessos de tomate caracterizados com marcadores RAPD e agrupados pelo método UPGMA (Tomato accessions characterizedusing RAPD markers and clustered by UPGMA method.) Campos dos Goytacazes, UENF, 2007.

Divergência genética em tomate estimada por marcadores RAPD em comparação com descritores multicategóricos

Figura 1. Dendrograma obtido pelo método UPGMA a partir das medidas de dissimilaridade genética entre 78 acessos de tomate caracte-rizados por marcadores RAPD (Dendrogram of genetic dissimilarity among 78 tomato accessions characterized with RAPD markers, basedon the UPGMA method). Campos dos Goytacazes, UENF, 2007.

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devido à variação existente na informa-ção produzida pelos locos, ou seja, mu-dando-se os locos, estes grupos não sãonecessariamente reproduzidos. Em ou-tros trabalhos, por exemplo, no estudo dediversidade genética em uma populaçãode 148 híbridos de Murcott e laranja Pêra,por meio da utilização de marcadoresfAFLP e RAPD, Bastianel et al. (2006)também verificaram pouca consistênciaestatística pela análise de bootstrap en-tre os grupos formados. Creste et al.(2005) investigando o relacionamentogenético entre quinze acessos origináriosdo Brasil de Arachis e Heteranthae utili-zando marcadores RAPD, mostraramque a análise de bootstrap dividiu os aces-sos em dois grupos consistentes. O pri-meiro grupo conteve os acessos Arachise, o segundo, os acessos de Heteranthae.Entretanto, deve-se ressaltar que esse re-sultado foi obtido com acessos de duasespécies diferentes, enquanto no presen-te estudo os acessos estudados são de umaúnica espécie.

Os ramos consistentes indicam acoerência dos resultados obtidos e, em

termos de divergência entre os acessos,demonstram que existe uma grande pro-babilidade de que os grupos formadosreúnam de fato os genótipos mais simi-lares. Esse fato tem implicações para omelhoramento de plantas, pois os aces-sos mais similares em geral não são uti-lizados em cruzamentos, já que, nessescasos, a produção de indivíduos comalto valor heterótico não é esperada en-tre genitores muito próximos genetica-mente. Por outro lado, espera-se a ob-tenção de maior variabilidade com a re-comendação de cruzamentos entre aces-sos mais divergentes.

A comparação entre os resultados doestudo da diversidade genética realiza-da com base em 27 descritoresmorfoagronômicos qualitativos e osmarcadores RAPD demonstrou, para osacessos em estudo, padrões dedissimilaridade distintos entre as matri-zes geradas pelos dados qualitativos emoleculares. Com base na matrizmorfoagronômica os acessos mais di-vergentes foram UENF 160 e UENF224, distantes 0,66, enquanto os aces-

sos UENF 199 e UENF 219 foram osmais similares com uma distância de0,04. Em média a distância observadafoi de 0,37 (±0,0941). Em contrapartida,na matriz gerada a partir de dadosmoleculares foi observado que os aces-sos mais divergentes foram UENF 160e UENF 178 com uma distância de 0,32,enquanto os acessos UENF 169 e UENF219 foram os mais similares com umadistância de 0,05. Em média a distânciaobservada foi de 0,1927 (±0,0424) paradados moleculares.

Apesar das divergências em simila-ridade, houve correlação positiva e al-tamente significativa entre as matrizesde distância formadas pelas caracterís-ticas morfoagronômicas e pelosmarcadores RAPD (t = 14,02). Isso sig-nifica que os resultados da caracteriza-ção morfoagronômica geraram matrizesde distância que se assemelham à ma-triz gerada pela caracterizaçãomolecular. Em relação à correlação deMantel, obteve-se um valor de correla-ção relativamente baixo (r = 0,39), quepode ser atribuído às diferenças ineren-

Tabela 2. Identificação dos grupos e subgrupos, número de acessos por grupo e subgrupo, número de iniciadores, número de bandaspolimórficas e características fenotípicas predominantes em cada grupo de acessos de tomate (Group and subgroup identification, numberof accessions in each group or subgroup, number of polymorphic primers and bands, and predominant phenotypic characters in each groupof tomato accessions). Campos dos Goytacazes, UENF, 2007.

1/Para identificação dos acessos, consulte a Tabela 1 (for accession identification, see Table 1); 2Características fenotípicas predominantesnos grupos, relativas aos descritores hábito de crescimento, tipo de folha, coloração dos frutos, número de lóculos e formato do fruto, combase em Karasawa (2005). (Phenotypic characters predominant in the groups in relation to the descriptors growth habit, leaf type, fruit color,number of locules, and fruit shape, based on Karasawa, 2005).

LSA Gonçalves et al.

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tes aos marcadores fenotípicos emoleculares. Enquanto os marcadoresRAPD cobrem uma proporção maior dogenoma, incluindo regiões não codantes,os marcadores fenotípicos são a expres-são exclusiva das regiões codantes. Con-seqüentemente, o perfil molecular poderepresentar regiões não correlatas comas características fenotípicas estudadas.O baixo valor verificado para esta cor-relação sugere que ambas as etapas decaracterização (morfoagronômica emolecular) são importantes para o co-nhecimento mais amplo e melhor dis-criminação entre os acessos do bancode germoplasma. Resultado semelhan-te foi observado por Kamada (2006),que correlacionou caracteres fenotípicoscom marcadores RAPD em quatro po-pulações de fáfia (Pfaffia glomerata).Neste trabalho foi observada correlaçãoaltamente significativa pelo teste Z, en-tretanto com valor baixo de correlação(0,28), concluindo-se que não é reco-mendável utilizar apenas um tipo demarcador, seja ele fenotípico oumolecular, para estimar a diversidade noaspecto qualitativo, uma vez que as cor-relações entre as distâncias genéticasforam baixas.

Entretanto, outros relatos indicamque é possível observar alta correlaçãoentre dados morfoagronômicos emoleculares. Por exemplo, Garcia et al.(1998), trabalhando com 32 linhas me-lhoradas de melão, correlacionaramduas matrizes, sendo uma formada por115 bandas polimórficas obtidas atravésda técnica de RAPD e, a outra, por 24características agronômicas. Os autoresobtiveram uma correlação de 79% peloteste de Mantel entre as duas matrizesestudadas.

Esta aparente discrepância entre re-sultados pode ser justificada pelas ca-racterísticas de cada espécie estudada,pelo tipo de descritor morfoagronômicoutilizado na caracterização e pelo núme-ro de iniciadores para os quais se verifi-cou polimorfismo. A constatação da va-riação entre os valores obtidos para acorrelação entre as características de-monstra a atenção que os curadores dosbancos de germoplasma devem ter paraa caracterização mais abrangente dosacessos, conduzindo diversas etapas de

caracterização e considerando o maiornúmero possível de descritores.

No caso do tomateiro, espécieautógama em que é possível não só ob-ter novas linhagens com característicassuperiores, mas também explorar agro-nomicamente o híbrido F

1, é importan-

te não só conhecer a divergência gené-tica com base em marcadoresmoleculares, mas também conhecer ascaracterísticas fenotípicas de interessepara produção agrícola. Dessa forma, aanálise conjunta desses caracteres podepermitir uma visão mais abrangente euma utilização mais eficiente da cole-ção de germoplasma.

AGRADECIMENTOS

Os autores agradecem à Faperj, pelaconcessão da bolsa de mestrado ao pri-meiro autor.

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