Golden sponsors Silver sponsors - OLV Z · Leica: geslaagd (2019-1 vals positief 2019-3...

Golden sponsors Silver sponsors

Andere sponsors

Resultaten EKE IHC 2019/2+3

De Wiest Bart

10 december 2019

OLV Ziekenhuis Aalst

EKE IHC 2019-3

Antistoffen: tweede semi-kwantitatieve EKE

ER reassessment: n=10

PR: n=65

Her2: n=64

Panel:

Scoring 04/11/2019 (UZ Brussel)

Onafhankelijk, in consensus

4 pathologen

Dr. B. Lelie (AZ Zeno)

Dr. A.M. Schelfhout (OLV Aalst)

Dr. K. Lambein (AZ St-Lucas Gent)

Dr. A.M. Dierick (Sciensano)

Procedure panelbeoordeling

• Literatuurstudie m.b.t. antilichaam: NordiQC website, datasheets, guidelines, …

– Wat moet / kan aankleuren?

– Wat mag zeker niet aankleuren?

• Vastleggen criteria aankleuring per AS

• Beoordeling

– Consensus binnen het panel

– Reden voor afwijkend resultaat bij borderline/onvoldoende

– Evt. aanbevelingen protocol

eindbeoordeling

Beoordelingscriteria HER2

Optimaal:- Concordantie met verwacht resultaat biopten

- de kleuring van biopt 4 (IHC 2+ ampl.) komt overeen met een score 2+

- geen of maximaal zwakke cytoplasmatische aankleuring die niet interfereert met de interpretatie

Goed: - Algemeen zwakke aankleuring

- Zeer zwakke tegenkleuring: bemoeilijkt interpretatie

- Biopt 5 (3+) kleurt als 2+ downgrade

- IHC 0 vals positief of IHC biopt 1 (1+) kleurt als 2+ downgrade

- cellijnen:

- A (IHC 0) kleurt als 1+

- of B (IHC 1+) kleurt als 2+

- of C (IHC 2+) kleurt als 1+

- er is cytoplasmatische aankleuring die interfereert met de interpretatie downgrade

actie: optimalisatie nuttig

Beoordelingscriteria HER2

Borderline:

- één van de biopten/cellijnen (C) is vals negatief

- of twee van de biopten/cellijnen zijn vals positief

actie: optimalisatie nodig

Onvoldoende:

- Biopt 4 (IHC 2+ geamplificeerd) is vals negatief

- en/of twee van de biopten/cellijnen zijn vals negatief

- of constante overkleuring

actie: dringend optimalisatie nodig

Protocol HER2

n= 64

Conc.: n=24

Geen wijziging tov EKE2019-1: ~40% conc. (<>andere EKE ~ 20% conc.)

Dako: polyclonaal: n=23

Leica/Novocastra: clone CB11: n=1

RTU: n=40

tov EKE2019-1 : +1(Roche 4B5)

Dako Herceptest: n=1

Roche :rm 4B5: n=38

Leica/Novocastra: clone CB11 : n=1

Protocol HER2

Polyclonaal conc. Dako

Dako datasheet Autostainer: Ph6: 1/600-1/800 ; 20min RT

Ph9: 1/1000-1/1200 ; 20min RT

op Autostainer: Flex+ Inc.tijd : 15- 20min RT

10 verdunningen 2019-1 (1/150 - 1/800)

4 verdunningen: 1/150 - 1/500

HIER 2019-1: 2/14 pH9 geen, enkel pH6

op Omnis: Flex+ 5 verdunningen: 1/100 - 1/600

6 verdunningen: 1/100 – 1/400

Inc.tijd : 12- 20min RT/32°C

HIER 2019-1: enkel pH6 2/13 pH9

Dako AS op Roche XT: UV kit 1/200 32’ bij 36°C HIER CC1 8’ UV

1/300 28’ RT (+amp) HIER CC1 30’ UV

Protocol HER2

Clone 4B5 RTU Ventana BMK GX: UV kit

AS: 16’ - 32’ bij 36°C /RT

+ amplifier: 3 (2019-1: 2) datasheet?

HIER: CC1 30’ - 38’

BMK XT: UV kit 1/2 Datasheet: AS16’ ; CC1 mild (geen amp)

AS: 16’ bij 36°C ; HIER: CC1 30’ +/- amplifier

BMK Ultra: UV kit 20% datasheet: AS12’ ; CC1 mild

AS: 8’ - 32’ bij 36°C (25%: 16’ )

+ amplifier (n=10): 4’ - 8’

HIER: CC1 8’ - 64’ (80% CC1 mild)

BMK iView kit (n=2) XT: 32 bij 36°C ; HIER: CC1 60’ (= datasheet)

Ultra: AS 32’ RT ; HIER: CC1 36’ (~datasheet)

Protocol HER2

Herceptest Dako RTU

1 deelnemer

Omnis platform

AS inc. 20’ bij 32°C ; HIER pH6 30’

Datasheet?

Clone CB11 Leica

conc. :

Datasheet CB11 (2008): AS 1/40 inc. 60min bij 25°C. ; HIER niet aanbevolen!

Dako Autostainer: AS 1/800 20’ RT ; HIER pH9 onvoldoende 2019-1

zelfde labo: AS 1/250 20’ RT ; HIER pH9 optimaal 2019-3

RTU: Leica BondIII: AS inc. 15’ bij 20°C ; HIER pH9 20’ (borderline vals pos.)

zelfde protocol: goed 2019-3

Antistof HER2 Samenstelling EQA blok

Weefsel

Biopt 1: IHC 0, Non Amplified

Biopt 2: IHC 1+ Non Amplified

Biopt 3: IHC 2+ Non Amplified

Biopt 4: IHC 2+ Amplified

Biopt 5: IHC 3+ Amplified

Cellijn

Antistof HER2 : overzichtDako Herceptest by NordiQC

2+ 3+

1+

Antistof HER2 : overzichtVentana Pathway by NordiQC

2+ 3+

1+

Antistof HER2

3+ OK? Optimaal?

3+ cellijn

Dako poly A0485 1/300 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis

3+ histo

Antistof HER2

3+ histo3+ cellijnDako poly A0485 1/300 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis

optimaal resultaat Dako poly A0485 1/400 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis

Optimaal? 3+ OK ?

Antistof HER2

te zwak ‘vals negatief’

3+ histo3+ cellijnDako poly A0485 1/300 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis

aanvaardbaarte zwak

Antistof HER2

2+ cellijn

2+ Optimaal?

Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis 2+ histo

Antistof HER2

2+ cellijn

2+ EQA histo

Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis

2+ histo onvoldoende

2+ histo optimaal

Antistof HER2

Ventana BMK Ultra: ultraView

tegenkleuring

OK

Antistof HER2

Zwakke tegenkleuring

Resultaatbespreking HER2

Algemeen

n=64 2019-3 2019-1 NQC run B27

n % Suff. n n=324 suff.

optimaal 34 53 %86%

43%56 %

83%

86 %goed 21 33 % 3%

13%

borderline 1 1,5 % 19%

44 %

2 %

onvoldoende 8 12,5 % 25% 12%

In house, LDT


Opgesplitst per clone : conc. polyclonal

Dako% suff2019-3

2019-1 % suff2019-1

NQC B27

2019

CB11 LeicaNovocastra

% suff

n=23 2019-3

2019-1

optimaal 6 26% 0 0% 75% 1 0 -

goed 9 39% 1 4% 2% 0 0 -

borderline 0 - 8 35% 5% 0 0 -

onvoldoende 8 35% 14 61% 18% 0 1 -

Totaal suff 65% 1/1

NQC B27 2019 77% (34/44) 67% (4/6)


Opgesplitst per clone: RTU

HerceptestDako

% suff

4B5 Ventana % suff CB11 LeicaNovocastra

% suff

2019-3 2019-1 2019-3 2019-1 2019-3 2019-1 2019-3 2019-1

optimaal 1 0 - 26 27 68% 73% 0 0 -

goed 0 0 - 11 7 18% 19% 1 0 -

borderline 0 0 - 1 3 - - 0 1 -

onvoldoende 0 1 - 0 0 - - 0 0 -

Totaal suff 1/1 0/1 86% 92% 1/1 0/1

NQC B27 2019

88% (n=28) 3 niet geslaagd

94% 78% (5/7) 2 poor result


Besluit: 37% conc. vs 63% RTU

NQC B27: 14% gebruikt poly AS Dako<> EKE 36%

Herceptest: slechts 1 gebruiker op Omnis (NQC B27: 9%)

Per toesteltype:

Dako Autostainer: 8/9 poly AS Dako, 1x CB11

Dako Omnis: 13/14 poly AS Dako, 1x RTU Herceptest

Ventana platformen: 2/39 gebruiken poly AS Dako

Gebruik datasheets

Ventana:

vnl. aanpassingen aan AS inc.tijd geen probleem

36% gebruikt amplifier

Amplifier in 35% te sterke aankleuring (1+ 2+) downgrade ‘goed’ ; geen niet geslaagde

Dako:

Beduidend minder variatie in protocol t.o.v. 2019-1

Verdunningen binnen voorgestelde range

Hoogste verdunningen (beide toestellen) buiten gebruik

Effect pH type:

Autostainer: enkel pH6

Omnis: 85% pH6 (82% geslaagd) ; 15% pH9 (enkel goed) ; 1 niet meegedeeld

vals neg. 2+ en/of 3+: niet geslaagd: = protocol (1/300-350)

optimaal echter mogelijk


Besluit: Suff. 86 %

% geslaagd: +30% uitsluitend Dako poly, Ventana status quo

Resultaten dicht bij NordiQC Run B27

Minder optimale resultaten

Aanvaardbare, maar zwakke 2+ ; achtergrond ; (zeer) zwakke tegenkleuring ‘goed’

OK, maar…


Besluit: Suff. 86 %

Resultaten dicht bij Run B27



OK, maar…

Globaal: nog steeds 12,5% onvoldoende (vals negatieve 2+ amplified)

<>NordiQC algemeen: Na 27 NQC runs nog steeds 14% niet geslaagd (12% onvoldoende)

AS in ‘onvoldoende’ beoordeelde groep:

35% conc. AS scoort onvoldoende (>< EKE2019-1: 61%)

Reden: strikte interpretatie: 2+ amplified en 3+ cores moeten aangetoond kunnen worden

8/8 vals negatieve IHC 2+ amplified klinische impact!

4/8 vals negatieve IHC 2+ amplified én cellijn 2+ EQ

4/8 ook vals negatieve 3+ cellijn (kleurt als 2+)

4/8 vals negatieve cellijn 1+ (kleurt niet aan)

1/8 vals negatieve IHC 2+ (kleurt als 1+) én IHC 3+ (kleurt als 2+)

Enkel Dako poly

Onafh. van toesteltypes

Over ganse verdunningsrange, maar identieke AS tijd en HIER type


Besluit: Suff. 86 %

Resultaten dicht bij Run B27



OK, maar…

AS in ‘geslaagd’ beoordeelde groep:

Leica CB11: 2/2 geslaagd (conc.: gewijzigde verdunning) >< 2019-1: 0/2

Dako poly: EKE2019-1: 3% (Ventana platform) 2019-3: 65% (Ventana én Dako platformen)

Ventana 4B5:

97% geslaagd

1 niet geslaagd: standaardprotocol: 2+ cellijn vals negatief + alg. achtergrond (tech.?)

Dako poly op Ventana: enkel goed resultaat <> 2019-1 goed/onvoldoende


Besluit:


Besluit: Gebruik controles:

Verplichting vanaf deze EKE

98,5% (<>2019-1: 55%)

Conformiteit?

Goede controle = dynamic range

0, 1+ en/of 2+(voorkeur amplified), 3+

17% niet conform guidelines

Niet conform:

Geen dynamic range (1 controleweefsel)

Geen negatieve controle (0/1+)

Geen 3+ aankleuring aantoonbaar/aanwezig

1/9 onvoldoende resultaat

Sanbio

Controls

Inclusion of 2+ tumours with and without HER-2 gene amplification in the control material for both EQA and

internal quality control is essential to evaluate precision and performance stability of the IHC HER-2 assay. (bron NordiQC)


Besluit:

Oorzaakanalyse

Aankleuring 3+ histologie: OK

98,5% geslaagd

1 vals negatief: Dako poly op Autostainer: 1/500 20’ RT; TRS pH6 <>met linker ‘goed’

hoogste verdunning! Ook probleem met beide 2+ cores (vals neg.)

Aankleuring 2+ amplified:

Histologie: 12,5% vals negatief

Dako: geen éénduidige oorzaak (volledige verdunningreeks, beide toesteltypes)

Cellijn (EQ): 14% vals negatief (vanaf 1/300 verdunning)

Ventana: 3x standaardprotocol <> telkens 2+ amplified core wel en 3+ core OK: oorzaak??

Dako: ook 3+ cellijn en /of 2+ amplified biopt onvoldoende (80%)

Cellijn:

Omnis protocol scoort beter: 43% volledige correlatie <> 0% Autostainer

Omnis: identiek protocol: onvoldoende, wisselende resultaten cellijn??

Correlatie cellijnen Ventana protocol: 68% OK

Cellijn 3+ vals negatief: Omnis 7% ; Autostainer 55% ; Ventana geen probleem

Cellijn 2+ (EQ) vals negatief : Omnis 14% ; Autostainer 50% ; Ventana 8%


Besluit:

Oorzaakanalyse

Impact verdunning? Minder grote spreiding 1/100 - 1/500

Datasheet 1/600 - 1/1200 afh. van HIER type <> ~56% gebruikt verdunning rond 1/200-300

Range 1/100-1/150: allen geslaagd, onafh. van stainer

Range 1/200-1/600: 55% geslaagd: probleem 2+ amplified én cellijn(en)

optimaal goed borderline onvoldoende opmerkingen

100 (Omnis) 1 1 = protocol

150 1 2 = protocol

200 3 1 3 Enkel Omnis/Ventana geslaagd

300 (NQC) 3 3 Enkel Omnis/Ventana geslaagd

350 (Omnis) 1

400 (Omnis) 1 1 AS20’ en pH6 ; AS12’ en pH9

500 (Autostainer) 1 1 +linker = OK

Meest gebruikt


Besluit:

Corrigerende maatregelen n.a.v. resultaten EKE2019-1

Aantal labo’s met maatregelen: 13/27 ~48%

Dako poly: 11/23 ~52%

Ventana: 2/3

Leica: 0/1

Impact op outcome:

Labo’s met wijziging:

Dako poly: 82% geslaagd ; 36% optimaal

Ventana: 100% geslaagd (1/2 optimaal)

Labo’s zonder wijziging

Dako poly: 50% geslaagd (44% optimaal) ; 50% ‘onvoldoende’

Ventana: 1/1 ; geslaagd (‘goed’)

Leica: geslaagd (2019-1 vals positief 2019-3 achtergrond)

Corrigerende acties:

Verdunning: 30% ; gemiddelde verd. 1/320 1/250 (spreiding 1/150 tot 1/400 )

Incubatietijd en -temperatuur: 4/27

Schrappen chromogeen versterker: 2/27

Autostainer Omnis : 4/5 gewijzigde verdunning

HIER: pH9 pH6 (CB11 op Dako)


Staining issues UES (uneven staining)https://journals.lww.com/appliedimmunohist/Abstract/2018/05000/Uneven_Staining_in_Automated_Immunohistochemistry_.1.aspx


– Results:

• only 8% (14/180 slides) showed uniform staining !• decreased staining (‘cold zones’): zonal, large regions, mostly instrument dependent• increased staining (‘hot zones’): small foci, random distribution, appears on all

stainers

– Conclusions:

• UES = important implications on reliability IHC assay• baseline testing (machine validation) and periodic QA testing recommended• pathologists should be aware of UES • be aware of cold zones in cores / small endoscopic samples without internal control

(although normal on-slide control)


cold zone

overstaining, control looks OK

variable staining

decreased staining

both increased/decreased in same slide

uneven staining(arrows)

hot zone


Consider each slide position / chamber on the IHC stainer as an individual stainer and use appropriate on-slide controls

Resultaatbespreking HER2Take home message: cf individueel rapport Sciensano

Optimaliseren van methoden

NordiQC website

Leverancier AS

Correct toepassen nationale adviezen en guidelines: controles dynamic range!

Periodieke evaluatie (KPI): bvb correlatie IHC - ISH

Ingangscontrole uitvoeren op gevalideerd controlemateriaal voor ingebruikname

Pre analytics !

RTU én Conc. AS: lotvariatie mogelijk = eiwit conc. kan wijzigen

= monitoren o.b.v. verdunningsreeks

Resultaatbespreking HER2Take home message: cf individueel rapport Sciensano

Samenstelling controleblok:

Op elk glaasje bij routine aanvraag

Enkel sterke expressor 3+ is onvoldoende

Volledige dynamic range is nodig:

bij ingangscontrole lot: weefsel 2+ is cruciaal (cave conc. AS)

Bij routine gebruik volstaat naast 0 en 3+ een ‘zwakke expressor (= 1+ of 2+)

Permanente monitoring van aankleuring controleblok

Protocol PR

n= 65

Conc.: geen wijzigingen (n=3)

Dako: mm clone PgR 1294: n=1

Leica Novocastra:

mm clone 16 (n=1)

Mm clone 16+SAN27 (n=1)

RTU:

Dako:

mm clone PgR1294 : n=11 (2019-1: 7)

mm clone PgR636: n=10 (2019-1: 15)

Roche/Cell Marque: rm clone 1E2 : n=40 (2019-1: 38)

Leica Novocastra: mm clone 16: n=1

Protocol PR

Conc. AS

PgR 1294 Dako

1/50 15’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ Omnis

16+SAN27 Leica

1/50 20’ bij 32°C +linker ; pH9 30’ Flex+ Omnis

16 Leica

BMK XT: 1/200 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 8’

(2019-1: 1/50 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 60’)

RTU clone 16 (Leica)

Bond III: 15’ RT ; HIER pH9 20’

Datasheet 10/2016: HIER pH9 20’ , AS voorgedefinieerd

Protocol PR

RTU clone PgR 1294 (Dako)

Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 30’ , AS 10’ 55%

Allen Omnis

AS 10’- 20’ bij 32°C

AS 10’- 27’ bij RT

HIER pH9

RTU clone PgR 636 (Dako)

Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 20’ , AS tijd voorgedefinieerd (20’?)

Autostainer 8/9

AS 15’-20’ RT. 30% gebruikt kortere inc. tijd

+linker 15’: 20% (datasheet?) 2019-1: 50%

HIER pH9: 8/9

Omnis 1/9

AS 20’ RT; HIER tijd??

Protocol PR

RTU clone 1E2 (Roche/C.Marque)

Datasheet:

AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’

48% deelnemers (2019-1: 28%)

UView:

AS 12’ – 32’ (55% AS datasheet )

+/- 4’ tot 8’ amp bij 36°C (38% )

HIER CC1 8’ – 36’ - 64’ (58% ‘standard’ CC1 ~)

iView (2):

AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’

AS 20’ bij RT ; HIER CC1 36’

Resultaat datasheet:

89% geslaagd ; 84% optimaal

4 niet geslaagd: te zwakke Ca, vals pos./neg., storend cytoplasma

Scoringscriteria PRAankleuringspatroon: nucleair

• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen

• Normale tonsil : geen kernaankleuring

• Borst sarcomatoïd carcinoom (core 3) : geen aankleuring van de tumorale cellen

• Borst lobulair carcinoom (core 4): matig tot sterk nucleaire aankleuring in meerderheid (80-90%) van de tumorale cellen

• Borst ductaal carcinoom (core 5) : zwak tot sterke aankleuring in minderheid (15-30%) van de tumorale cellen

• Borst intraductaal carcinoom (core 6) : max. 1% aankleuring in tumorale cellen, vanaf rond coupe 50: extra focus waarin minstens matig nucleaire aankleuring

Antistof PR

Core 4

Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

OK?

Cervix OK

OK?OK?

Core 5

Antistof PR

Optimaal

Ventana 1E2 16’ ; CC1 64’ ; UV BMK Ultra

optimaal

Core 4 matig/sterk positief 80-90%

Core 5 zwak/ sterk positief 15-30%

Antistof PR

Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

borderline

Core 4

Core 5

Cervix te zwak

Antistof PR

borderline

Ventana 1E2 32’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra

Cervix

aspecifiek

aspecifiek

Antistof PR

Te zwakke tegenkleuring

Ventana BMK Ultra

Antistof PR



Resultaatbespreking PR

Algemeen

n=65 EKE 2019-3

EKE 2019-1

NQC 2019B27

n % suff suff % suff

optimaal 47 72%86%

42%84%

66%85%

goed 9 14% 42% 19%

borderline 7 11% 9% 11%

onvoldoende 2 3% 6% 4%


Opgesplitst per clone : conc.

* NordiQC: waarvan 63% optimaal

** NordiQC: geen optimaal

*** NordiQC: waarvan 70% optimaal

16

Leica / Novocastra

% suff

16+SAN27 Leica/

Novocastra

% suff PgR 1294 Dako

% suff

n=1 n=1 n=1

optimaal 1 - 1 - 1 -

goed 0 - 0 - 0 -

borderline 0 - 0 - 0 -

onvoldoende 0 - 0 - 0 -

Totaal suff - - -

NQC 2019 82%* 4/4 ** 90% ***


Opgesplitst per clone: RTU

* NordiQC: waarvan 62% optimaal** NordiQC: waarvan 66% optimaal

*** NordiQC: waarvan 82% optimaal

**** NordiQC: waarvan 72% optimaal

PgR1294 Dako

% suff

1E2 Ventana/ C. Marque

% suff

16 Leica

% suff

PgR 636 Dako

% suff.

n=11 n=40 n=1 n=10

optimaal 9 82% 29 73% 0 - 6 60%

goed 0 - 5 12% 1 - 3 30%

borderline 2 18% 4 10% 0 - 1 10%

onvoldoende 0 - 2 5% 0 - 0 -

Totaal suff 82% 85% 1/1 90%

NQC 2019 89% * 83%** 100% *** 89% ****


Besluit: Suff. 86 %

Algemene score vergelijkbaar 2019-1 en NQC 2019

Geslaagd resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers

AS:

Slechts 5% (n=3) conc. NQC slaagpercentage : clone 16 82%, beide Dako clones 90-95%

34% Dako clones , 62% Ventana clone 1E2, 4% Leica clones robuust

Dako

robuuste antistoffen en test: AS tijd en -incubatie, pH geen invloed voor geslaagd resultaat

Linker geen garantie voor optimaal resultaat (achtergrond)

Ventana platformen: meer spreiding in protocols (AS en HIER)

Standaardprotocol: 94% geslaagd, 88% optimaal

<> 2019-1: wisselend resultaat met standaard protocol

Optimaal mogelijk met datasheet of LDT

Niet geslaagd: 2/4 gebruiken standaardprotocol

Korte(re) HIER: optimaal mogelijk

(Te) zwakke tegenkleuring

+amp. (38%) is geen garantie op optimaal resultaat (11% niet geslaagd)

voldoende lange HIER wel

Niet geslaagd: 2/4 gebruiken signaalversterker, optimaal mogelijk met amp.


Besluit: Suff. 86%

Extra controlecoupe: 57% (2019-1: 52%)

Aanbevolen controle: NordiQC

Cervix: pos. controle (sensitiviteit)

Columnair epitheel, squameus epitheel en stromale cellen sterk pos.

endotheel en lymfocyten cellen negatief

minimale cytoplasmatische aankleuring (PgR 636 geeft sterkere aankleuring)

! Post-menopauzale cervix: lagere PR expressie in squameus epitheel mogelijk !

Tonsil: negatieve controle (cave Ventana clone)

Scoringscriteria ERAankleuringspatroon: nucleair

• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen

• Normale tonsil : minstens zwak tot matige aankleuring van kiemcentrum macrofagenen squameus epitheel

• Borst ductaal carcinoom (core 3) : minstens matig tot sterke aankleuring in meerderheid (90-100%) van de tumorale cellen

• Borst ductaal carcinoom (core 4) : minstens matig tot sterke aankleuring in minderheid (ongeveer 20%) van de tumorale cellen

• Borst ductaal carcinoom (core 5) : geen aankleuring van de neoplastische cellen

Reassessment ER

Algemeen

n=7 reassess

n % suff

optimaal 2 29%43 %

goed 1 14%

borderline 1 14 %

onvoldoende 3 43 %

Reassessment ER

Besluit: 7/13 niet geslaagde labo’s hebben een reassessment aangevraagd (niet verplichtend)

Aktieplan:

3/7 protocolwijziging: aanpassing HIER en/of AS tijd (RTU)

3 geen wijziging ; 1 geen wijziging

Resultaten:

Gewijzigde protocols: onvoldoende 2/3 geslaagd

1 lab grondige protocolwijziging (onvoldoende optimaal)

Niet gewijzigde: borderline

Oorzaakanalyse: onvoldoende

Vals negatief Ca en cellijn

Vals positief Ca

Protocol optimalisatie loont !

Resultaatbespreking besluit

sufficient 2019 NQC

PR 84 % 85 % 2019

HER2* 86 % 86% 2019

* Dako conc. AS: vals negatieve IHC 2+ amplified

Resultaten EKE IHC 2019-2

De Wiest Bart

10 december 2019

OLV Ziekenhuis Aalst

EKE IHC 2019-2

Antistoffen:

CD34: n= 65

TTF-1: n= 65

Panel:

Scoring 22/10/2019 (CHU Brugmann)

Onafhankelijk, in consensus

3 pathologen

Dr. Valérie Segers (CHU Brugmann)

Dr. Nicky D’Haene (Erasme)

Dr. A.M. Dierick (Sciensano)

Protocol CD34

• Gebruikte clone: enkel QBEnd/10

– Conc.: n=9• DAKO op Ventana stainer UV/OV:

1/24 - 1/50 - 1/100

16’ – 20’ – 32’ – 100’ +/- amp.

HIER 32’ – 64’

• Dako op Omnis (1) 1/100 20’ bij 32°C ; HIER pH9 30’

• Leica (2) BondIII : 1/100 15’ RT ; HIER pH9

Ventana iView: 1/50 32’ ; HIER CC1 32’

– RTU ½ verdund: • Op Ventana stainer: AS 32’ RT ; HIER CC1 30’

Protocol CD34

• Gebruikte clone: enkel QBEnd/10

– RTU: n= 56• DAKO: n=11

Omnis: 12’ - 30’ RT/32°C +/- linker ; HIER pH9 30’

Autostainer:

10’ - 30’ RT +/- linker ; HIER pH9 30’ (8/9)

20’ RT ; HIER pH6 30’

Ventana Ultra:

32’ RT ; HIER CC1 8’ iView

28’ - 32’ bij 36°C ; HIER CC1 30’-36’ UView

• LEICA: n=3

Incubatietijd: 10’ - 15’

HIER pH9 : 10’ - 30’

• VENTANA: n=27

Incubatietijd: 16’ - 60’ RT/36°C ; +/- amp.

Zonder / met HIER CC1 8’ - 64’

Antistof CD34• Scoringscriteria: membranaire aankleuring

– Appendix:

Matig tot sterke aankleuring (membranair) van de Cajal cellen in muscularis propia en de stromale fibroblast-like cellen

Epitheliale cellen negatief

– Lever:

Matig tot sterke aankleuring (membranair) van de endotheliale cellen in portavelden en periportale sinusoïden.

Hepatocyten negatief

– GIST:

Sterke membranaire aankleuring van neoplastische cellen

– Bijniertumor:

Geen aankleuring van neoplastische cellen

- Alle weefsels :

sterke (overwegend membranaire) aankleuring van bijna alle endotheliale cellen

geen aankleuring van de gladde spiercellen

Antistof CD34: overzicht

Optimaal Goed

Antistof CD34: appendix

Optimaal

goed

Dako RTU ½ 32’ RT ; CC1 30’ ; UV BMK XT

Antistof CD34: appendix

Optimaal

goed


Ventana RTU 60’ 36°C ; CC1 32’ ; OV BMK Ultra

Antistof CD34: leverOptimaal

Dako RTU 20’ RT ; pH9 30’ ; Dako Autostainer


goed

Antistof CD34: GISTOptimaal

Dako RTU 20’ RT ; pH9 30’ ; Dako Autostainer


goed

Antistof CD34

Optimaal Goed

Dako 1/100 32’ bij 36°C ; CC1 mild ; UV BMK XT Dako 1/100 32’ bij 36°C +amp ; CC1 mild ; OV BMK XT

Resultaatbespreking CD34

• Algemeen

– n=65

Suff. 100 %

EKE 2019-2

OLV 2013-2

NQC 2016

n suff % suff % suff

optimaal 62 95%

100%

84% 63%

goed 3 5% 8% 92% 32% 95%

Borderline 0 - 8% 4%

Onvoldoende 0 - 0% 1%


• Opgesplitst per clone producent

– RTU: 96% optimaal ; suff. 100 %

* RTU ½ verdund: ‘goed (zwak)’

n=54 DakoQBEnd10

RTU*

% suff

VentanaQBEnd10

RTU

% suff

LeicaQBEnd10

RTU

% suff

n=27 n=26 n=3

optimaal 26 96% 26 100%

3 -

goed 1 4% 0 - 0 -

borderline 0 - 0 - 0 -

onvoldoende 0 - 0 0 -

Totaal suff 100% 100% -

NQC 2016 Autostainer 92% Omnis 100%

97% 100%



– Concentrated: 88% optimaal ; suff. 100 %

n=8 DakoQBEnd10 RTU

% suff Leica QBEnd10 RTU

% suff

n=6 n=2

optimaal 5 83% 2 100%

goed 1 17% 0 -

borderline 0 - 0 -

onvoldoende 0 - 0

Totaal suff. 100% 100%

NQC 2016 95%


Besluit:• Lage expressors (Cajal cellen en perisinoïdale endotheelcellen): OK voor

meeste deelnemers

• Suff. 100% (~NQC 95%)

• Geen vals negatieven

• Geen verschil tussen aanbevolen protocol en LDT Ventana (2008): 20% gebruikt aanbevolen protocol = geen HIER (cave blasten?)

• Geen verschillen tussen producenten, format: robuuste test

• Resultaat ‘goed’: RTU ½ verdund: merkelijk zwakkere aankleuring GIST (sterke expressor)

cave suboptimale fixatie?

Verdunning 1/100 met gelijkaardig protocol: uView te zwak <>OptiView optimaal (+amp)

• HIER:

Geen HIER: ook optimaal mogelijk

Langere pretreat: – geen intensere kleuring

– 1 lab verlengde HIER: aankleuring blasten (decal) ook Cajal duidelijker aantoonbaar

Amplifier: 35%. Niet noodzakelijk voor optimaal resultaat

Protocol TTF-1

n= 66

Conc.: n=9

Leica SPT24 n=4

Immunologic SPT24 n=1

Dako 8G7G3/1 n=3

Biocare 8G7G3/1 n=1

RTU: n=57

Dako 8G7G3/1 n=24

Roche 8G7G3/1 n= 10

Roche SP141 n=19

Leica SPT24 n=4

Protocol TTF-1

• Conc. AS:

Leica SPT24 Ventana

Poly: 1/50 32’ ; HIER CC1 64’ OV

Mouse: 1/20 24’ RT ; HIER CC1 8’ UV

BondIII: 1/200 15’ RT ; pH9 20’

Omnis:

1/400 30’ 32°C ; pH9 30’

Immunologic SPT24 Omnis: 1/100 20’ bij 32°C +linker 10’ ; HIER pH9 30’

Protocol TTF-1

• Conc. AS:

Dako 8G7G3/1 Omnis: 1/150 20’ bij 32°C +linker ; HIER pH6 30’

Ventana 1/50 40’ Rt ; HIER CC1 36’

Ventana 1/100 32’ bij 42°C ; HIER CC1 64’

Biocare 8G7G3/1 Ventana 1/250 32’ bij 36°C +amp. ; HIER CC1 64’

• RTU:

Roche SP141 AS 8’ – 40’ RT of 32°C +/- amp

HIER CC1 8’ – 64’

Protocol TTF-1

• RTU:

Dako 8G7G3/1 Autostainer

AS 10’ – 20’ – 30’ RT +/- linker

HIER pH9 of pH6 (n=1)

Omnis AS 12’ – 20’ – 30’ RT/32°C/36°C +/- linker

HIER pH9

Ventana stainers AS 28’ – 30’ RT of 36°C +/- amp

Roche 8G7G3/1 AS 16’ – 40’ 36°C +/- amp

HIER CC1 36’-64’

Leica SPT24 Omnis: AS 20’ RT of 32°C ; HIER pH9 30’

Bond III of Max: AS 10’ – 15’ 32°C ; HIER pH6

Spreiding

protocolsettings

Antistof TTF-1• Scoringscriteria: kern aankleuring

– Lever• geen nucleaire aankleuring (cytoplasmatische aankleuring in de hepatocyten werd aanvaard bij

gebruik van het antilichaam 8G7G3/1)

– Schildklier• sterke (nucleaire) aankleuring van alle folliculaire epitheelcellen (hoge expressor)

– Long• sterke (nucleaire) aankleuring van alle type II pneumocyten, Clara-cellen en basale cellen van

de bronchioli terminales (lage expressor: controle analytische sensitiviteit)

– Schildkliercarcinoom• matig tot sterke (nucleaire) aankleuring van bijna alle neoplastische cellen

– Long, plaveiselcelCa (controle specificiteit/sensitiviteit)

• Focaal zwakke (nucleaire) aankleuring neoplastische cellen

• Negatief wordt enkel aanvaard indien alle andere criteria voldaan zijn

– Long, atypisch carcinoïd (controle analytische sensitiviteit)

• minstens matige/sterke (nucleaire) aankleuring van de meeste neoplastische cellen

– Colon AdCa• geen nucleaire aankleuring (controle specificiteit)

Antistof TTF-1: overzicht

Optimaal Borderline

Dako 8G7G3/1 1/100 32’ 42°C ; CC1 64’ ; UV BMK UltraLeica SPT24 RTU 20’ 32°C ; TRS pH9 30’ ; Omnis

Antistof TTF-1: schildklier

Optimaal Borderlinenormaal

carcinoom

Antistof TTF-1: long

Optimaal Borderline

Antistof TTF-1: plaveiselcelCa

Optimaal

Borderline

Antistof TTF-1: long carcinoïd

Optimaal

Borderline

Antistof TTF-1

Leica SPT24 Ventana SP141 Dako 8G7G3/1

Leica SPT24 RTU 20’ 32°C ; TRS pH9 30’ ; Omnis Ventana SP141 RTU 32’ 36°C ; CC1 64’ ; BMK Ultra ultraView Dako 8G7G3/1 RTU 30’ RT ; TRS pH9 ; Dako Autostainer

Optimaal

Antistof TTF-1

Goed

Dako 8G7G3/1 RTU 10’ RT ; TRS pH9 ; Dako Autostainer

optimaal

zwak / populatie

lever

lever

1

3

2

1

23

3

1

4

4

Antistof TTF-1

Optimaal conc. AS

Leica SPT24 1/200 15’ RT ; pH9 20’ ; Leica BondIII

Optimaal RTU

Antistof TTF-1

Expected result NordiQC

Leica SPT24 ; TRS pH9 ; Dako Omnis

Optimaal RTU

Borderline

Resultaatbespreking TTF-1

• Algemeen

– n=66

Suff. 41 %

EKE 2019-2

NQC 2013

NQC 2016

n suff % suff % suff

optimaal 20 30%

41%

51% 43%

goed 7 11% 20% 71% 24% 67%

Borderline 39 59% 24% 23%

Onvoldoende 0 - 5% 10%



– RTU: 30% optimaal ; suff. 39 %

n=57 Dako8G7G3/1

RTU

% suff

Ventana8G7G3/1

RTU

% suff VentanaSP141 RTU

% suff

LeicaSPT24

% suff.

n=23 n=10 n=20 n=4

optimaal 0 0% 0 0% 15 75% 2 50%

goed 1 4% 0 0% 4 20% 1 25%

borderline 22 92% 10 100% 1 5% 1 25%

onvoldoende 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%

Totaal suff 4% 0% 95% 75%

NQC 2016 3% (n=31) geen optimaal

7% (n=16) geen optimaal

94% (n=50) 60% optimaal

100% (n=8) 88% optimaal



– Concentrated: 33% optimaal ; suff. 44 %

n=9 Dako/Biocare8G7G3/1 conc.

% suff Leica/ImmunologicSPT24 conc.

% suff

n=4 n=5

optimaal 0 0% 3 60%

goed 0 0% 1 20%

borderline 4 100% 1 20%

onvoldoende 0 0% 0 0%

Totaal suff. 0% 80%

NQC 2016 0% (n=25) 88% (n=136)


Besluit:• Slechts 41% geslaagd, merkelijk lager dan NQC

• Sterke expressor (schildklier en pneumocyten): geen probleem

• Resultaten RTU en conc. 100% afhankelijk van gebruikte clone

• SP141:

• Optimaal mogelijk met UV en OV

• ‘goed’ owv storende achtergrond

• Borderline owv % carcinoïd merkelijk kleiner ondanks amp. (AS tijd ½ )

• SPT24:

• goede clone (1 borderline: % carcinoïd merkelijk kleiner, protocol lijkt OK)

• Op alle platformen optimaal mogelijk

• 8G7G3/1: op alle platformen

• geen goede clone (lot onafhankelijk): slechts 4% geslaagd (zwak carcinoïd) %populatie te klein én te zwakke aankleuring longcarcinoïd bij negatief plaveiselcelCa

• Amplifier: 50%. Geen impact op resultaat

• >50% 8G7G3/1 en 30% SP141 <> NQC 52% SPT24 (Leica RTU/conc.)

In the last four TTF1 assessments, none of 259 submitted protocols based on the mAb clone 8G7G3/1 produced an optimal

staining despite protocol settings similar to those used for the mAb clone SPT24 or the rmAb clone SP141 as (Fig. 1 – Fig. 4).

The mAb clone 8G7G3/1 has thus shown to have a significantly lower affinity for TTF1 compared to the mAb clone SPT24

and the rmAb clone SP141.


Besluit:• Controle

• 40% gebruikt controle

• Aanbevolen controle

• Long (normaal): columnair epitheel terminale bronchioli = lage expressor

• Long (normaal): pneumocyten en basale cellen terminale bronchioli = hoge expressor zo sterk mogelijk zonder cytopl. aankleuring sensitiviteit

• Lever: negatieve controle (cave clone 8G7G3/1) specificiteit

• Schildklier: enkel hoge expressor= niet aanbevolen (cave controle sensitiviteit)

• Initiële validatie TTF1:

• Includeren carcinoïde tumor (lage expressor) of long AdCa (lage/matige expressielevel)

• iCAPC: critical assay performance controls (bron NordiQC)

Hoge expressor=controle

op keuze juiste AS

lage expressor=controle op

sensitiviteitgeen expressie=controle op

specificiteit

EKE planning

Externe kwaliteitsevaluatie

EKE 2020-1 EKE 2020-2 EKE 2020-3 EKE 2021-1 EKE 2021-2 EKE 2021-3

ER / Her2 / PR reassess

2019-3

CD3 Chromo Desmin

PR / Her2 /ER reassess

2020-1

ER / Her2 / PR reassess

2020-3

CD117 panCK

E-Cadh.

PR / Her2 /ER reassess

2021-1

Rondzending coupes door Sciensano

17-21/02/2020 4-8/05/2020 14-18/09/2020 15-19/02/2021 3-7/05/2020 13-17/09/2020

Beoordeling panel03/2020

6/202010/2020 03/2021 6/2021 10/2021

Doorsturen individueelresultaat 05/2020

10/202011/2020

Resultaatbespreking / symposium Vr 29/05/2020 nvt ?

Doorsturen globaalrapport

06/2020 11/2020 12/2020

Golden sponsors Silver sponsors

Andere sponsors

Golden sponsors Silver sponsors - OLV Z · Leica: geslaagd (2019-1 vals positief 2019-3...

Documents

Transcript of Golden sponsors Silver sponsors - OLV Z · Leica: geslaagd (2019-1 vals positief 2019-3...