8/13/2019 Vratsanos 1985

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P o l y a m i n e s o f D e n t a l P l a q u e i n C a r i e s - r e s i s t a n tv s . C a r i e s - s u s c e p t i b l e A d u l t sS . M . VRATSANOS a n d I . D . M NDELD i v i s i o n o f P r e v e n t i v e D e n t i s t r y , S c h o o l o f D e n t a l a n d O r a l S u r g e r y , C o l u m b i a U n i v e r s i t y , 6 3 0 W e s t 1 6 8 S t r e e t , Ne w Y o r k , Ne w Y o r k 1 0 0 3 2U t i l i z i n g a s e n s i t i v e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h i c s y s t e m , p o l y a m i n e sw e r e q u a n t i t a t e d i n t h r e e - d a y p l a q u e f r o m 1 3 c a r i e s - r e s i s t a n t ( C R )a n d 3 5 c a r i e s - s u s c e p t i b l e ( C S J a d u l t s a f t e r t h e y h a d f a s t e d f o r1 2 h o u r s . T h e v a l u e s f o r p u t r e s c i n e a n d c a d a v e r i n e w e r e s i g n i f i c a n t -l y h i g h e r i n t h e CR g r o u p . T h i s m a y b e a t t r i b u t e d t o a g r e a t e ra v a i l a b i l i t y o f s a l i v a r y s u b s t r a t e p r e c u r s o r s o f p o l y a m i n e s a n d / o rh i g h e r l e v e l s o f b i o s y n t h e t i c d e c a r b o x y l a s e a c t i v i t i e s i n t h e CRs u b j e c t s , o r b o t h .J D e n t R e s 6 4 ( 3 ) : 4 2 2 - 4 2 4 , M a r c h , 1 9 8 5I n t r o d u c t i o n .I n c o m p a r a t i v e s t u d i e s o f p l a q u e a c i d o g e n e s i s i n c a r i e s -r e s i s t a n t ( C R ) v s . c a r i e s - s u s c e p t i b l e ( C S ) a d u l t s , we f o u n d( V r a t s a n o s a n d M a n d e l , 1 9 8 2 ) t h a t t h e amount a n d r a t e o fp r o d u c t i o n o f l a c t i c a c i d w e r e l o w e r , a n d t h e l e v e l s o fa c e t i c a c i d h i g h e r , i n t h e CR t h a n i n t h e CS g r o u p . H i g h p Ka c i d s , s u c h a s a c e t i c , p r o p i o n i c , a n d b u t y r i c , p r o v i d e ab u f f e r i n g s y s t e m e . g . , a c e t a t e - a c e t i c a c i d ) c a p a b l e o fa b s o r b i n g t h e h y d r o g e n i o n s g e n e r a t e d b y t h e l o w p K a c i d s l a c t i c , f o r m i c , a n d p y r u v i c ) ( V r a t s a n o s , 1 9 8 1 ; V r a t s a n o sa n d M a n d e l , 1 9 8 2 ; M a r g o l i s a n d M o r e n o , 1 9 8 3 ) . S u c h ab u f f e r i n g s y s t e m c o u l d a c t t o r e d u c e t h e c o n t i n u e d p l a q u ep H f a l l ( b e l o w p H 5 . 5 ) t h a t c a n o c c u r w i t h u n l i m i t e d c a r -b o h y d r a t e s u b s t r a t e s . O t h e r m e c h a n i s m s , h o w e v e r , mustf u n c t i o n i n t h e p H r e g i o n a b o v e 5 . 5 . T h e s e w o u l d i n c l u d eb u f f e r s y s t e m s o p e r a t i n g a t h i g h e r p H , s u c h a s : i m i d a z o l em o i e t i e s , p h o s p h a t e a n d b i c a r b o n a t e g r o u p s ; a n d g e n e r a t i o no f ammonia a n d d e c a r b o x y l a t i o n o f amino a c i d s t o f o r mm o n o - a m i n e s a n d p o l y a m i n e s .The l o s s o f c a r b o x y l a t e a n d t h e t r a n s f o r m a t i o n t oa m i n e s t h a t a r e i n h e r e n t i n t h e p r o c e s s o f amino a c i d d e c a r-b o x y l a t i o n a r e i m p o r t a n t means o f p H r e g u l a t i o n i n b a c -t e r i a l m e t a b o l i s m ( G a l e , 1 9 4 6 ; M o r r i s a n d F i l l i n g h a m e ,1 9 7 4 ; R e c s e i a n d S n e l l , 1 9 7 2 ; H a y e s a n d H y a t t , 1 9 7 4 ) . I nt h e p r e s e n c e o f s u b s t r a t e a n d l o w p H , b i o d e g r a d a t i v e d e c a r -b o x y l a s e s c a n b e i n d u c e d t o c o n s u m e p r o t o n s a n d n e u -t r a l i z e a c i d p r o d u c t s o f c a r b o h y d r a t e f e r m e n t a t i o n ,a c c o r d i n g t o t h e s c h e m e ,

R CH COO H R CH2 C O N H 3 NH3At n e u t r a l o r s l i g h t l y a l k a l i n e p H , b i o s y n t h e t i c d e c a r b o x y -l a s e s h a v e b e e n shown t o f u n c t i o n i n a s i m i l a r m a n n e r ,u t i l i z i n g o r n i t h i n e , a r g i n i n e , a n d l y s i n e a s s u b s t r a t e s ( G a l e ,1 9 4 6 ) , w i t h m e d i a t i o n o f S - a d e n o s y l m e t h i o n i n e t o y i e l dh i g h e r p o l y a m i n e s , e . g . , s p e r m i d i n e a n d s p e r m i n e . U n d e rt h e p H c o nd i t i o ns o f n o r m a l p l a q u e , a m i n o a c i d d e c a r b o x y -l a t i o n s h a v e a p H - r i s e e f f e c t i n v o l v i n g t h r e e f a c t o r s : t h e

R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n A u g u s t 1 , 1 9 8 4A c c e p t e d f o r p u b l i c a t i o n J a n u a r y 2 8 , 1 9 8 5T h i s i n v e s t i g a t i o n wa s s u p p o r t e d i n p a r t b y USPHS R e s e a r c hG r a n t D E - 0 1 5 5 4 - 2 2 f r o m t h e N a t i o n a l I n s t i t u t e o f D e n t a l R e s e a r c h ,N I H , B e t h e s d a , MD 2 0 2 0 5 , a n d i n p a r t b y t h e B a s i c R e s e a r c h S u p -p o r t G r a n t , S 0 7 R R 0 5 3 3 1 , t o t h e S c h o o l o f D e n t a l a n d O r a l S u r g e r y ,C o l u m b i a U n i v e r s i t y , Ne w Y o r k , NY.4 2 2

i n d i c a t e d c o n s u m p t i o n o f p r o t o n s , t h e c o n v e r s i o n o f a namino a c i d a - a m i n o g r o u p t o a n a l i p h a t i c a m i n e g r o u p t h a ti s a s t r o n g e r b a s e , a n d t h e r o l e o f C O 2 . A t a c i d i c , n e u t r a l ,a n d m i l d l y a l k a l i n e p H , a n i n c r e a s e i n t h e amino g r o u p sb a s i c i t y i s o f n o i m p o r t a n c e , b e c a u s e , u n d e r t h e s e p H c o n -d i t i o n s , t h i s g r o u p i s p r a c t i c a l l y c o m p l e t e l y p r o t o n a t e d .C O 2 e v o l u t i o n i n a c i d m e d i a p l a y s no r o l e ; i n n e u t r a l o rm i l d l y a l k a l i n e m e d i a , w h e r e C O 2 i s r e t a i n e d t o y i e l d c a r -b o n i c a c i d , t h i s a c i d c a n o n l y p a r t i a l l y c o m p e n s a t e f o r t h ec o n s u m p t i o n o f p r o t o n s c o n c o m i t a n t w i t h d e c a r b o x y l a -t i o n . A c c o r d i n g l y , t h e c o n s u m p t i o n o f p r o t o n s a n d i t s p H -r i s e e f f e c t r e m a i n t h e d o m i n a n t f e a t u r e s .I n t h i s s t u d y , we e x a m i n e d t h e e f f e c t o f d e c a r b o x y l a s ea c t i v i t y i n p l a q u e b y q u a n t i t a t i n g t h e l e v e l s o f p o l y a m i n e si n t h r e e - d a y p l a q u e o f a g r o u p o f CR a n d C S s u b j e c t s a f t e ra 1 2 - h o u r f a s t .

M a t e r i a l s a n d m e t h o d s .Th e s t u d y w a s c o n d u c t e d w i t h 1 3 c a r i e s - r e s i s t a n t a n d 3 5c a r i e s - s u s c e p t i b l e s u b j e c t s . C a r i e s - r e s i s t a n t s u b j e c t s h a d aDMFS o f z e r o a s d e t e r m i n e d b y c l i n i c a l a n d r a d i o g r a p h i ce x a m i n a t i o n , h a d n o t b e e n e x p o s e d t o s y s t e m i c f l u o r i d ed u r i n g t o o t h d e v e l o p m e n t , a n d w e r e b e t w e e n 2 4 a n d 3 4y e a r s o f a g e . The c a r i e s - s u s c e p t i b l e s u b j e c t s w e r e o f s i m i l a ra g e a n d h a d a minimum DMFS i n d e x o f 2 0 ( w i t h a r a n g e o f2 0 - 3 5 ) , w i t h a t l e a s t o n e a c t i v e l e s i o n c u r r e n t l y p r e s e n t , o ra h i s t o r y o f l e s i o n s r e s t o r e d w i t h i n t h e p a s t y e a r .A l l s u b j e c t s w e r e g i v e n a t h o r o u g h d e n t a l p r o p h y l a x i so n e t o two w e e k s p r i o r t o p l a q u e c o l l e c t i o n i n o r d e r t or e m o v e a l l d e p o s i t s , t o a l l o w f o r r e s o l u t i o n o f g i n g i v a l i n -f l a m m a t i o n , a n d t o m i n i m i z e t h e i n f l u e n c e o f g i n g i v a lc r e v i c u l a r f l u i d o n p l a q u e c o m p o s i t i o n . The s u b j e c t s w e r ei n s t r u c t e d t o r e f r a i n f r o m a l l o r a l h y g i e n e f o r t h r e e d a y sp r i o r t o a t e s t r u n , a n d t o r e p o r t f o r t h e e x p e r i m e n t a t l e a s t1 2 h o u r s a f t e r t h e i r l a s t f o o d i n t a k e . T h i s p r o v i d e d a t h r e e -d a y p l a q u e a c c u m u l a t i o n i n a f a s t i n g s t a t e , a t m i n i m a lm e t a b o l i c a c t i v i t y , f o r s t u d y p u r p o s e s . S a m p l e s w e r e r e -moved w i t h a c u r e t t e f r o m a l l o f t h e l a b i a l a n d b u c c a l s u r -f a c e s , w e r e i m m e d i a t e l y w e i g h e d i n t a r e d p l a s t i c c a p s u l e s ,a n d were s t o r e d a t -5 C ( n o more t h a n o n e week u n t i la n a l y z e d f o r p o l y a m i n e s ) .Th e p o l y a m i n e s w e r e a n a l y z e d b y l i q u i d columnc h r o m a t o g r a p h y u s i n g a s y s t e m d e v e l o p e d i n t h i s l a b o r a -t o r y ( F i g . 1 , a n a l y t i c a l s y s t e m ) . Th e s y s t e m e m p l o y s p e l l i -c u l a r l y s u l f o n a t e d , d i v i n y l b e n z e n e - c r o s s - l i n k e d p o l y s t y r e n eb e a d s * , s t e p - g r a d i e n t i o n i c s t r e n g t h a n d p H e l u t i o n , a n df l u o r o m e t r i c d e t e c t i o n b a s e d on t h e r e a c t i o n o f p r i m a r ya m i n e s w i t h o - p h t h a l i c d i c a r b o x a l d e h y d e . Th e s y s t e m h a s al i m i t i n g s e n s i t i v i t y t o m e a s u r e 3 p i c o m o l e s o f a p o l y a m i n e ,t h u s p e r m i t t i n g t h e a n a l y s i s f o r p u t r e s c i n e a n d c a d a v e r i n ei n a s l i t t l e a s o n e m i c r o g r a m o f w e t p l a q u e ( V r a t s a n o s , u n -p u b l i s h e d ) . As i n a l l p o l y a m i n e a n a l y z e r s u s i n g s u l f o n a t e dp o l y s t y r e n e r e s i n , i n t h e p o l y a m i n e p r o f i l e o b t a i n e d , mono-a m i n e s a n d ammonia a r e i m m e d i a t e l y e l u t e d a s a s i n g l ep e a k a t t h e b e g i n n i n g , a s e x p e c t e d o n t h e b a s i s o f c h a r g e .* D i o n e x C o r p . , S u n n y v a l e , CA

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POL YAMINES IN PLA QUE

R E V O L V I N GV A L V E

U C O D L W ER E C O R D E R F L U O R I M E T E R W A S T E3 5 p L C E L LE x : 3 4 0 nmE r : 4 5 5 nm

F i g . 1 D i a g r a m m a t i c r e p r e s e n t a t i o n o f t h e a n a l y t i c a l s y s t e mu s e d f o r a n a l y z i n g p o l y a m i n e s .H o w e v e r , t r y p t a m i n e i s t h e o n l y mono-amine a p p e a r i n gw i t h i n t h e p o l y a m i n e s p e c t r u m ( b e f o r e s p e r m i d i n e ) , ona c c o u n t o f i t s l a r g e h y d r o p h o b i c c h a r a c t e r , a n d d e s p i t e i t ss i n g l e p o s i t i v e c h a r g e .One t o t h r e e m g w e t w e i g h t o f t h r e e - d a y f a s t i n g p l a q u ef r o m t h e CR a n d C S s u b j e c t s was d i s p e r s e d i n o n e ml o f0 . 0 2 N H C 1 b y f a s t - s t i r r i n g f o r 3 0 m i n a t 2 5 0 C . Th e d i s p e r -s i o n w a s t h e n f i l t e r e d t h r o u g h a 0 . 2 - p t m M i l l e x GS m i l l i p o r ef i l t e r , a n d a n a l i q u o t o f t h e f i l t r a t e , u s u a l l y c o r r e s p o n d i n gt o 0 . 1 mg o f wet p l a q u e , was a n a l y z e d .R e s u l t s . t y p i c a l p o l y a m i n e p r o f i l e f r o m t h e a n a l y s i s o f p l a q u e( 1 . 2 m g w e t w e i g h t ) f r o m a CS s u b j e c t i s s h o w n i n F i g . 2 .

P e a k s w i t h t h e r e t e n t i o n t i m e s o f p u t r e s c i n e , c a d a v e r i n e ,a n d s p e r m i d i n e w e r e a l w a y s p r e s e n t . S p e r m i n e w a s f r e -q u e n t l y o b s e r v e d . P u t r e s c i n e w a s a l w a y s t h e d o m i n a n ta m i n e . U n i d e n t i f i e d m i n o r p e a k s i n t h e s p e r m i d i n e r e g i o nw e r e n o t e d f r e q u e n t l y . Q u a l i t a t i v e l y , t h e p o l y a m i n e p r o f i l eo f CR s u b j e c t s w a s s i m i l a r t o t h a t o f C S , b u t d i f f e r e d q u a n -t i t a t i v e l y . The mean v a l u e s ( S . D . ) o f p o l y a m i n e s i n t h r e e -d a y p l a q u e s a m p l e s o f 1 3 CR a n d 3 5 CS s u b j e c t s a r e showni n t h e T a b l e . Mean v a l u e s f o r p u t r e s c i n e a n d c a d a v e r i n ew e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r ( S t u d e n t s t t e s t ) i n CR t h a n i n CSs u b j e c t s . T h e s e e l e v a t e d v a l u e s r e s u l t e d i n a s i g n i f i c a n t l yh i g h e r c o n t e n t o f t o t a l p o l y a m i n e s a n d t o t a l p o l y a m i n eb a s e p e r mg we t p l a q u e i n t h e CR g r o u p . As p o l y a m i n eb a s e , we d e f i n e t h e amount o f b a s i c i t y c a l c u l a t e d n o t a sm o l e s o f p o l y a m i n e ( s ) p e r s e , b u t r a t h e r a s t h e t o t a l b a s i cg r o u p s o c c u r r i n g i n a number o f p o l y a m i n e m o l e s .

0

L U J czW~~~

I I i I I I I i I I I i i

~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

-z

: : c

i\^ ^ ---_J a I a a i I a I I

3 0T M E N , )

F i g . 2 T y p i c a l c h r o m a t o g r a m o f a p o l y a m i n e a n a l y s i s o f t h r e e -d a y f a s t i n g p l a q u e .TABLEPOLYAMINE CONTENT OF THREE-DAY PLAQUE FROMCARIES-RESISTANT ( C R ) ND C A R I E S - S U S C E P T I B L E ( C S )SUBJECTS WHO HAVE FASTED ( C R n = 1 3 ; C S n = 3 5 )

N a n o m o l / m g W e t P l a q u eM e a n S . D . Mean S . D . S i g n i f i c a n c e *

P u t r e s c i n e 2 . 3 6 1 . 3 5 1 . 4 9 0 . 9 3 P < 0 0 5C a d a v e r i n e 1 . 0 2 1 . 0 1 0 . 4 0 0 . 4 4 P < 0 . 0 5S p e r m i d i n e 0 . 5 0 0 . 2 7 0 . 4 0 0 . 1 8 NSS p e r m i n e 0 1 4 0 . 1 8 0 1 6 0 . 2 9 NST o t a l 4 . 0 2 1 . 4 6 2 . 4 5 1 . 2 9 P < 0 . 0 1

P o l y a m i n e B a s e( C R n = 1 3 ; C S n = 3 5 )T o t a l N a n o e q u i v a l e n t s o f B a s e / m g W e t P l a q u e

Mean S . D . Mean S . D . S i g n i f i c a n c e *8 . 8 2 3 . 1 0 5 . 5 7 2 . 6 8 P < 0 . 0 1

* S t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e a c c o r d i n g t o S t u d e n t s t t e s t .D i s c u s s i o n .

Th e m o s t l i k e l y s o u r c e o f p o l y a m i n e s i n p l a q u e f r o mf a s t i n g s u b j e c t s w i t h a p H u s u a l l y f r o m 6 . 7 t o 7 . 0 ) i s f r o m

L

V o l . 6 4 N o . 3 4 2 3

HJz_ _ ,L L J

0. .

LL

C-

LL

V

-1LL

8/13/2019 Vratsanos 1985

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4 2 4 VRA TSANOS MANDELb i o s y n t h e t i c d e c a r b o x y l a t i o n o f a r g i n i n e a n d l y s i n e p r e -c u r s o r s d e r i v e d f r o m s a l i v a r y p e p t i d e s . The s i g n i f i c a n t l yh i g h e r l e v e l s o f p u t r e s c i n e a n d c a d a v e r i n e i n t h e CR g r o u pw o u l d s u g g e s t t h a t a p p r o p r i a t e s a l i v a r y p r e c u r s o r s a r e morer e a d i l y a v a i l a b l e i n CR t h a n i n C S s u b j e c t s , o r t h e d e c a r -b o x y l a s e s a r e more a b u n d a n t i n t h e CR ( r e f l e c t i n g d i f f e r -e n c e s i n t h e m i c r o f l o r a ) , o r b o t h . Th e p r o c e s s o f f o r m a t i o no f t h e p o l y a m i n e s ( a m i n o a c i d t o a m i n e t r a n s f o r m a t i o n b yd e c a r b o x y l a t i o n ) c o u l d r e a d i l y a f f e c t p l a q u e p H a n d c o n -t r i b u t e t o t h e h i g h e r r e s t i n g p H o f t e n s e e n i n CR s u b j e c t s .I t s h o u l d b e n o t e d t h a t , c o n t r a r y t o t h e c o n v e n t i o n a l w i s -d o m , t h e p o l y a m i n e s a n d a m i n e s i n g e n e r a l f o r m e d b yd e c a r b o x y l a t i o n a r e n o t o f v a l u e i n c o u n t e r - a c t i n g a c i d -i t y , s i n c e a t n o r m a l p l a q u e p H t h e s e a m i n e s a r e a l r e a d yf u l l y p r o t o n a t e d , a n d a r e i n c a p a b l e o f a c t i n g a s s c a v e n g e r so f a d d i t i o n a l p r o t o n s . T h u s , p o l y a m i n e s f o u n d i n f a s t i n gp l a q u e a r e n o t t h e n e u t r a l i z i n g a g e n t s , b u t o n l y t h e r e s i d u a le v i d e n c e o f a n e a r l i e r d e f e n s e a g a i n s t a c i d i t y . B a s e f o r m a -t i o n , e . g . , t h e g e n e r a t i o n o f a m m o n i a , m a y a c c o m p a n yp o l y a m i n e f o r m a t i o n , a s i n t h e c o n v e r s i o n o f a r g i n i n e t op u t r e s c i n e , b u t t h e f o r m a t i o n o f p o l y a m i n e s p e r s e i s i m -p o r t a n t i n t e r m s o f p H , b e c a u s e a m i n o a c i d d e c a r b o x y l a -t i o n r e q u i r e s c o n s u m p t i o n o f p r o t o n s .

I n c o m p a r i n g o u r p u t r e s c i n e a n d c a d a v e r i n e d a t a f o r CSp l a q u e w i t h t h e v a l u e s r e p o r t e d b y H y a t t a n d H a y e s( 1 9 7 5 ) , o u r p u t r e s c i n e v a l u e i s a b o u t 5 0 h i g h e r , a n d o u rc a d a v e r i n e v a l u e a b o u t d o u b l e . No s p e r m i d i n e a n d s p e r m i n ev a l u e s w e r e g i v e n b y H y a t t a n d H a y e s i n t h e i r r e p o r t ona m i n o a c i d s a n d a m i n e s o f t h e p l a q u e , a l t h o u g h t h e s e p o l y -a m i n e s w e r e i d e n t i f i e d a s d a n s y l a t e d d e r i v a t i v e s u s i n g t h i nl a y e r c h r o m a t o g r a p h y . Th e q u a n t i t a t i v e d i f f e r e n c e s f r o mo u r r e s u l t s m a y b e a t t r i b u t e d t o t h e f a c t s t h a t t h e s e a u t h o r sw o r k e d w i t h 2 4 - h o u r p l a q u e , d i f f e r i n g i n m i c r o - o r g a n i s m sf r o m t h e t h r e e - d a y p l a q u e , a n d a l s o t o t h e d i f f e r e n c e i np r o c e d u r e a n d i n s e n s i t i v i t y o f t h e a n a l y t i c a l s y s t e m o f t h i n

l a y e r c h r o m a t o g r a p h y f o l l o w e d b y e l u t i o n , v s . h i g h - p e r -f o r m a n c e l i q u i d c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y .The a b s e n c e o f h i s t a m i n e a n d t r y p t a m i n e i n o u r c h r o m a -t o g r a p h i c p a t t e r n s i s a r e f l e c t i o n o f t h e n e a r - n e u t r a l p H o fp l a q u e s a m p l e s f r o m f a s t i n g s u b j e c t s . A s t h e p H f a l l s , b i o -d e g r a d a t i v e d e c a r b o x y l a s e s c a n u t i l i z e h i s t i d i n e a n d t r y p t o -p h a n ( G a l e , 1 9 4 6 ) a n d g e n e r a t e a m i n e s . T h e s e c o n v e r s i o n ss h o u l d a p p e a r i n p l a q u e w i t h d e c l i n i n g p H a n d n e e d t o b ec o n s i d e r e d i n t h e e x a m i n a t i o n o f p H r e g u l a t i o n i n p l a q u e .REFERENCES

G A L E , E . F . ( 1 9 4 6 ) : T h e B a c t e r i a l Amino A c i d D e c a r b o x y l a s e s ,Adv E n z y m o l 6 : 1 - 3 2 .H A Y E S , M . L . a n d H Y A T T , A . T . ( 1 9 7 4 ) : F r e e Amino A c i d s a n dA m i n e s i n Human D e n t a l P l a q u e , A r c h O r a l B i o l 1 9 : 3 6 1 - 3 6 9 .H Y A T T , A . T . a n d H A Y E S , M . L . ( 1 9 7 5 ) : F r e e Amino A c i d s a n dA m i n e s i n Human D e n t a l P l a q u e , A r c h O r a l B i o l 2 0 : 2 0 3 - 2 0 9 .M A N D E L , L D . a n d Z E N G O , A . N . ( 1 9 7 3 ) : G e n e t i c a n d C h e m i c a lA s p e c t s o f C a r i e s R e s i s t a n c e . I n : C o m p a r a t i v e I m m u n o l o g y o ft h e O r a l C a v i t y , H . S c h e r p a n d S . M e r g e n h a g e n , E d s . , W a s h i n g -t o n , D C : U . S . G o v e r n m e n t P r i n t i n g O f f i c e , p p . 1 1 8 - 1 3 7 .M A R G O L I S , H . C . a n d M O R E N O , E . C . ( 1 9 8 3 ) : T h e E f f e c t o f H i g hp K a A c i d s o n C a r i o g e n i c P o t e n t i a l o f P l a q u e F l u i d , IADRP r o g r 6 2 : N o . 2 1 4 .M O R R I S , D . R . a n d F I L L I N G H A M E , R . H . ( 1 9 7 4 ) : R e g u l a t i o n o fAmino A c i d D e c a r b o x y l a t i o n , Ann R e v B i o c h e m 4 3 : 3 0 3 - 3 2 5 .R E C S E I , P . A . a n d S N E L L , E . E . ( 1 9 7 2 ) : H i s t i d i n e D e c a r b o x y l a s e -l e s s M u t a n t s o f L a c t o b a c i l l u s 3 0 a : I s o l a t i o n a n d G r o w t h P r o p e r -t i e s , J B a c t e r i o l 1 1 2 : 6 2 4 - 6 2 6 .V R A T S A N O S , S . M . ( 1 9 8 1 ) : C h r o m a t o g r a p h i c M i c r o a n a l y s i s o fO r g a n i c A c i d s i n P l a q u e R e l a t e d t o Food C a r i o g e n i c i t y . I n :F o o d s , N u t r i t i o n , a n d D e n t a l H e a l t h , V o l . 3 , P a r k F o r e s t S o u t h ,I L : P a t h o t o x , p p . 8 8 - 9 1 .V R A T S A N O S , S . M . a n d M A N D E L , I . D . ( 1 9 8 2 ) : C o m p a r a t i v eP l a q u e A c i d o g e n e s i s o f C a r i e s - r e s i s t a n t v s . C a r i e s - s u s c e p t i b l eA d u l t s , JDent R e s 6 1 : 4 6 5 - 4 6 8 .

J D e n t R e s M a r c h 1 9 8 5