C HEMATOLOGIE

5/17/2018 C HEMATOLOGIE - slidepdf.com

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c . HEMATOLOGIE

16. Les elem ents c ytologiques du sang

L'hernatoloqie est l'etude du sang, c'est-a-dire des cellules sanguines et du Iiquide qui les entoure.

LES ELEMENTS CYTOLOGIQUES DU SANG

lis peuvent etre examines au microscope.

lis sont de 3 types differents:1. Les globules rouges, appeJesaussi herneties ouerythrocytes

Taille

cellules rondes, remplies d'herno-

globine. Vue de profil, l'hernatie

ressemble a un disque aminci au

centre; elle ne contient pas de noyau.

7,5J.Lm

Aspect

Concentration environ 5 x 1012 par litre

de nombre (5 000 000 rn") de sang

Role Les hernaties transportent l 'herno-

globine qui secombine avec l'oxvqene

qu'elles vehiculent des poumons dans

les tissus. Elles transportent aussi du

gaz carbonique des tissus dans les

poumons, eliminant ainsi la principale

substance en laquelle la plupart des

rnatieres organiques sont metaboliseesdans I'organisme.

2. Les globulesblancs, ou leucocytes

Aspect cellule ronde, contenant un noyau et

quelques granulations

Taille 9 a 20 J.Lm


de nombre (8000 par rnm") de sang

Role defense de I'organisme contre

I'infection.

Taille

morceaux de cellule, de forme

variable (triangulaire, etoih~e, ova Ie,

etc.) avec des granulations

2a5J.Lm

e

. .•t

~~

~ . .•

41 ~'-•

3. Les plaquettes, ou thrombocytes

Aspect


de nombre (300 000 par rnrn") de sang

RtJle elles jouent un rOle important dans la

coagulation du sang.



Volume du sang dans I'organisme

Le corps d'un adulte pesant 60 kilogrammes renfermeenviron 4 Y : ! Iitres de sang.

II peut donc sansaucun danger donner Y :! litre de sangpour une transfusion et on peut lui en prendre sansaucun risque 2 tubes de 10 ml pour analyses. Le precisera tous les malades inquiets lors de prisesde sang.

10ml

i

Coagulation du sang

Le sang recueilli dans un tube de verre sesolidifie en5 a 10 minutes et forme un caillot; il a coaqule.

Si on ajoute au sang, aussitot apres prelevement. unanticoagulant special, Ie caillot ne seforme paset Iesangreste liquide. Exemples d'anticoagulants: oxalatefluorure, citrate trisodique, sel dipotassique de I'acideEDTA, melangede Wintrobe (voir page465 et seq.i,

Que devient Ie sang coagultPApres plusieurs heures, Ie sang coaqule sedivise en deuxparties:1. un liquide jaune, Ie serum

2. une masserouge solide, Ie caillot.

Que devient Ie sang non coaguJe?

Le sangrecueilli sur anticoagulant sedivise en 2 elementsliquides:1. un liquide jaune, Ie plasma

2. les cellules sanguines, qui ont sedirnente:une mince couche de leucocytes, puis un culotd'hematies.

Ouelle difference y a-t-i l entre te plasma et Ie serum?

Le plasma contient une proteine soluble, Iefibrinoqene.Le serum ne contient plus cette substance qui s'esttransforrnee en fibrine insoluble pour former Iecaillot avec les hematies,



17. Pn!levement de sang veineux

Principe

Le sangveineux est preleve par ponction d'une veine deI'avant-bras, a I'aide d'une aiguille et d'une serjngue.

MATERIEL

Pour desinfecter la peau

- Alcool a 70% ou teinture d'iode- Coton hydrophile.

Pour faire la piqOre

Un garrot, tube de caoutchouc souple de 2 a 5 mmde diametre,

Desaiguilleslongueur: 30 a 40 mm

diemetre: 0,9 mm (20 G)*1,0 mm1,1 mm1,2 mm

biseau: moyen.

(19 G)

(18 G)

(L'appellation courante des aiguilles precise longueur et diametre.]

Pour les enfants de moins de 5 ans, on peut utiliser des aiguilles23 G (0,6 mm) ou 25 G (0,5 mm).

Stocker les aiguilles steriles chacune dans un petit tubede verre: pointe au fond contre un tampon de cotoncarde, Ie tube etant egalement bouche au coton carde,

Pour prelever Iesang

(a) Seringues (de 2, 5, 10 ou 20 rnl)

Verifier que chaque seringue s'adapte a I'aiguillecorrespondante.P. = cone de Pravaz-RecordL. = cone Luer (arnericainlLL.= cone l.uer-Lok,

(b) Flacons ou tubes

1 1 5 doivent soit etre vides, soit contenir un anti-coagulant (pour les anticoagulants voir pages68-69)et porter une marque correspondant a la quantlterequise de sang (par exemple a 5 rnl).

* G = "gauge" - mesure anqlo-arnericaine des diarnetres,



METHODE

Lire attentivement fa fiche du mafade

Determiner de combien de sang on a besoin.

- Preparer Ie flacon ou Ie tube adequat a utiliser pour

chaque epreuve,

Avant de faire la prise de sang, se laver les mains a I'eauet au savon.

Mafade au faboratoire

Le faire asseoir a cote de la table reservee aux preleve-ments de sang.

Lui faire poser Ie bras sur la table, la paume en l'air,sur un petit coussin place sous Ie coude.

Mafade afite

Lui faire bien tendre Ie bras.

Oil prefever fe sang

C'est la veine du pli du coude qui est Ie point Ie mieuxsitue, a I'emplacement Ie plus ....sible etle plus epais;--

de preference dans I'une des branches de I'Y forme -

un peu au-dessus du point de jonction 1.

On peut aussi piquer, Ie cas echeant, aux emplacements2,3 et 4.



Avec une seringue

1. Ajuster I'aiguille ala seringue, en ne touchant queI'embasede I'aiguille. Verifier I'aiguille et la seringuepour s'assurer que I'aiguille n'est pasbloquee et quela seringue est etanche,

Placer la pointe de I'aiguille dans Ie tube sterilejusqu'au moment de I'utiliser.

Placer legarrot.

2. De la main droite, tenir les bouts du garrot serre,autour du bras.

3. De la main gauche, saisir un bout du garrot et Ietirer.

4. Le replier au-dessousdu garrot serre, Le garrot doitetre juste assezserre pour ralentir I'afflux de sangetdetendre les veines, sanspour autant ralentir lacirculation sanguine dans les arteres,

5. Faire serrer Ie poing au malade plusieurs fois de suitepour faire saillir les veines.



6. Avec I'index gauche reperer I'emplacement exact dela veine a piquer.

7. Desinfecter la peau avec un tampon de teintured'iode ou d'alcool.

8. Tenir la seringue dans la main droite, I'embaseappuvee contre Iebout de I'index droit.

9. Placer I'aiguille le biseau tourne vers Ie haut.

L'enfoncer au centre de la veine, sanshesiter,

Attention:

Ne jamais aborder une veine par Ie cote.Ne jamais piquer avec Ie biseaude I'aiguille tournevers Ie bas.



On percoit que I'on traverse:

(a) la paroi de la peau qui resiste

(b) puis la parol de la veine qui resiste moins (tissu plus

souple).

10. Enfoncer I'aiguille de 1 a 1,5 cm Ie long de la veine.

11. De la main gauche, tirer h~gerement Ie piston de la

seringue, dans laquelle Ie sang doit apparaftre.

Continuer a tirer lentement Ie piston pour remplir

la seringue de sang.

12. Enlever alors Ie garrot, en tirant sur Ie bout replie.

13. Placer un tampon sec la O U I'aigui lie est enfoncee,

Retirer I'aiguille d'un coup sec d'en dessous du

tampon.



14. Demander au malade de maintenir (avec son autre

main) Ie coton sur la piqure pendant3minutes,

bras toujours tendu.

II n'est plus conseille de faire replier Ie bras sur Ie

tampon d'alcool (risque d'hematome).

15. Enlever I'aiguille de la seringue.

Remplir jusqu'a la marque les tubes ou flaconsprevus.

Retourner plusieurs fois de suite ceux qui contien-

nent de I'anticoagulant.

16. Inscrire clairement sur les flacons:

Ie nom du maladela date

Ie nurnero du malade, la consultation ou Ie

service, si possible.

Rincer aussitot seringue et aiguille a I'eau froide.

PRElEVEMENT DE SANG CAPlllAIRE

le prelevernent de quelques gouttes de sang du doigt

(ou de I'orteil chez les nourrissons) est suffisant pour

differents examens de laboratoire comme:

concentration globulaire (numeration globulaire)

fraction de volume ervthrocvtairedosage de I'hemoglobine

recherche de parasites.

On peut util iser:

des vaccinostyles a jeterdes lancettes sterilesdes aiguilles chirurgicales de type Hagedorn (No.7

ou 8).

Pour la technique de prelevernent du sang capillaire,

voir page 189.



STERILISATION DES LANCETTES ET DESAIGUILLES

Placer lancettes et aiguilles prop res dans des petits tubesen verre, bouches au coton carde, et les steriliser a l'auto-clave ou au sterilisateur a chaleur seche.



18. Concentration leucocytaire (numeration des leucocytes)

Le nombre de leucocytes (globules blancs) contenus dans un litre de sangs'appelle la concentration leucocytaire.

(Dans lesunites tradltionnelles, il est exprime en nombre de globules par millimetre cube et appele numerationleucocytaire ou numeration des globules blancs. Dans Iesvsteme 51 , il s'agit d'une concentration de nombre.)

Principe

Le sangest dilue a I'aide d'un diluant leucocytaire qui:- hernolvse (detruit) les hernaties- laisseintacts les leucocytes.

On compte alors les leucocytes dans une cellule, au microscope, et on en calcule Ienombre par litre de sang.

IntarAt

Dansdifferentes maladies, Ie nombre de leucocytes du sangest modifie. II peut par exemple augmenter tressensiblement.

MATERIEL

Pipettes

1. Pipette pour sangqraduee a 50 III (0,05 ml ou50 mrrr"} , avectube de caoutchouc termine par un

embout.Les pipettes a bulbe sont deconseillees, car elles sontirnprecises, difficiles 11employer et a nettoyer, et pluscouteuses.

2. Pipette qraduee d'1 rnl,

Onpeut utiliser ditterents types de eel/utes hemstimetres,no tamment:

celie de Neubauer arnelioree, de preference " a lignesbri "antes"celie de Burker,

La cellule de Thoma n'a qu'une petite zone quadrillee et n'estdone pas a conseiller.

La cellule est fournie avecune lamelle speciale.

Liquide dituant

- Solution de Turk (reactif No. 53)

Compteur a main, si possible.



METHODE

1. A I'aide d'une pipette qraduee d'1 ml, verser 0,95 mlde diluant dans un petit flacon. o

2. Aspirer du sangveineux ou capillaire jusqu'a lamarque 0,05 ml de la pipette pour sang. Ne pas

laisserpenetrer de bulles d'air. Si I'on util ise du sangveineux, s'assurer qu'il est bien melange a I'anti-coagulant (voir page68) en renversant Ieflacon aplusieurs reprises, pendant une minute, immediate-ment avant de prelever a la pipette.

3. Essuyer exterieurernent la pipette avecdu papierabsorbant. S'assurer que Ie niveau du sangcoincideavec Ie repere,

4. Souffler Iesangdans Ie flacon contenant Ie diluant.Rineer la pipette en aspirant et en refoulant Ieliquide a 3 reprises,La dilution de sangest de 1:20.Inscrire Ie nom et Ie numero du malade sur Ieflacon.

5, Fixer avecsoin la lamella a la cellule en exercant unepression suffisante. '

Quand la lamelle est bien en place, on voit apparaftre des bandescolorees, d ites anneaux de Newton, entre lesdeux surfaces vitrees,



6. Bien rnelanqer Ie sangdilue,A la pipette Pasteur, remplir une chambre de lacellule, en prenant garde de ne pasdepasser la partielignee.

Attention: Si Ie liquide deborde de la zone situeeentre les 2 chambres, recommencer l'operation:retirer la lamelle, la nettoyer ainsi que la cellule, etremettre une nouvelle goutte de sang.

7. Laisser reposer 3 minutes pour permettre auxglobules de sedeposer.

8. Mettre la cellule sur la platine du microscope.Utiliser I'objectif 10 x (oculaires 6 x ou 10 x).Heduire la quantite de lurniere penetrant dans Iecondenseur en modifiant Iediaphragme de I'iris.

Mettre au point sur les lignes de la cellule et sur lesleucocytes.

Ne pas prendre des grains de poussiere pour desleucocytes.



Numeration des leucocytes

(a) Avec la cellule bemetimetre de Neubauer (emetioree}

- Superficie de la chambre = 9mm?

- Profondeur de la chambre = 0,1 m m

Compter les leucocytes dans une zone de 4 mrn? enutilisant les cartes nurnerotes 1,3, 7 et 9, commeindique sur Ie schema.

Pour ceux qui sont a cheval sur les lignes, lescompter comme s'ils appartenaient au carre situe agaucheou en dessous, comme dans Ieschemaci-apres, qui reproduit I'un desgrands cartes 1,3, 7ou 9.

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Calcul du nombre de leucocytes contenus dans 1 litre de sang: *

- Multiplier Ie nombre de leucocytes cornptes dans les4 cartes par 0,05- Noter Ie resultat "nornbre x 109/1"

Exemple:

Nombre de leucocytes cornptes = 188

Nombre de leucocvtes dans 1 litre = (188 x 0,05) x 109

Hesultat: 9,4 x 109/1

Explication du calcul

Chacun desquatre cartes dans lesquelssont cornptes les leucocytes couvre 1 rnrn", soit au total une surface de4 m r n " . La profondeur de la cellule est de 0,1 rnrn, et Ievolume dans lequel sont cornptes les leucocytes est donc4 x 0,1 = 0,4 m r n " . Ainsi, en divisant par 4 et en multipliant par 10 on obtiendra Ie nombre de leucocytes dans1 rnrrr' de sangdilue. Comme la dilution est de 1:20, en multipliant par 20, on obtiendra Ie nombre de leucocytes

contenus dans 1 mm' de sang pur. Enfin, comme iI y a 1 million (106

) de rnillimetres cubes dans 1 litre, enmultipliant par 106 on aura Ie nombre de leucocvtes par litre de sangpur.Tout ceci peut se resumer comme suit:

Nombre de leucocytes par litre = nombre de leucocytes comptes x lOx 20 x 1064

= nombre de leucocytes comptes x 50 x 106

= nombre de leucocvtes cornptes x 0,05 x 109

Exemple:

On a compte 188 leucocytes dans les4 carres, Leur nombre par millimetre cube de sangpur est donc

188 x 10 x 20 (= 188 x 50 = 9400)4

et leur nombre par litre: 188 x 1 0x 20 X 106 = 9400 X 106 = 9,4 X 109

*Le calcul et I'exemple sont donnes en unites SI. Toutefois, Ie texte mentlonne aussi l'unite traditionnelie (nombre de globules par

millimetre cube) chiffre obtenu en multipliant par 50 Ie nombre de globules comptes,



(b) Avec la cellule hemetimetre de Bilrker

- Superficie de la chambre = 9mm?- Pro fondeur de la chambre = 0,1 mm

Compter les leucocytes dans une zone de 4 rnrn?,en utilisant les cartes nurnerotes 1,3, 7 et 9, commeindique sur Ieschema.

Tenir compte des leucocytes sltues a cheval sur leslignes de chaque carre compte (voir page363).

. . .~

• , • •Calcul et exemple: comme pour la cellule de

Neubauer.

Note: Si on utilise une cellule-hernatlrnetra de Malassez: celle-ci est divlsee en 100 rectangles de 1/1 OOmm3

• dont 25 sont divises en20 carres pour faci liter Ie comptage. Une bande de 10 rectangles correspond Ii 1/1 Omrn". Pour la numeration des erythrocytes,compter au moins 5 rectangles (1120mm3 I, en comptant les erythrocytes IIcheval sur 2 rectangles. Multipl ier Ietotal des5 rectangles par 20 puis par Ie taux de dilution du sang, pour obtenir Ie nombre d'ervthrocvtas par mm" .

RESULTATS

Chiffres normaux

Unites SI

(nbrede leuc x 109 par litre)

Unites traditionnelles

(nbre de leue par mm")

Hommes et femmes

Enfants de lOans

Enfants de 3 ans

Nourrissons (3 a 9 mois)Nouveau-nss

4-10

4-10

4-11

4-1510-20

4000-10000

4000-10000

4000-11000

4000-1500010000-12000

Chiffres eleves

On appelle leucocytose un accroissement du nombre de leucocytes dans Iesangcirculant. Elle peut etre due acertaines infections bacteriennes pvoqeniques, Dans la leucemia, on peut constater des concentrations leucocytairesallant de 50 x 10911 a 400 x 10911 (50000/mm3 a 400 000/mm31 , voire davantage. II convient alors, lorsqu'oncalcule la concentration de nombre, d'utiliser une dilution plus elevee - par exemple 0,05 ml de sanget 1,95 ml dediluant, soit une dilution de 1:40. En ce cas, Ie nombre de leucocytes comptes sera rnultiplie non plus par 0,05 maispar 0,1, pour donner Ie nombre rnultiplie par 109 par litre (dans Ie svsteme traditionnel, multiplier par 100 au lieude 50 pour obtenir Ie nombre par millimetre cube).

Chiffres faibles

On appelle leucopenie une diminution du nombre de leucocytes dans Iesangcirculant. Elle peut accompagnercertaines infections comme la tvphoide ou Ie paludisme. Elle parait egalement a la suite de I'absorption de

certains medicaments. Ouand la concentration leucocytaire est tres faible, il faut util iser une dilution moindre, parexemple 0,05 ml de sangpour 0,45 ml de diluant, soit une dilution de 1:1O . En ce cas, Ie nombre de leucocytescornptes sera rnultiplie non plus par 0,5 mais par 0,25 pour donner Ie chiffre x 109 par litre (dans Iesvsternetraditionnel, multiplier par 25 au lieu de 50 pour obtenir Ie nombre par millimetre cube). '

Correction pour hematies nuclsees

Normalement il n'y a pasdans Iesangd'hematies nucleees, notamment de normoblastes (voir page403). Maiselles peuvent apparaitre dans certaines maladies cornrne les anernies a hernaties falciformes et d'autres anemiashemolvtiques, Les normoblastes ne sont pashemolyses dans Ie liquide diluant et sont donc cornptes avec lesleucocytes. Ouand ils sont presents en grand nombre, la concentration leucocytaire doit etre corriqee comme suit.

Examiner un etalernent mince de sangcolore au Romanowsky (voir page 393) et compter Ie nombre de normo-blastes pour 100 leucocytes.



Calcul*

Concentration de normoblastes (par litre):

Nombre de normoblastes cornptesx concentration leucocytaire

100 + Nbre de normoblastes cornptes

Exemple

Si l'on a compte 50 normoblastes et que la concentration leucocytaire est 16 x 10

9

/1, la concentration de normo-blastes est:

50x 16 = 5,3 x 109/ 1

100+ 50

et la concentration leucocytaire apres correction 16 - 5,3 = 10,7 x 109/ 1 .

*Oans Ie svsterne traditionnel, les concentrations de normoblastes et de leucocytes sont exprimees par millimetre cube. En ce cas, Iecalcul de I'exemple ci-dessus serait:

50x 16000 = 5300/mm3

100 + 50

Numeration leucocytaire apres correction = 16000 - 5300 = 10 700/mm3.



19. Concentration erythrocytaire (numeration des hematles)

On appelle concentration ervthrocvtaire Ie nombre d'ervthrocvtes (globules rouges, hematies) contenus dans 1 litre

de sang. (Avec les unites traditionnelles, elle est exprirnee en nombre de globules par millimetre cube et appeleenumeration ervthrocvtaire, Dans Ie svsterne 51 , il s'agit d'une concentration de nornbre.) Elle est difficile a calculerde fallon precise avec une cellule, aussi est-il conseille de determiner plutot la fraction de volume ervthrocvtaire

(hernatocrite) et de doser l'hernoqlobine. Cependant, pour les cas ou I'on ne peut calculer cette fraction de volume,

on exposera ci-apres la marche a suivre pour etablir la concentration ervthrocvtaire.

Principe

Le sang est dilue dans un liquide approprie.On compte les hernaties au microscope, dans une cellule

hernatirnetre, et on calcule Ie nombre par litre de sang.

MATERIEL

Pipettes:(a) pipette pour sang (souvent appelee pipette de

Sahli), qraduee a 0,02 ml (20 rnrn ' ou 20 ~I),

avec tube en caoutchouc termi ne par un embout.

L'utilisation de pipettes a bulbe n'est pas recommandee,car elles sont peu precises, difficiles a employer et anettoyer, et plus couteuses,

(b) pipette qraduee de 5 ml.

Cellule-hernatirnetre. II en existe de plusieurs types;

c'est la cellule amelioree de Neubauer qui seradecrite ici.

Liquide diluant - solution de formol citrate

(reactif No. 27).

Compteur a main, si possible.

~

U

METHODE

1. A I'aide de la pipette qraduee de 5 rnl, verser 4,0 ml

de diluant dans un petit flacon.

2. Aspirer du sang veineux ou capillaire jusqu'a la

marque 0,02 de la pipette pour sang. Ne pas laisserpenetrer de bulles d'air. Si I'on utilise du sang

veineux, s'assurer qu'iI est bien melange a I'anti-coagulant (voir page 68) en renversant Ie flacon

a plusieurs reprises, pendant une minute, immedla-

tement avant de prelever a la pipette.

A ! ! l l l I~



3. Essuyer exterieurernent la pipette avec du papier

absorbant.

S'assurer que Ie niveau du sang coincide toujours

avec Ie repere,

4. Souffler Ie sang dans Ie flacon contenant Ie diluant.Rineer la pipette en aspirant et en refoulant Ie

liquide a 3 reprises.La dilution de sang est de 1 :200.

Inscrire Ie nom et Ie nurnero du malade sur Ie flacon.

5. Fixer la lamelle a la cellule, comme iIest dit page 361.Bien melanqer Ie sang dilue.

A la pipette Pasteur, remplir les deux chambres de la

cellule, en prenant garde de ne pas depasser les zones

quadrillees.

6. Laisser reposer 3 minutes pour permettre aux

globules de se deposer.

7. Mettre la cellule sur la platine du microscope. A

I'aide de I'objectif 10 x, trouver Ie carre central de la

cellule, puis passer a I'objectif 40 x pour compter leshernaties,



Numeration des hematies

Utiliser une cellule lignee arnelioree de Neubauer:

Compter lesMmaties dans une zone de 0,2 m rn? , enutilisant les cartes marques A, B , C, D et E.

Pour les hernaties placees a cheval sur deux cartes, lescompter comme indique ci-dessous.

Ce carre reproduit run des cinq consideres (A, B , C,

D ou E).

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I Ii I I I i l lNote: Pour lacel lule de Malassez, compter les cel lules nucleees dans 10 bandes (1 rnrn"}, et multiplier Ie total des 10 bandes obtenu par Ie taux de

dilution du sang pour obtenir Ie nombre de leucocytes par mrrr' .

Calcul du nombre d'hemeties contenues dans 1litre de sang:

Multiplier par 0,01 Ie nombre d'hernaties cornptees dans Ie premier groupe de cinq carres,Faire de rnernepour Iedeuxierne groupe de cinq carres,Faire la moyenne de cesdeux chiffres.Noter Ie resultat "nornbre x 1012 /1".

Exemple:

Nombre d'hernaties cornptees dans (a) la premiere chambre quadrillee = 390

Nombre d'hernaties cornptees dans (b) la deuxieme chambre quadrillee = 370

Nombre d'hernaties par litre (a) = (390 x 0,01) x 1012 = 3,9 x 1012

Moyenne (resultat note) = 3,8 x 1012/ 1 .

Explication du calcul

Chacun desquatre cartes dans lesquelssont cornptees les hernaties couvre 0,04 rnrn?, soit une superficie totale de0,2 rnrn" . La profondeur de la cellule est de 0,1 mm, et Ie volume dans lequel sont cornptees les hernaties est doncde 0,2 x 0,1 = 0,02 mrn". Ainsi, en divisant par 2 et en multipliant par 100 (c'est-a-dlre en multipliant par 50), onobtiendra Ie nombre d'hernaties par millimetre cube de sangdilue, La dilution etant de 1:200, en multi pliant par

200 on obtiendra Ie nombre d'hernaties par millimetre cube de sangdilue. Enfin, comme il ya 1 million (106) dernillirnetres cubes dans 1 litre, en multipliant par 106 on obtiendra Ie nombre d'hernaties contenues dans 1 litre desang pur. Tout cecl peut se resumer comme suit:

Nombre d'hernaties par millimetre cube = nombre d'hernaties cornptees x 50 x 200= nombre d'hernaties cornptees x 10000

La concentration ervthrocvtaire est si eleveequ'il est plus facile de la noter en millions.

Nombre d'hernaties par millimetre cube = nombre d'hernaties comptees x 10000 millions1000000

•= (nombre d'hernaties cornptees x 0,01) millions

= (nombre d'hernaties cornptees x 0,01) x 106

Le nombre d'hematies dans 1 litre seraegal a 106 fois ce chiffre, soit:

Nombre d'hernaties par litre = nombre d'hernaties cornptees x 0,01 x 106

X 106

= nombre d'hernaties cornptees x 0,01 x 1012

Exemple:

On a compte 390 Mmaties dans Ie premier groupe de cinq carres, Leur nombre dans 1 rnrn" de sang pur est donc390 x 0,01 x 106 = 3,9 millions. La concentration par litre de sang pur est 390 x 0,01 x 1012

, ou, 3,9 x 1012/ 1 .



RESULTATS

Concentrations normales

HommesFemmes

Enfants (4 ans)Nourrissons (1 a 6 mois)Nouveau-nes

Unites 51 :

hernaties x 106 par litreUnites traditionnelles:

millions d'hernatiespar millimetre cube

Relevons que les chiffres sont les memes en unites 51 et en unites traditionnelles, soit 5,0 x 1012/1 ou 5,0 millions/rnm", encore que, enunites traditionnelles, on ecrlve parfois tous leszeros, par exemple 5000 000/mm3.

4,5-5,54,0-5,0

4,2-5,23,8-5,25,0-6,0

4,5-5,54,0-5,0

4,2-5,23,8-5,25,0-6,0

Concentrations faibles

Maladesatteints d'anernie due a une perte d'hernaties ou a une hernolvse deshernaties.

Concentrations elevees

Maladesdeshvdrates ou atteints de polvcvthernie.

NETTOYAGE DU MATERIEL

1. Materiel et produits de nettoyage

On doit pouvoir disposer d'une gammede produits varies pour I'entretien de tout Iemateriel: pipettes, hernati-metre, lamelles, etc. Les produits recornmandes ici sont tous d'usage courant et faciles a trouver:

poire en caoutchouc et, si possible, trompe a videbechers de 500 et 50 mlalcool a 95°. Ether. Acetone

acide acetique 5 mlsolution aqueused'acide acetique a 0,5%: eau distillee _1000 ml.melange sulfo-chromique (reactif No. 51)si possible, bicarbonate de soude.

2. Pipettes: nettoyage quotidien

(a) Trempage

Faire tremper les pipettes dansde I'eau ordinairepropre.

(b) Nettoyage

A I'aide d'une trompe a vide ou d'une poire encaoutchouc, aspirer dans chaque pipette:- de I'acide acetique dilue (3 fois)- de I'eau propre, de I'eau distillee si disponibleen abondance (4 fois)

- de I'air (pipette tenue la pointe en haut)- de I'acetone (1 fois)- de I'air (pour un sechaqeaussi complet quepossible).

(c) Secheqe

Si possible a l'incubateur, a 37°C, en y laissantles pipettes toute la nuit dans un recipient garni

de coton carde.

Si l'on veut reutiliser irnrnediaternent une pipette,la passer:

a I'eau, distillee de preferencea l'ether

- la secher cornpleternent a I'air.



3. Pipettes: nettayage mensuel (au plus frequent,Ie cas echesnt]

(a) Faire tremper les pipettes pendant 12 heuresenviron dans un becher plein de melange sulfo-chromique.

(b) Les rincer exterieurernent, puis interieurernenta I'eau du robinet.

(c) Les plonger pendant 12 heures dans un becherrempli d'une solution faible de bicarbonate desoude (10 g/I environ, soit 1%).

(d) Les nettoyer comme il est dit plus haut sous"nettoyage quotidien".

4. Pipettes bouchees

Essayerd'enfoncer un crin de nylon fin (type 000)

par Ie haut de la pipette tout en aspirant par lapointe.

En casd'echec, laisser tremper pendant 12 heuresdans un becher de melange sulfo-chromique.

5. Nettayage des cel/ules hemetimetres et des lamel/es

Nettoyer Ie plus vite possible apres usage:Faire tremper 2 a 3 heuresdans une solutiondeterqente,

Bien rincer sous Iejet du robinet.Rincer si possible a I'alcool.Secher a I 'aide d'un chiffon doux.

Nejamais util iser de poudre abrasive qui rayerait lasurface quadrillee.

Apres plusieurs epreuves, nettoyer Ie plus vite possible en rincant a I'eau et enessuvant avec un chiffon propre etdoux. Une fois par mois, la cellule exige un nettoyage plus approfondi comme decrit ci-dessus.



20. Hemoglobine: dosage de la cyanmethemoglobine,

methodephotomstrlque

L'hemoqlobine est Ie pigment rouge des hernaties, Elle est forrnee de chaines proteiniques et de moleculesrenfermant du fer. Elle apporte l'oxvqene aux cellules tissulaires du corps.

Unites de mesure

A strictement parter, l 'unite SI qui exprime lesconcentrations d'hemoqlobine est la millimole par litre (mmol/I).Ouand on I'utilise, il faut preciser a quelle structure chimique elle s'applique. En pratique, cela signifie que l'ondevrait employer I'expression "hernoqlobine (Fe)", au lieu de dire simplement "hernoqlobine". Toutefois, a titre

provisoire, en attendant d'adopter la millimole par litre, certains laboratoires utilisent l'unite "gramme par litre"(g/l). En ce cas, Ie terme "hernoqlobine" suffit et iI n'est pas necessairede preciser "hernoqlobine (Fe)". On peutconvertir en millimoles par litre lesvaleurs exprimses en grammes par litre en lesmulti pliant par 0,062. Exemple:

hernoqlobine 150 g/I x 0,062 = hemoglobine (Fe) 9,3 mmol/I

Dansce Manuel, les calculs et valeurs sont generalement exprirnes souscesdeux formes. II convient de noter que sil 'on utilise l'unite "gramme par litre", lesvaleurs sont 10 fois superieures a l 'unite traditionnelle "gramme par100 ml". Ainsi, 150 g/I = 15,0 g/100 ml.

Principe

Le sangest dilue dansdu reactlf de Drabkin, qui hernolvse les hernaties, lestransformant en cvanrnethemoqlobine.La solution obtenue est examinee au spectrophotometre. Sadensite optique est proportionnelle a la quantited'hernoqlobine du sang.

Cette methode est celie qui donne les estimations d'hernoqlobine les plus precises, Elle do it etre preferee auxautres dans toute la mesure possible.

MATERIEL

Photocolorirnetre" ou spectrophotometrePipettes(a) Pipette pour sang(Sahli) graduee a 0,02 ml

(20 rnrrr' ou 20 J L I ) , avectube en caoutchouc etembout

(b) Pipette qraduee de 5 ml

Tubes a essaiDiluant de Drabkin (reactif No. 18).

Ce reactif peut I!tre achete en poudre ou en comprirnes 11dissoudre dans 1 litre d'eau distillee. Si I'on possede unebalance de precision, on peut Iefabriquer au laboratoire(voir react if No. 18). II peut etre conserve 1 mois dans unflacon bruno Si la solution devient trouble, la jeter.

On ne doit pas laisser congeler Ie reactif de Drabkin, car ilen resulterait une decoloration avec reduction duferricyanure.

Cvanrnethemoqlobine de reference (etaton)

Peut i!tre achetee, ou obtenue aupres d'un laboratoire dereference.La concentration d'une solution de reference du commerceest generalement donnee en miliigrammes pour 100 ml(indiquee Ieplus souvent en mg%).

*On peut utiliser un appareil fonctionnant sur courant electriqueou sur batterie d'automobile. L'UNICEF en possede un modeledont la reference est 09.309.98 (110 V - batterie) ou 09.310.00(220 V - batterie).



ETALONNAGE DU COLORIMETRE

Avant de pouvoir utiliser Ie colorirnetre pour Ie dosagede l'hernoqlobine, il faut preparer une courbe d'etalonnaqe.A partir de cette courbe, on pourra tracer un graphique etdresser un tableau indiquant les quantites d'hemoglobine.

Methode

1. A I'aide de la formule ci-apres, calculer la teneur en Mmoglobine de la solution de reference, en grammes parlitre:

concentration en mg/l00 ml x lOx 251

1000

(Note: 10 est Ie facteur de conversion de 100 ml en 1 litre, 1000 est Ie facteur de conversion des milligrammesen grammes et 251 Ie facteur de dilution de 0,02 ml de sangdilues avec 5 ml de reactif de Drabkin.)

Etant donne que 10 x 251/1 000 est tres presde 2,5, la formule ci-dessuspeut etre sirnplifiee comme suit:*teneur en hernoqlobine d'une solution de reference en grammes par litre = concentration en mg/l00 ml x 2,5

Exemple

Concentration de la solution de reference = 60 mg/l00 ml

Teneur en Mmoglobine = 60 x 2,5

= 150 g/I

*Si I'on utilise une dilution de 1:200 (soit 0,02 ml de sang pour 4 ml de reactif de Drabkin), multiplier par 2,0 au lieu de 2,5.

2. Faire une serie de dilutions de la solution etalon:preparer 4 tubes et les nurneroter de 1 it 4it I'aide d'une pipette, y verser Iemelange suivant:

Nurnero dutube 1 2 3 4

Solution

etalon 4,0 ml 2,Oml 1,3 ml 1,0 ml

Diluant de

Drabkin - 2,Oml 2,7 ml 3,0 ml

Dilution de la

solution etalon Solution pure 1:2 1:3 1:4

00

00



3. Melanger et laisser reposer 5 minutes.

I , I

!I

I "I I ,

!':'I I, '

I~' "_ I

\,.1

4. Lire les dilutions au colorirnetre:

placer un ecran vert (liford No. 625) dans Ie

colorimetre ou fixer la longueur d'ondes it

540 nanornetres (nm)

remplir de reactif de Drabkin un tube i t essai

ou une cuve de mesure et Ie mettre dans Ie

colorimetre

mettre Ie colorimetre it zero

lire les densites optiques des tubes 1 i t 4, enutilisant un tube it essai ou une cuve de mesure.

S'assurer que I'aiguille revient i t zero entre chaque

lecture.

5. Preparer un graphique en comparant les lectures des

solutions eta Ions it celles des concentrations.

Exemple

Concentration de la solution de reference calculee pour

15 g/I

Etalon: Concentrat ion DensiteDilution d'hemoqlobine optique

(g/I)

Solution pure 150 35,0

1:2 150 = 75 17,52

1:3 3 150 = 50 11,53

1:4 150 = 37 5 8,54 '

6. A partir du graphique:

dresser un tableau des teneurs en hemoglobine

allant de 20 it 180 g/1.

~'e nc

'"o

i f ' l t ~ ~ -__ _1 _ _ L ____ l_ J _

50 100 150

Hemog lob ine (g /I )

oo

Attention:

Au debut de chaque journee de travail:

nettoyer les tubes i t essai ou les cuves de mesure du colorirnetre

remplir de reactif de Drabkin I'un des tubes nettoves pour remettre it zero Ie colorimetre

lire une solution de reference, soit:

(a) la solution de reference frafche de cvanmethemoqlobine utilisee pour etalonner I'appareil, soit

(b) une solution de reference prealablernent etalonnee par rapport it la cvanrnethemoqlobine etalon.



DOSAGE DE l'HEMOGlOBINE A PARTIR DE SANGDES MAlADES (cvanrnethemoqiobine)

1. A I'aide d'une pipette, verser 5 ml de reactif deDrabkin dans un tube a essai.

A la pipette de Sahli, aspirer du sangveineux oucapillaire jusqu'a la marque 0,02 rnl. Ne paslaisserpenetrer de bulles d'air. S'il s'agit de sangveineux,s'assurer qu'il est bien melange en renversant Ie flaconqui Ie contient avec I'anticoagulant (voir page68), aplusieurs reprises, pendant 1 minute, juste avant de Ieprelever a la pipette.

2. Essuyer la pipette exterieurernent. Verifier que Ie

sangatteint toujours Ie repere,Souffler Iesangmesuredans Iereactif et rincer lapipette en aspirant et en refoulant a 3 reprises Ieliquide dans Ietube.

3. Melanger Ie contenu du tube et attendre 5 minutes.

I I'

/ I'I I'

/ ,{ I

I I fI I f

,~' I I\~ I

\,J

4. Mettre Ie colorimetre a zero avecdu reactif deDrabkin.

Placer Ie melange sangdu malade/reactif de Drabkindans la cuve de lecture et lire la densite optiquecorrespondante.

Si Ie sangdilue setrouble, cela peut etre dO a lapresencede proteines anormales du plasma ou a uneconcentration leucocytaire elevee. Centrifuger Ieliquide avant de lire Ie resultat,

Reporter Iechiffre obtenu sur la courbe d'etalonnaqepour en deduire la teneur en hernoqlobine, en gil.

RESUlTATS - VAlEURS NORMAlES

Enfants a la naissanceEnfants de 1 an

Enfants de 1011 12 ans

Femmes

Hommes

Hernoqlobine (Fe)

mmol/I

Hemoqlobine

g/I

8,4-12,1

7,0- 8,1

7,1- 9,2

7,1-10,2

8,1-11,2

136-196

113-130

115-148

115-165

130-180



21. Hemoglobine: utilisation d'un comparateur

Principe

C'est une methode visuelle pour estimer la quantited'hernoqlobine. " s'agit de comparer la solution aexaminer a une serie etalonnee de tubes temoins colorescorrespondant a differentes quantites d'hemoglobine.

MATERIEL

Comparateur d'Mmoglobine avec tubes temoinscorrespondant a une quantite d'hernoqlobine de 3 a13 g par decilitre (g/dl)Deux tubes pour comparateur

Pipettes de 0,05 ml (50 rnrn" ou 50 I L l )

Diluant d'hernoqlobine. " s'obtient en ajoutant0,4 ml de solution ammoniacee forte a 1 litre d'eaudistillee.

METHODE

1. Verser 10 ml de diluant dans un tube a essai.

2. Aspirer du sangveineux ou capillaire jusqu'a lamarque 0,05 ml (50 rnrrr' ou 50 ILl) de la pipette.Ne pas laisser penetrer de bulles d'air. Pour Iesangveineux, s'assurer qu'il est bien melange a l'anti-coagulant (voir page68) en renversant Ie flacon quiles contient, a plusieurs reprises, pendant 1 minute,immediatement avant de Ie prelever a la pipette.

3. Essuyer exterieurernent la pipette, verifier que Iesangatteint toujours la marque et Ieverser dans les10 ml de diluant.

4. Melanger.

Le liquide deviendra rouge clair quand les hematiesseront hernolvsees, couleur qui persistera pendantquelques heures.

5. Remplir de liquide un des tubes du comparateur,jusqu'a la marque. Soulever Ie couvercle et mettreIe tube dans la partie droite du comparateur.

~

.

.



6. Remplir de diluant un autre tube du comparateur,

jusqu'a la marque, et Ie mettre du cote gauche du

comparateur. Rabattre Ie couvercle.

7. En tenant I'appareil face a la lurniere du jour,

regarder par I 'ouverture prevue a cet effet, comme

indique sur Ie dessin.

8. Proceder a la lurniere du jour, mais sans s'exposer

directement aux rayons du solei I.

9. En commenc;:ant par les temoins les plus pales,

comparer chacun d'entre eux a la couleur de la

solution, telle qu'elle apparaft dans la partie gauche

de I'ouverture.

Ouand les couleurs sont aussi proches que possible,

faire un dernier controle en comparant avec les

temoins de chaque cote du tube retenu.

10. Lire la quantite d'hernoqlobine en grammes par

decilltre (g/dl), telle qu'elle apparait sur Ie disque

utilise pour faire pi voter les tubes temoins.

11. Si I'on hesite entre deux couleurs, prendre la valeur

interrnedlaire entre les deux.

Si Ie sang dilue est plus fence que l'etalon

correspondant a 3,0 g/dl, indiquer que la quantite

d'hemoglobine depasse 3,0 g/dl. Ou faire une

dilution supplernentaire en utilisant un volume

egal de sang dilue et de diluant (2,5 ml de chaque).

Multiplier par 2 Ie resultat obtenu.

(Multiplier par 10 pour obtenir la teneur en

hernoqlobine en g/I ou par 0,62 pour obtenir la

quantite d'hemoglobine (Fe) en mmol/I.)



22. Hemoglobine: dosage par la methode de Sahli

Principe

Le sang est dilue dans une solution acide, ce qui

transforme I'hemoglobine en hernatine acide, qui est

alors comparee a une solution ternoin coloree.

MATERIEL

Hernoqlobinornetre de Sahli

Pipette de Sahli (qraduee a 20 rnrrr' r soit 0,02 ml

ou 20 ILl)Petit agitateur de verre

Pipette compte-gouttesPapier absorbant

0,1 mol/I (0,1 N) d'acide chlorhydrique (HCI)

(reactlf No.4).

METHODE

1. Verser 0,1 mol/I de HCI, jusqu'a atteindre la marque

20 (ou la marque 3 g/100 mil du tube qradue.

2. Aspirer du sang veineux ou capillaire a la pipette de

Sahli, jusqu'a la marque 0,02 ml. Ne pas laisser

penetrer de bulles d'air. S'il s'agit de sang veineux,

s'assurer qu'il est bien melange a I'anticoagulant(voir page 68) en renversant Ie flacon qui les

contient, a plusieurs reprises, pendant 1 minute,

irnrnediatement avant de Ie prelever a la pipette.(Ne pas prendre la premiere goutte de sang perlant

sur Ie doigt.)

3. Essuyer exterieurernent la pipette avec du papier

absorbant. Verifier que Ie sang atteint toujours Ierepere,

Methode inexacte

La methode de Sahli ne donne pas un dosage exact del'hernoqlobine. Tous les types d'hernoqlobine du sang

circulant ne se transforment pas en hernatine acide;visuellement, les changements de couleur ne sont pastres sensibles et la couleur brune de la solution ternoinn'est pas vraiment semblable it celie de l'hernatine

acide.Cette methode n'est decrite ici que parce qu'elle estencore employee dans certains laboratoires, mais elleest deconseillee,

4. Souffler Ie sang de la pipette dans Ie tube qradue de

solution acide.Rineer la pipette en aspirant et en soufflant 3 fois

la solution acide.

Le melange sang et acide prend une coloration

brunatre,

Attendre 5 minutes.



5. Placer Ie tube gradue dansl'hernoqlobinometre.Seplacer face it une fenetre,Comparer la couleur du tube de sangdilue it celie

du tube ternoin,

Si la couleur est la meme ou si elle est plus claire,la quantite d'hernoqlobine est de 40 g/I au plus.

6. Si la couleur est plus foncee, continuer it diluer enajoutant goutte a goutte 0,1 mol/I d'HCI.Melanger avec I'agitateur apreschaque goutte.Retirer I'agitateur et comparer la couleur desdeux

tubes. .Arreter lorsque les2 tubes ont la merne couleur.On peut aussi a ce stade utiliser de I'eau distil leeau lieu de HCI pour poursuivre la dilution.

7. Noter la graduation atteinte, Selon Ie type d'herno-qlobinornetre utilise, on obtient la concentrationd'hernoqlobine soit en g/100 ml, soit en pourcentagede "la normale" (ce dernier type, voir dessin, n'estpas a conseiller). Pour passerdesg/1oo ml aux g/I,multiplier par 10. Pour passerdespourcentages auxg/I, multiplier par 1,46.

Exemples:

(a) 14,8 g/1oo ml x 10 = 148 g/I(b) 85% x 1,46 = 124 g/I

(La methode de Sahli est si peu precise qu'on ajuge superflu de donner les facteurs necessairespour convertir ceschiffres en mol/I.)

- 85%



23. Fraction de volume eythrocytaire

Principe

On appelle fraction de volume ervthrocvtaire Ie volume total d'ervthrocvtes (globules rouges, hernaties) present

dans un volume de sang donne, divise par ce volume de sang. Ainsi, si Ie volume des hernaties dans 1 litre (1000 mil

de sang est de 450 ml, la fraction de volume ervthrocvtaire est egale a 450 ml: 1000 ml = 0,45 (etant donne qu'il

s'agit de millilitres divises par des millilitres l'unite "rnl" dlsparait et Ie resultat obtenu est une simple fraction

decim ate , sans unite). Le reste du sang est compose presque entierernent de plasma, ainsi que d'un petit volume de

leucocytes (globules blancs). Si I'on ne tient pas compte de ces derniers, la fraction de volume plasmatique dans

I'exemple ci-dessus serait de 550 ml : 1000 ml = 0,55 (soulignons que 0,45 + 0,55 = 1,0, c'est-a-dire que fraction

de volume ervthrocvtaire + fraction de volume de plasma = 1). La fraction de volume ervthrocvtaire est donc une

mesure de la proportion d'hernaties par rapport au plasma. Elle est utllisee pour estimer la concentration moyenne

de l'hernoqlobine ervthrocvtaire (voir page 386) et aide Ie rnedecin a poser un diagnostic au sujet de malades

souffrant de deshvdratation, d'un choc ou de brulures,Avant I'introduction des unites 51 , la fraction de volume ervthrocvtaire s'appelait "hernatocrite" ou "volume

globulaire" et etait exprirnee sous forme de pourcentage, et non d'une fraction decim ate. Dans Ie svsterne tradition-

nel, l'hernatocrite aurait ete egal a 45% dans I'exemple ci-dessus. Relevons qu'avec les unites 51 , la valeur numerique

ne change pas, mais est exprirnee par une decimals au lieu d'une fraction (0,45 au lieu de 45%).

Echelle "macro"

Placer Ie sang (melange a I'anticoagulant) dans un tube

qradue et centrifuger pour rassembler toutes les

hernaties, Lire directement la hauteur de la colonne

d'hernaties dans Ie tube qradue,

Echelle "micro"

Placer Ie sang dans un long tube capillaire et centrifuger

sur Ie plateau d'un centrifugeur pour rnicro-hematocrite.

Lire la hauteur de la colonne d'hernaties a I 'aide d'un

appareii de mesure.

Cette methode est preferable: elle est plus rapide et

permet d'utiliser du sang capillaire preleve au doigt.

, r-'oa

'1-::--



METHODE - ECHELLE "MICRO"

Materiel

Centrifugeur electrique pour micro-hernatocrite avecplateau special tournant a grande vitesseEchelle speciale pour lecture du resultat (generale-ment fournie avec Ie centrifugeur)Tubes capillaires "heparines"- 75 mm de long

1,5 mm de diarnetre(ils contiennent un depot d'heparine secheeservantd'anticoagulant) .

Si I'on utilise du sang veineux melange 11du sel dipotassique de

I'acide EDTA, les tubes capillaires n'ont pas besoin d'etreheparines, des tubes ordinaires suffisent.

Cire molle ou pate a modeler (ou lampe a alcool)Vaccinostyle et alcool, pour Ie prelevernent du sangcapiIlaire.

Prelevement de sangcapillaire

Apres desinfection a I'alcool prelever a I'aide d'unvaccinostyle:

au 3eme ou au 4eme doigt- ou au lobule de I'oreille- ou encore au talon (nourrissons].

Le sangdoit s'ecouler spontanernent ou par une treslegerepression. Essuyer la 1ere goutte au papier-filtre.

Technique de mesure

1. Placer l'extrernite (cerclee de rouge) du tubecapiliaire heparine dans la goutte de sang.

Le sangpenetre dans Ietube par capillarite. Lelaisserse remplir environ aux % .

2. Boucher avec la cire mol Ie I'autre extremite du tube(celie qui n'a pastouche Ie sang).

Verifier qu'elle est completernent bouches sur2 mm environ.



Si on ne dispose pas de eire molle ou de pate a modeler,fermer cette extrernite du tube en la chauffant avec

prudence au-dessus de la flamme d'une lampe a alcool.

Laisser refroidir en position horizontale.

3. II est bon de preparer un portoir a cire molle, pour y

planter les tubes de chaque malade en face du nurnero

d'analyse correspondant.

\ . - - - r : c. :.":...... .. .." '" ~: .. ~ ~ ,." :..

L · iT . . s .. • (,

4. Deposer les tubes capillaires dans une des rainures

nurnerotees du plateau du centrifugeur, en s'assurantque chaque nurnero correspond a celui del'echantillon.

l.'extremite bouchee a la cire (ou a la flamme) doit

etre sur Iepourtour exterieur du plateau.

5. Centrifuger a grande vitesse.

Apres la centrifugation, les tubes contiennent 3 couches:

en heut, une colonne de plasma (P)

au milieu, un tres petit disque forme par les globulesblancs (GB)

au fond, une colonne de globules rouges (GR).

C'est exactement au sommet de cette colonne de

globules rouges que se lit la fraction de volume

ervthrocvtaire.



On peut voir ci-contre deux rnodelesd'appareils delecture existant sur Ie rnarche, (a) un modele triangulaireet (b) un modele a spirale.

b

Si on ne possedepas ce type d'appareil, on peut preparer soi-rnerneune table de lecture en utilisant une feuille depapier rnillirnetrique de 15 a 20 cm de large. Le long du bord vertical gauche, a partir du bas, faire une serie de 10marques a des intervalles de 4 mm. Faire de merne Ie long du bord vertical droit, tous les6 mm. A I'aide d'uneregie, relier les points de droite a gauche. Dans la marge de gauche, en face de la premiere ligne, ecrire ° etcontinuer a inscrire en face de chaque point et en remontant 0,1,0,2,0,3, etc., Ie dernier point etant marque 1,0.Ecrire lesmemes chiffres face aux points correspondants Ie long de la marge de droite. De nouveau a I'aide d'uneregie, tracer une deuxieme serie de lignesobliques beaucoup plus fines que.les premieres, exactement au milieu deI'espaceentre deux lignesepaisses.Enfin, en suivant les lignes du papier millirnetrique, tracer une serie de lignesverticales bien marquees, tous les 3 cm environ. La table de lecture doit etre semblable a celie qui figure ci-dessous,(Au lieu de la reproduire, utiliser eventuellement cette demiere.)

1.0

0.9

08

0.7

0.6

OS

0.4

03

02

0.1

o

--~-~

- --~ -: : : : : : : : : : = : : : : --- ---=

-r---

10

Q9

08

0.7

06

05

04

0.3

02

0.1

o



Comment utiliser la table de lecture

1. Tenir Ietube devant la table de lecture de facon a ceque Ie fond de la colonne d'hernaties (et non Ie fonddu tube) corresponde a la ligne horizontale marqueezero.

2. Deplacer Ie tube devant la table de lecture [usqu'a

ce que la ligne marquee 0,1 coincide avec Ie hautde la colonne de plasma. S'assurer que Ie niveauinferieur de la colonne d'hernaties est toujours ala ligne zero; s'assurer egalement (a I'aide des lignesverticales) que Ietube est bien droit.

3. La ligne qui coincide avec Ie haut de la colonned'hernaties donne la fraction de volume ervthro-cytaire (0,4 sur Ie schema). Les liqnes intermediairesplus fines correspondent a des intervalles de 0,05;si Ie haut de la colonne d'hernaties necoIncide pasavecune ligne, mais sesitue entre un trait epa is etune ligne plus fine, on peut en estimer la position au0,01 Ie plus proche.

Note: Milme si Ie laboratoire n'a pas encore ado pte les uni tes

SI et conserve encore Ie svsterne traditionnel on peut utiliserla table de lecture. II suffit de lire le s chiffres non comme

des fractions mais comme des pourcentages. Ainsi, au lieu de

"fraction de volume ervthrocvtalre 0,4" noter "hernatocrlte40%".

NIVEAU SUPERIEUR

DE LA COLONNE DEPLAS~~

- '" =-- -11J:::::::---: . _ - - - - -

. -" " " .- -O .a '. -07

-Q6 :.

Q5 '

...NIVEAU SUPERIEURQ4

~E LA COLONNE03 D'HEMATIES

Q2

010

".

NIVEAU INFERIEUR DE LACOLONNE D'HEMATIES

1D

Q9

08

07

OS

as

04

03

02

0.1

o

Resultats

Chiffres normaux Fraction de volume

ervth rocvta ire

Hommes

Femmes

Enfants (5 ans)Nourrissons (3 mois)

Nouveau-nes

0,40-0,500,37-0,43

0,38-0,440,35-0,400,50-0,58

Svsterne traditionnel:

hematocrite

40-50%37-43%

38-44%·35-40%50-58%

Les chiffres sont faibles chez les sujets atteints d'anernie: la fraction de volume ervthrocvtalre est alors inferieure a0,40 chez les hommes et 0,37 chez les femmes (hernatocrlte 40% et 37% respectivement).

Les chiffres sont eleves en casde perte de plasma, de brOlures graves,de deshvdratation, de diarrhea des nourrissonset de cholera (ainsi que - mais c'est rare - de polvcvthernie).

METHODE - ECHELLE "MACRO"

MaterielCentrifugeur electrique ordinaire capable desupporter une force de 2300 gala basedespotsporte-tubes .Tubes graduesspeciaux (tubes deWintrobe):- diametre: 0,6 cm- longueur: 9,5 cm- graduations: 0 a 100Pipette Pasteur capillaire fine et longue (pouratteindre Iefond du tube) avectetine en caoutchouc .

.Prelevement de I'echantillon

Prelever du sangveineux et I'ajouter a un tube d'anti-coagulant (seldipotassique de I'acide EDTA ou solutionde Wintrobe).

50 51



Methode

1. Remplir de sang Ie tube qradue, a I'aide d'unepipette capillaire:[usqu'a la graduation 100

- en s'assurant qu'il n'entre aucune bulle d'air.

2. Centrifuger pendant 30 minutes a une forcecentrifuge de 2300 g. Si Ie bras rotatif du centri-fugeur (rnesure a la basedu pot porte-tubes) a 15 cm

de long, la vitesse devra atteindre 3600 t/min; s'ilmesure 20 ern, elle devra etre de 3100 t/min.

(Attention: une force inferieure a 2300 g environaurait pour effet de fausser Ie resultat.)

30 min

3. Lire Ie resultat a la hauteur de la ligne de demarca-tion entre la colonne d'hernaties et la couche de

leucocytes. S'assurer que I'on utilise la bonne seriede graduations, vers Iehaut en direction du 100.Cechiffre est un pourcentage (Ie "volume globulaire"ou "hematocrite"): Ie diviser par 100 pour obtenirla fraction de volume ervthrocvtaire,

Resultats

Lesvaleurs normales sont les memesque pour lamethode utilisant l'echelle "micro".

RAPPORT ENTRE LA CONCENTRATION ERYTHROCYTAIRE ET LA FRACTION DE VOLUMEERYTHROCYTAIRE

Normalement, il existe un certain rapport entre la concentration ervthrocvtaire (nombre d'hernatles x 1012 par litre)et la fraction de volume ervthrocvtaire. Si ron desiqne la premiere valeur par C, la fraction de volume ervthrocvtairesesituera normalement dans I'intervalie allant de (C -0,2)/10 a (C -0,4)/10.

Exemple:

Si la concentration ervthrocvtaire est egalea 5 x 1012 II, la fraction de volume ervthrocvtaire sesituera normalementdans I'intervalle allant de (5 -0,2)/10 a (5 -0,4)110 soit 0,48 a 0,46.

(Dans Iesvsterne traditionnel, Ie rapport est Ie rnerne, mais la formule utilisee pour Iecalculer est legerementdifferente: si C est la numeration ervthrocvtaire, l'hematocrite exprirne en pourcentage sesituera normalementdans I'intervalie entre (C x 10) -2 et (C x 10) -4.)



RAPPORT ENTRE LA FRACTION DE VOLUME ERYTHROCYTAJRE ET LA CONCENTRATIOND'HEMOGLOBINE

La fraction de volume ervthrocvtaire est normalement egale a 0,003 fois la concentration d'hernoqlobine, quandcelle-ci est exprirnee en grammes par litre. Si elle est exprirnee en millimoles d'hernoqlobine (Fe) par litre, lafraction de volume ervthrocvtaire correspond grosso modo a 0,05 fois ce chiffre.

Exemple:

Un sujet dont la concentration d'hernoqlobine est de 130 gil aura normalement une fraction de volume ervthro-cytaire de 130 x 0,003 = 0,39. En hernoqlobine (Fe), la concentration est de 8,0 mmol/l et la fraction de volumeervthrocvtaire serad'environ 8,0 x 0,005 = 0,4.

DONNEES SUPPLEMENTAl RES FOURNIES PAR LA DETERMINATION DE LA FRACTION DE VOLUMEERYTHROCYTAIRE

Leucocytes (globules blancs)

Examiner la couche blanche de leucocytes surmontant la colonne d'hernaties, Elle est normalement tres mince;si elle parait epaisse,determiner la concentration leucocytaire. La couche de leucocytes paraitra anormalementepaissesi la concentration leucocytaire depasse20 x 109 II (20 000Imm3). Dans les casde leucemia. la concentra-tion leucocytaire peut atteindre [usqu'a 100 a 200 x 109 II (100000 a 200 0001mm3

) et la couche de leucocytespeut mesurer plusieurs rnillirnetres,



24. Concentra tion moyenne d 'hemog lobine e ry th rocyta ire

C'est un chiffre qui exprime la quantite moyenne d'hernoqlobine que contiennent les hernatles, Elle s'exprime soiten grammes d'hernoqlobine par litre soit en millimoles d'hemoglobine (Fe) par litre,* et on la calcule en divisant laconcentration sanguine d'hernoqlobine par la fraction de volume ervthrocvtalre.

Exemples

(1) Si l'hemoqlobine est exprimee en grammes par litre:hemoqlobine = 150 gil; fraction de volume ervthrocvtalre = 0,43concentration moyenne d'hernoqlobine ervthrocvtalre = 150:0,43 = 349 gil

(2) Si l 'hernoqlobine est exprimee en millimoles d'hemoqloblne (Fe) par litre:hernoqlobine (Fe) = 9,3 mmol/l; fraction de volume ervthrocvtaire = 0,43concentration moyenne d'hernoqlobine ervthrocvtaire = 9,3:0,43 = 21,7 mmol/l

(Note: Pour passerdes gil aux mmol/ l , multiplier par 0,06206. Ainsi, dans I'exemple ci-dessus,349 gil x 0,062 06 = 21,7 rnrnol/l.)

RESULTATS

Normalement, la concentration moyenne d'hemoqlobine ervthrocvtaire s'etablit entre les llmites suivantes: (a)limite inferieure: 322 gil d'hemoqloblne ou 20 mmol/l d'hernoqlobine (Fe); (b) limite superleure: 371 gil d'herno-globine ou 23 mmol/l d'hernoqlobine (Fe). Ouand la concentration s'etablit entre cesdeux limites, les hematiessont dites "norrnochromes" (c'est-a-dire de couleur normale). Ouand elle tombe au-dessousde la limite lnferieure,

on parle d'hematies "hypochromes" (c'est-a-dlre plus pales que la normale}, comme c'est Ie casdans lesanemiashypochromes. Si elle depassela limite superieure, il faut d'abord soupconner une erreur et determiner a nouveaula concentration moyenne d'hernoqlobine ervthrocvtaire, En effet, il n'existe pasvraiment d'hsmatles "hyper-chromes" (plus colorees que la norrnale). mais les hernatles peuvent augmenter de volume et contenir davantaged'hernoqlobine: en ce cas, la concentration moyenne d'hernoqlobine ervthrocvtaire peut aller jusqu'a 380 gil(hernoqlobine (Fe) 23,6 rnrnol/l}, mais jamais au-dela,

Uni tes t rad it ionnelles

Dans Iesvsterne traditionnel, la concentration moyenne d'hernoqlobine ervthrocvtaire s'appelait "concentrationglobulaire moyenne" (generalement abrsqee en C.G.M.) et s'exprimait en pourcentage: on la calculait en divisantpar l'hematocrlte exprirne en pourcentage la concentration d'hernoqloblne du sang,exprirnee en grammes par100 ml, et en multipliant ce chiffre par 100. Exemple: concentration d'hernoqlobine, 15,0 gil 00 ml; hematocrlte,43%; concentration globulaire moyenne = (15,0:43) x 100 = 34%. Dansce svsterne, les valeurs normales vont de32 a 36% et ne depassent jamais 38%.

"Voir note sur la tacon d'exprimer la concentration d'hemoglobine page 371.



25 . P rep aration d'un etalem en t m inc e

Principe

On etale une goutte de sangsur une lame de verre, defacon uniforme, afin qu'il n'y ait qu'une seuleepaisseur de globules.

Apres coloration, les lamesde sangsont utilisees:pour I'etablissement de la formule leueocytairepour la recherche d'hernaties anormales

- pour I'identification de certains parasites.

MATERIEL

- Lamesde verre propres et degraissees

Preparation d'une lame rodee pour etaler Iesang1. Choisir une lame de verre au bord parfaitement lisse.2. Avec une lime, limer en oblique 2 coins a une

extrernite de la lame.3. Detacher les2 coins limes.

PREPARATION DES LAMES

Les lamesdestinees a recevoir desetalernents minces desangdoivent etre bien tavees et, IecaseeMant,nettovees it I'aide d'un chiffon doux imbibe d'aleool-ether.



PREU~VEMENT D'UN ECHANTILLON DE SANG

Preleverdu sangdu 3eme ou du 4eme doigt- sur Ie cote du doigt.

Laisser Iesangs'ecouler librement. Prelever en premierlieu lesechantillons necessairespour determiner lesconcentrations globulaires (si elles sont dernandees).

Attention. Ne pas prelever de sang:

a I 'index ou au poucea un doigt infecte (panaris, etc.)a I'oreille (trop de monocvtes).

Utilisation d'anticoagulants

N'employer que de la solution sechede sel dipotassiquede I'acide EDTA; lesautres anticoagulants alterantl'aspect des leucocytes. Mieux vaut ne pas laisser Iesangdans un anticoagulant avant de faire un etalement,

TECHNIQUE DE L'ETALEMENT

1. Recueillir une goutte de sangde cette grosseur:.en la mettant delicaternent en contact avec uneextrernite de la lame.

2. Tanir la lame d'une main. De l'autre, poser Ie bordde la lame rodee juste en avant de la goutte de sang.

3. Faire glisser la lame rodee [usqu'a ce qu'elle touchela goutte de sang.



4. Laisser Iesangserepartir tout Ie long du bord de lalame rodee,

5. Pousserla lame rodee jusqu'au bout de la lamed'etalernent, d'un mouvement doux et requller

(tout Iesangdoit etre reparti avant que I'on atteigneIe bout de la lame).

..~Le sangde malades atteints d'anernie doit etre etaleplus rapidement.

6. Verifier que l'etalernent est bien fait (voir dessin A):il ne doit pas presenter de lignestransversalesouhorizontalesil doit etre lisseaux extrernites, et non irrequlierou strie, comme sur Ie dessin Bil ne doit pasetre trop longil ne doit pasetre trop epaisil doit etre etale uniformernent (ce qui n'est pas

Iecassi I'on utilise une lame graisseuse).II est essentiel que l'etalernent soit bien fait. Sinon,la formule leucocytaire s'en trouverait tausseeet ilserait impossible de rendre compte de lamorphologie deshernaties.

A

B

SECHAGE

Un sechsqecorrect est capital pour conserver la qualitede l'etalemsnt, surtout dans les pays a climat humide.

Pendant la saisondespluies (pays tropicaux)

Secher en agitant rapidement a 5 cm environ d'unelampe a alcool allumee: sur Ie cote de la lampe, un peuau-dessusde la flamme (rnais jamais directementau-dessus).

Le casecheant, mettre les lames a I'abri des mouches.



Inscrire sur la lame Ie nom et Ie nurnero du malade.Ecrire au crayon grassur la partie epaissede l'etalernent,qui n'est pas utllisee pour I'examen.

FIXATION

Pour determiner la formule leucocytaire, fixer les lames au methanol ou, directement, au Mav-Grunwald (voir page393).

Pour la recherche de parasites (coloration de Giemsa ou de Field), fixer au methanol (voir pages393 et 395).

CONSERVATION

Fixer les lames au methanol.Les emballer individuellement dansdu papier blanc (une fois seches).



26 . C olo ra tio n d es e ta lemen ts m in ce s

Principe

Les etalernents minces de sang sont colores aux colorants de Romanowsky, qui contiennent du bleu de methylene

et de l'eosine, Les colorants de Romanowsky les plus employes sont:

Leishman et Wright, qui donnent des resultats analogues et sont utilises seulsMav-Grunwald et Jenner, qui donnent des resultats analogues et sont utilises avec Ie Giemsa

Giemsa, qui peut tHre utilise seul ou avec May-Grunwald ou Jenner

Field A et S, qui sont prepares dans I'eau, a la difference des produits precipites, pour lesquels on utilise du

methanol. Les colorants de Field sont employes pour preparer aussi bien des gouttes epaisses que des

etalernents minces.

Les colorants de Romanowsky au methanol peuvent servir a fixer des etalernents minces avant d'etre dilues sur leslames pour les colorer. C'est en fixant d'abord au methanol, puis en effectuant la coloration a I 'aide de colorants

tout prets et dilues (voir ci-dessous), que I'on obtient les meilleurs resultats,

COLORATION DE LEISHMAN

Materiel

2 agitateurs en verre places au-dessus d'un evier ou

d'une cuve de coloration

Eprouvette de 50 ou 100 ml

Pissette contenant de I'eau tarnponnee

(reactif No. 20)Minuterie

Ratelier a lamesColorant de Leishman (reactif No. 37)

Methanol

Methode

1. Fixer l'etalernent mince au methanol pendant 2 a 3minutes.

2. Preparer une dilution de Leishman (1 :3) en utilisant

une part de colorant pour 2 d'eau tarnponnee.

Melanger.Exemple: Employer 10 ml de colorant pour 20 ml

d'eau tarnponnee.

Une fois dilue, Ie colorant se conserve mal; ne preparsr que la

quantite necessaire pour une [ournee.

~< J I / 1 1 I J )



3. Couvrir la lame de colorant dilue et laisseragir 7a 10 minutes.

Attention: On peut etre arnene 11devoir modif ier ce delai,

notamment lorsqu'on recoit un nouvel arrivage de colorant

ou si celui-ci a ete stocke pendant longtemps.

4. Verser de I'eau tamponnee sur la lame pour laverIecolorant. Ne pasincliner la lame, car il resteraitun depot de colorant sur l'etalernent,

5. Laisserde I'eau propre sur la lame pendant 2 a 3minutes pour obtenir une coloration differentielle.

Ce delai varie en fonction du colorant utilise et dupH de I'eau.

Le pH de I'eau a une importance capitale pour diffe-rencier les leucocytes avec Iecolorant de Leishman.II doit sesituer entre 6,8 et 7,2 et, de preference,entre 7,0 et 7,2 (voir page61).

6. Laisseregoutter la lame et la placer sur un ratelierpour la faire secher,

Resultats

Dansun etalement bien colore:

Neutrophiles Le cytoplasme est colore en rosepale et contient de petits granules mauvesEosinophiles Le cytoplasme est colore en rosepale et contient de gros granules rouges

Monocytes Le cytoplasme secolore en gris-bleuLymphocytes (gros) Le cytoplasme secolore en bleu clair

(petits) Le cytoplasme secolore en bleu tonesDe nombreux granules, bleu-mauve fence, remplissent Ie globuleSe colorent en rouge-roseSecolorent en rose-mauve.

8asophilesHemstiesPlaquettes



COLORATION DE MAY-GRONWALD ET GIEMSA

Materiel

Comme pour la coloration de Leishman.

Colorant de May-Grunwald (reactif No. 39)

Colorant de Giemsa (reactif No. 31)

Eau tarnponnee (reactif No. 20).

Methode1. Fixer l'etalement mince au methanol pendant 2 a 3

minutes.

2. Pour preparer les colorants, proceder comme suit:

diluer du colorant de May-Grunwald (1 : 2) en

mettant un volume egal de colorant et d'eau

tarnponnee, Melanger.

Exemple: mettre 10 ml de colorant pour

10 ml d'eau tarnponnee.

diluer du colorant de Giemsa (1: 10) en mettant

une part de colorant pour 9 d'eau tarnponnee.

Melanqer delicatement,

Exemple: mettre 2 ml de colorant pour

18 ml d'eau tarnponnee,

Une fois dilues, les colorants ne se conservent pas bien; n'en

preparer que la quantite necessaire pour une journee.

3. Couvrir la lame de colorant de May-Grunwald

dilue et laisser agir 5 minutes.

4. Egoutter Ie colorant et Ie remplacer par du Giemsadilue. Laisser agir 10 minutes.

Attention: On peut etre arnene 11modifier ce delai, notamment

lorsqu'on recoit un nouvel arrivage de colorant ou si celui-ci

a ete stocke longtemps.



5. Verser de I'eau tarnponnee pour laver Ie colorant.Ne pas incliner la lame car il resterait un depot de

colorant sur l'etalement.

6. Laisser de I'eau propre sur la lame pendant 2 a 3

minutes pour obtenir une coloration differentielle.

Cette duree varie en fonction du colorant utilise etdu pH de l'eau, qui doit se situer entre 6,8 et 7,0(voir page 61).

7. Laisser egoutter I'eau et faire secher la lame sur un

ratelier,

Resultats

Comme pour Ie colorant de Leishman (voir page 392).



COLORATION RAPIDE DES ETALEMENTS MINCESA L'AIDE DES COLORANTS DE FIELD

Avec lescolorants de Field, on ne precede pasde la

rnernernaniere pour lesgouttes epaisseset pour lesetalernents minces. Le colorant B est employe avant Iecolorant A.

Materiel

Colorants A et B de Field (reactif No. 25)- Flacons ou bechers d'eau propre ordinaire (il n'est

pas necessaired'employer de I'eau tamponnee).

Lescolorants A et B de Field peuvent etre util isespurs aussi longtemps qu'ils donnent de bons resultats.lis doivent etre filtres tous les 2 ou 3 jours.

Methode

1. Fixer l'etalernent au methanol pendant 2 a 3minutes.

2. Tremper la lame dans Ie colorant B et compterjusqu'a 5.

L'egoutter et la laver dans Ie premier recipientd'eau du robinet.

3. Egoutter la lame et la tremper dans Iecolorant A;compter jusqu'a 10.

L'eqoutter et bien la laver dans Iesecond recipientd'eau,



4. Examiner la couleur de l'etalernent. II doit etremauve, ni trop bleu, ni trop rose.

S'il n'est pas satisfaisant, tremper a nouveau la lameselon Ie casdans Ie colorant A ou dans Ie colorant B,

pendant quelques secondes.S'i I est satisfaisant, faire secher la lame sur unratelier,

Resultats

Analogues a la coloration de Leishman (voir page392).

PRECAUTIONS A PRENDRE POUR REUSSIR LA COLORATION

Eviter la formation de depots de colorants, qui ont pour effet de recouvrir la preparation d'une multitude depetites taches noires.Eviter lesmauvaisescolorations, trop bleues, trap rosesou trop foncees,

1. Verrerieparfaitement propre: La laver to us lesjours. Ne pasutiliser d'acide. Enlever lesdepots de colorantau methanol.

2. Eauneutre (tarnponnee si possible): Voir methode de preparation page61. Une eau acide provoque unecoloration trop rouge; une eau alcaline une coloration trop bleue. L'eau neutre doit etre frafchement preparee,car, exposee a l 'air, elle devient acide.

3. MelangeGiemsa: Le preparer lentement et avecsoin. S'ils sont secoues,lescolorants sont preclpites.

QUE FAIRE SI LA COLORATION N'EST PAS REUSSIE

1. Depotsdecolorants

lis sont dus au colorant de Mav-Grunwald ou a l 'eau neutre et visibles a l'oeil nu dans Ie liquide, sur la lame.Egoutter Ie colorant. Rineer la lame 2 fois au methanol. Seeberet refaire la coloration avecun Mav-Grunwaldfiltre ou frafchement prepare.

2. Depotsde Giemsa

lis sont visibles a l 'oeil nu ou au microscope. Rineer egalement au methanol, mais laver immedlatement a I'eauneutre. Seeberet recommencer completement la coloration.

3. Lame trop bleue (basophilie exsqeree)

Preparer une solution d'acide borique a 1% dans de I'alcool a 95°. Rineer la lame 2 fois dans cette solution. Lalaver aussitot a I'eau neutre. La secher et I'examiner a nouveau au microscope sansautre traitement. On peutqeneralernent eviter cette basophilie en utilisant de I'eau tarnponnee au pH acide et, Iecasecheant, en modifiantIe temps d'obtention d'une coloration differentielle,



27 . Fo rmule le uc oc ytaire et e xamen d es leu coc yte s

Les leucocytes (globules blancs) du sangne sont pasto us identiques. II y a 5 types principaux de leucocytes qui sedifferencient par la taille. la forme du noyau, la couleur des granulations du cytoplasme et d'autres facteurs. Leurrepartition entre les differents types est importante pour Iediagnostic. On I'appelle traditionnellement "formuleleucocytai re".

Principe

On compte 100 leucocytes et on note Ie nombre dechaque type. L a proportion de chaque type deleucocyte setraduit par une fraction decirnale".Exemple:

neutrophiles 0,56lymphocytes 0,25

eosinophiles 0,12monocytes 0,06basophiles 0,01

Le total de toutes cesfractions doit etre egal a 1.

MATERIEL

Microscope (oculaire 5 ou 6 x et objectif 100 xa immersion - on peut aussi utiliser un object if asec40 x, avec lamelles)

Huile a immersionEtalement mince de sang,bien fait, colore aucolorant de Romanowsky (voir page393)Si possible, compteur special a touches, oucompteur a billes fabrique sur place.

METHODE

Examen de la lame

Utiliser un objectif 100 x a immersion, et s'assurer queles leucocytes sont repartis de facon uniforme.

Si l'etalernent a ete mal fait, les neutrophiles peuvents'etre aqqlorneresa une extrernite de la lame.

*Dans Ie svsterne traditionnel, la proportion de chaque type deleucocyte etait exprirnee en pourcentage - soit, pour I'exemplecite plus haut, 56% de neutrophiles, 25% de lymphocytes, 12%deoslnophiles, 6% de monocytes et 1%de basophiles.



Numeration des teucocytes

1. Commencer a cornpter au bord de l'etalernent justea l'endroit ou les hernaties commencent a recouvrirles leucocytes.

2. Examiner une bande de la lame, en progressant

d'un champ a un autre (voir schema). Noter Ie typede leucocyte observe dans chaque champ.

3. Compter au total 100 leucocytes.

S'assurer que l'etalernent n'est pas trop epais,Si l'etalernent devient epais (hernaties tres serrees).cesserla progression vers I'avant et recommencer acompter dans I'autre sens.

Recherche d'eventuelles anomalies des hemeties ou desplaquettes

Examiner leshernaties (voir page407) et noter lapresenceeventuelle de parasites du paludisme (voirpages200-201).

Examiner Ienombre de plaquettes en precisant "normal"(N). "faible" (F) ou "eleve" (E).Si l'etalernent est fait a partir de sangcapillaire, lesplaquettes (voir page351) sepresenteront probablementen amas.

EXAMEN DES LEUCOCYTES

1. Noter la forme des leucocytes et leur taille parrapport a celie d'une hematie (H).



2. Noter la forme du noyau et sataille par rapport aI'ensemble du leucocyte:- rond R, lobe L, dentele D.

R

3. Noter I'aspect du cytoplasme.

Couleur:incolorerosebleu pale

bleu fence.Granulations dans Iecytoplasme:

granulations neutrophiles (N) - petites, mauvesgranulations eosinopbiles (E) - grosses,orangea rougegranulations azurophiles (A) - assezgrosses,rouge-violet vifgranulations basophiles (B) - tres grosses,violet-noir.

N

4. Noter I'aspect de la chromatine du noyau(coloration dense ou faible), ainsi que la position dunoyau dans Ie leucocyte (centrale ou excentrique).

5. Les vacuoles et les nucleoles sont des plagesrondesou ovales, plus ou moins nettes, qui ne secolorentpasou tres peu.

vacuoles (V) dans Ie cytoplasme- nucleoles (N) dans Ie noyau.



Formes normales

Les potynucteeires neutrophiles (P) ont:

un noyau polvlobe- des granulations cytoplasmiques (d'ou leur nom

courant de "granulocytes").

Les lymphocytes (L) et les monocytes (M) ont:

un noyau compact- avecou sansgranulations cytoplasmiques.

•.

.

,

p

L M

1a. POL YNUCLEAIRE NEUTROPHILE

Taille 12 a 15 tlmForme arrondie, bien delirniteeCytoplasme abondant, roseGranulations mauveset tres petites, nombreuses mais

distinctes

Noyau divise en plusieurs lobes (2 a 5) relies pardes filaments de chromatine. Celle-ciapparait comme une masseuniformeviolet fence.

(Plus Ie polvnucleaire est vieux, plus son noyau a delobes.)

1b. POL YNUCLEAIRE NEUTROPHILE UNILOBE

(IMMATURE)

Leucocyte semblable au precedent, mais Ie noyau n'estpasencore divise en lobes; souvent en forme de S.

Si l'on observe ce type de leucocyte, en indiquer lafraction de nornbre, comme pour lesautres types.



2. POL YNUCLEAIRE EOSINOPHILE

Taille 12 a 15 J.lm

Granulations grosses, rondes, orange vif, nombreuses

et serrees

Noyau qeneralernent 2 lobes

Paraft parfois ab irne, avec des granulations dispersees.

3. POL YNUCLEAIRE BASOPHILE

C'est Ie type Ie plus rare de granulocytes.

Taille 11 a 13 ur nForme ronde

Granulations tres grosses, rondes, violet-noir,

nombreuses mais moins serrees que lesgranulations des eosinophiles

Noyau difficile a voir, parce que recouvert de

granulations

Vacuoles parfois petites vacuoles incolores dans Ie

cytoplasme.

4. PETIT LYMPHOCYTE

Taille 7 a 10 J.lm

Forme ronde

Noyau volumineux, occupant presque toute la

cellule - chromatine dense, violet fence

Cytoplesme tres peu visible; bleu, sans granulations.



5. GRAND LYMPHOCYTE

Taille 10 a 15 J,lmForme ronde ou irrequliereNoyau ovale ou rond, peut etre place contre un

bordCytoptssme abondant, bleu paleGranulations rares, assez grosses et azurophiles (rouge

fence].

6. MONOCYTE

15 a 25 J,lm;c'est Ie plus grand desleucocytesirrequliered'aspect variable, souvent en forme de

haricot, chromatine en filaments, mauvepaletres fines, en poussiere, generalementrouqeatresgeneralement quelques vacuoles dans Iecytoplasme.

Chez les malades atteints de paludisme, Ie cytoplasmecontient souvent des masses brun noiratre, " s'agit depigment paludeen.

Taille

FormeNoyau

Granulations

Vacuoles

Formes rares ou anormales

7. PLASMOCYTE

Les plasmocytes produisent des anticorps que l'on peutobserver sur les lames de sang de sujets atteints derougeole, de tuberculose, d'autres infections virales etbacteriennes, ainsi que dans les mvelornes multiples.

Taille 12 a 15 J,lmForme ronde ou ovale

Noyau rand, excentrique, chromatine formantdes blocs, souvent disposes en rayons deroue

Cytoplssme bleu sombre, avec un halo clair autour dunoyau

Vacuoles peu visibles, nombreuses et tres petites.



8. HEMA TIE NUCLEEE (NORMOBLASTE)

Hernatie nucleee immature trouvee normalement dansla moelle des os. Elle passe dans Ie sang dans certainesmaladies (anernles).

Tail/e 8 a 9 J,Lm

Forme ronde ou irrequliereCytoplssme rose ou gris-bleu, sans granulationsNoyau rond, souvent excentrique, chromatine

noire, dense, souvent disposee en amas.

9. GRANULOCYTE IMMATURE

Les granulocytes immatures de la moelle passent dans Iesang dans certaines maladies (infections bacteriennesgraves). Leurs caracteristiques sont les suivantes:

Tail/e 12 a 18 J,Lm

Noyau unique, non lobe, chromatine de couleurvariable, allant du rouge sombre auviolet

Cytoplasme rose ou bleu paleGranulations nombreuses, grosses, de couleur mauve ou

rouge fence.

On peut observer des granulations toxiques dont lesgranules sont tres gros et de couleur sombre.IIexiste aussi des cellules immatures sans granulationset avec nucleoles: voir No. 12 ci-apres,

10. POLYNUCLEAIRE NEUTROPHILE HYPER-

SEGMENTE

C'est un "vieux" polvnucleaire neutrophile dont I'aspectest identique a celui d'un globule normal mais dont Ienoyau, souvent gros, a de 5 a 10 lobes.

On peut I'observer chez des malades atteints d'anerniemacrocytique provoquee par une carence en acidefolique ou en vitamine 8-12.



11. LYMPHOCYTE A TYP/QUE

Observe dans les infections virales, notammentles

mononucleoses infectieuses, la coqueluche et la

rougeole, ainsi que dans la tuberculose et les acces graves

de paludisme.

Taille

Forme

Noyau

tres variable, 12 it 18 J.Lm

qeneralement irrequliere

rond ou irrequlier, souvent excentrique;

peut comporter des nucleoles

qeneralernent bleu plus fonce que celui

du grand lymphocyte; bords du globule

plus sombres.

Cytoplasme

12. CELLULE BLAST/QUE, "BLASTE"

Element Ie plus jeune (Ie plus immature) de la liqnee

des leucocytes. Observe dans les lames de sang de

malades atteints de leucernie,

Taille grandes cellules, 15 it 25 J.LmNoyau volumineux, rond, mauve pale, contenant

toujours 1 it 5 nucleolesCytoplesme bleu fence, avec une zone plus pale

autour du noyau.

13. MEGACARYOCYTE

C'est la cellule-mere des plaquettes trouvee dans la

moelle osseuse.

enorrne, 60 a 200 J.Lmtres irrequlier, polvlobe mais massif

rernpli de fines granulations plutot

azurophlles et de plaquettes

Membrane peu distincte.

(Tres rarement trouve dans Ie sanq.)

TailleNoyau

Cytoplasme



METHODES DE NUMERATION

A vec un compteur special a touches

Cescompteurs sont munis d'un clavier dont chaquetouche correspond a un type de leucocyte dont ilsenregistrent automatiquement Ie nombre. Cesappareilssont coOteux.

Avec un compteur a billes

On peut Ie fabriquer sur place, selon Iemodele dessineci-contre. II comprend:

5 boftes marquees cornrne suit:N = neutrophilesE = eosinophiles

B = basophilesL = lymphocytesM = monocytes.

une 6eme bofte contient 100 billes (ou haricots,ou grains de mars) qui serviront a compter.

A I'aide d'un crayon et d'un pepier

Inscrire les differents types de leucocytes au fur et amesurequ'on les compte; proceder comme suit:

Faire un tableau comportant:(a) 5 colonnes (N, E, B, L, M) et

(b) 10 bandes horizontales (modele ci-contre).

Desqu'on a trace 10 traits dans une bande horizontale,passera la suivante. De cette rnaniere, quand la bande(10) est achevee,on est assured'avoir compte 100elements exactement.

Faire alors Ietotal pour chaque colonne; il donnedirectement Ie pourcentage pour chaque typed'elernent.

Cestotaux donnent Ie pourcentage de chaque type deleucocyte. On les transformera en fractions decirnales en

placant la virgule a gauchede 2 chiffres (en ajoutantdans certains cas un zero). Ainsi 59 = 0,59, 8 = 0,08,1 = 0,01, 28 = 0,28, etc., comme a la derniere bandehorizontale du schema. Cesdecirnales sont les fractionsde nombre de chaque type de leucocyte et constituentles resultats a indiquer si I'on utilise les unites SI.

N E B i t . \ 1 1 f t

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RESULTATS

Resultats normaux par groupe d'age*

Nouveau-nes Apres 4 jours 1 a 4 ans 10 ans Adultes

Polvnucleaires neutrophiles 0,55-0,65 0,40-0,48 0,36-0,48 0,45-0,55 0,55-0,65

Polvnucleaires eosinophiles 0,02-0,04 0,02-0,05 0,02-0,05 0,02-0,05 0,02-0,04

Polvnucleaires basophiles 0 -0,01 0 -0,01 0 -0,01 0 -0,01 0 -0,01

Lymphocytes 0,30-0,35 0,40-0,48 0,44-0,54 0,38-0,45 0,25-0,35

Monocytes 0,03-0,06 0,05-0,10 0,03-0,06 0,03-0,06 0,03-0,06

On constate donc la formule avec rnajorite2 tendances de lymphocytes

generales

nourrissons et enfantsde moins de 10 ans

~ la formule avec rnajoritede polvnucleeires

neutroph iles

adultes, enfants de plusde 10 anset nouveau-nee

La proportion de chaque type de leucocyte peut etre exprirnee sousforme de concentration de nombre (c'est-a-direde nombre de globules par litre) au lieu de I'etre par une fraction de nombre. La concentration de nombre estcalculee en multipliant la fraction de nombre de tel type de leucocyte par la concentration de nombre totale deleucocytes. Exemple: * *

Leucocytes: concentration de nombreNeutrophiles: fraction de nombreNeutrophiles: concentration de nombre

= 5 X 109/1= 0 42= 0:42 x 5 x 109 = 2,1 X 199/1

Resultats anormaux

(a) NEUTROPHILlE: proportion accrue de neutrophiles (plus de 0,65). Dans les infections aiques notamment.

(b) EOSINOPHILlE: proportion accrue d'eosinophlles (plus de 0,05). Permet presque toujours de soupconner une

infection parasitaire localisee dans les tissus: schistosomiase, filariose, ankylostomiase, ascaridiose, etc. Peutaussi provenir d'une allergie.

(c) L YMPHOCYTOSE: proportion accrue de lymphocytes (plus de 0,35). Certaines infections virales (rougeole,etc.). certaines infections chroniques (paludisme, tuberculose, etc.), et certaines conditions toxiques.

(d) MONOCYTOSE: proportion accrue demonocytes (plus de 0,06). Certaines affections bacteriennes etparasitaires telles que tvphoide, paludisme au kala-azar.

(e) NEUTROPENIE: nombre insuffisant de neutrophiles. Peut seproduire dans certaines infections ou maladies.

*Valeurs donnees en unites SI - c'est-a-dire en fractions de nombre. Pour revenir aux unites tradit ionnelies (pourcentages) mul tiplier

chaque valeur par 100.

**Dans les unites traditionnelies, Ie calcul est fait en multipliant Ie pourcentage de neutrophiles par la numeration leucocytaire totale

et en divisant par 100. Exemple:

Numeration leucocytaire totale

Pourcentage de neutrophiles

Nombre de neutrophiles par rnrn"

= 5000/mm3

=42%

= (42 x 5000) : 100 = 2100/mm3



28. Hematles ano rma les : examen mic roscopique

Dans certaines maladies, notamment les anemies, leshernaties peuvent presenter:

une forme anormaleune taille anormaleune coloration anormale.

RECHERCHE MICROSCOPIQUE

Oil examiner les hemeties?

Un peu avant la fin de l'etalernent, la ou ellessont bien separees et etalees les unes contre lesautres, mais sans se chevaucher.

Mauvais

Emplacement de I'etalement trop epais: leshematies sont trop serrees.

Mauvais

lei, les hernaties sont trop peu nombreuses.



HEMATIES NORMALES

Tail/e 7 it 8 tIm

Forme ronde, quelquefois un peu irrequllere

Coloration pourtour rose tonce, centre rose tres clair

ou presque incolore.

CELLULES CIBLES

Taille 6 it 8 tIm

Forme ronde ou un peu irrequliere

Coloration centre et bords bien COIOrElS,avec, entre

les deux, un anneau incolore.

Observees dans les cas de thalassernie, d'anernies ithernaties falciformes et d'autres anemies, dues it deshernoqlobines anormales, ainsi que dans l'anemieferriprive.

HEMA TIES NUCLEEES (NORMOBLASTES)

Taille 8 it 10 umForme ronde, mais souvent irrequliere

Noyau petit , violet-noir, souvent excentrique,

chromatine dense

Cytoplasme rose ou gris bleute,

Observes dans les cas d'anernie grave comme les anemias

it hernaties falciformes, dans les infections bacteriennes

graves et les leucernies.

DREPANOCYTES

Forme allonqee et etroite, avec, souvent, une ou

deux extrernites recourbees et pointues.

Observees dans les cas d'anernie it hernaties falciformesou de thalassemia it hernaties falciformes, it cote

d'hematies nucleees, de cellules cibles et, sou vent,

de macrocytes.

Pour I 'examen des drepanocvtes dans les preparations

it I 'etat frais, voi r page 411.



A NISOCYTES

Hernaties de tailles ditterentes presentes dans Ie rnerne

etalernent. par exemple: hernaties de 9 pm melanqeesa de petites hernaties de 6 pm.

Nombreux types d'anernies.

POlKILOCYTES

Hernaties de formes ditterentes presentee dans Ie merne

etalernent, par exemple: melange d'hernaties rondes,

ovales, triangulaires, en forme de poire, crenelees,

Nombreux types d'anernies.

MICROCYTES (ml

Petites hematies d'environ 5 pm.

Frequentes dans l'anernie ferriprive.o o

MACROCYTES (M)

Grandes hernaties de 9 a 10 pm.

Observees dans les hernaties macrocytiques dues a unecarence en acide folique ou en vitamine 8-12, ainsi quedans certaines maladies hepatiques.

Les grosses hematies colorees en bleu-mauve (poly-

chromasie) sont des reticulocvtes (voir page 414).

o

TailleColoration

normale ou legerement reduiteseul Ie bord est colore a cause de la

carence en fer

Frequentes dans l'anernie ferriprive.

•

ANNULOCYTES (A)

SPHEROCYTES (S)

reduite (6 pm)

parfaitement ronde

uniforme, toute l'hernatle est coloree de

facon egale et plus foncee.

Observees dans les anernies hernolvtiques,

TailleFormeColoration



OVALOCYTES

norma Ie (8 J , L m )

ovalepourtour plus fence (notamment aux2 poles).

Tres rares. Trouves dans lescasd'ovalocytosehereditaire,

TailleFormeColoration

HEMATIES A VEC CORPSDE HOWELL-JOLL Y (H.J.J

Hernaties contenant une ou plusieurs grossesgranulations violet fence (restes du noyau).Ne pasconfondre avecdes plaquettes superposeesaux hematies,

HEMATIES AVEC ANNEAU DE CABOT (CJ

Hernaties contenant de minces lignes rouges, en formed'anneau ou de huit.Ne pasconfondre avecdes parasites du paludisme.

HEMATIES AVEC GRANULA TlONS BASOPHILES

Hernaties contenant un certain nombre de granulations

fines, bleu-violet.Ne pasconfondre avecdesdepots de colorants.

Note: Chaque fois que ron observe des hematies a aspectanormal, difficiles a identifier, ne pas hesiter a confier la lame aun special iste.



29 . E pre uv e d e falc ifo rmatio n d es h ematies

Principe

Sur une lame, on melangeune goutte de sang a unegoutte de reactif au metabisulfite de sodium. Si leshernaties contiennent une hemoqlobine anormale

"l'hernoqlobine S", elles prennent la forme d'unefaucille ou d'une demi-Iune.

Le reactif retire leur oxygene aux hernaties, et c'est cequi entraine cette falciformation.

L'hernoqlobine S constitue une anomalie hereditaire, Sielle est transmise par lesdeux parents, elle provoqueladrepanocvtose, (ou anernie drepanocvtalre], qui est unemaladie grave. Si elle n'est transmise que par I'un desdeux parents, elle est la causedu trait drepanocvtalreet entraine une tendance a la falciformation, maisn'induit generalement pasde troubles severes.l.'epreuve de falciformation ne permet pasdedifferencier l'anernie drepanocvtalre du trait

drepanocvtaire,l.'hemoqlobine S seretrouve surtout en Afriquetropicale, mais aussiau Moyen-Orient et parmi les Noirsamericains.

MATERIEL

Lame et lamelle de verre

Pipette Pasteur (ou pipette compte-gouttes)Solution de metabisulfite de sodium a 2% fraiche-ment preparee (reactif No. 40)Recipient pour eviter que la preparation neseche,par exemple bo ite de Petri.

6:./====:=;7

~

5 = 0 1 - - - -0=--

METHODE AU METABISULFITE DE SODIUM

1. Deposer une petite goutte de sangcapillaire (environ0,02 ml) au centre de la lame.

2. Ajouter 1 goutte de solution de rnetabisulflte desodium d'un volume eqal,

~

. : = 1 . = = = = = 1 1 = ! =



3. Melanqer soigneusement avec Ie coin de la lamelle.Couvrir avec la lamelle en s'assurant qu'il ne seforme eucune bulle d'sir.

4. Placer la lame sur 2 batonnets, dans une bette dePetri dont Iefond est garni de papier-filtre humide.

Note: Lorsqu'on utilise un reactif reducteur commeIebisulfite de sodium, il n'est pas necessairedesceller la preparation.

5. Attendre 15 minutes.

Examiner au microscope (objectif 40 x).

Si Ie resultat est neqatif, repeter la lecture apres15 autres minutes, puis au bout d'une heure, et denouveau 2 heures plus tard.

Resultats

Resuttet nllgatif: les hernaties gardent leur forme ronde.

Resultet positif: les hernaties prennent une forme defaucille ou de banane (a), souvent dentelee (b).

II importe d'examiner plusieurs zones de la preparation,car la falciformation peut se produire plus rapidementdans I'une que dans I'autre.

Ne pas prendre pour des hernaties falciformes deshernaties couchees sur Ie cote ou crenelees.



AUTRES METHODES

1. On peut utiliser du sangveineux, pourvu qu'il ait etetrstchement recueilli (1 a 2 heuresavant) sur anti-coagulant (sel dipotassique de I'acide EDTA).

2. Reaction en tube: il existe dans Ie commerce desreactlfs utilisables pour cette methode.

3. La solution de metabisulfite de sodium peut etre

rernplacee par une goutte de suspensionepaissedebacille coliforme (Escherichiacoli) preleveesur unechantillon de selleset placeedansdu solutephysiologique.

E . coli

Attention:

Si Ie resultat est positif, examiner un etalement mincede sang. Le sangdessujets atteints d'anernie a hernatiesfalciformes contient des hernaties falciformeslrreversibles, deshernaties nucleees,des cellules cibles;il presents en outre une poikilocytose marquee, et,souvent, une macrocytose. Les individus atteintsdu trait drepanocvtaire ne sont generalement pas

anerniqueset la morphologie de leurs hernaties estnorma Ie. Danstoute la mesure possible, on procederaa une electrophorese de l'hernoqlobine, pour confirmerIediagnostic, qui peut sefaire dans un laboratoire dereference.



30. Reticulocytes

Les retlculocvtes sont des hematies immatures qui passent de la moelle des os dans Ie sang. La quantite de reticule-cvtes presents dans Ie sang traduit la capacite de travail de la moelle et quand la moelle travaille intensement

(anernies) ce nombre augmente.

Principe

Les reticulocvtes contiennent de fines granulations qui peuvent etre colorees par Ie bleu brillant de cresvl, Oncolore une lame de sang avec ce produit et on observe au microscope un certain nombre d'hernaties, A partir de

cette observation on peut calculer soit (a) Ie nombre de reticulocvtes par litre de sang, soit (b) la proportion

d'hernaties qui sont des reticulocvtes,

MATERIEL

Lames (deqraissees)

Lame rodee pour etalernent

Petits tubes a essai

EntonnoirPapier-filtre

2 pipettes Pasteur, avec tetines

Compteur a main, si possible

Solution saturee de bleu de cresvl (reactif No. 11).

,==!=~)

f = = ! = = = d l

METHODE

1. Filtrer un peu de solution.de bleu de cresvl dans un

tube a essai.

Dans Ie fond d'un autre tube deposer:

- 2 gouttes de solution filtree de bleu de cresvl,

2. Prelever quelques gouttes de sang au bout du doigt

a la pipette Pasteur, ou utiliser du sang veineux

preleve dans du sel dipotassique de I'acide EDT A

et bien melanqer.



3. Ajouter au tube contenant les 2 gouttes de solutionde bleu de crssvl:

- 2 gouttes de sang.

r•;

4. Melanqer en agitant doucement Ietube.

Boucher Ietube avecdu coton carde.

Attendre 15 minutes.

/

/

/

//

II

- .

5. Reprendre Ietube prepare et I'agiter doucement.

Prelever 1 goutte du melange.

La deposer sur une lame de verre, pour etalernent.

6. Faire un etalement mince du melange avec la lamerodee,

7. Faire secher en agitant vivement la lame.



8. Examiner la lame it I'objectif it immersion. Choisir laqueue de l'etalernent la ou les hematies doivent etrebien separeesles unes des autres.

Les hemeties secolorent en bleu pale.

Les reticulocytes sont des hernaties qui contiennentde fines granulations bleu-violet fence, disposeesenfilet (reticulum). lis peuvent contenir desgranulations (1) ou des filaments (2).

9. En utilisant I'objectif 100 x it immersion, examiner au moins 100 hematles, Compter soigneusement (a) Ienombre total d'hernaties examinees et (b) Ie nombre de rsticulocvtes. (On compte plus facilement en reduisantIe champ du microscope, ce qu'on peut faire en placant dans I'oculaire un petit rond de papier noir rigide danslequel on aura perce un trou d'environ 5 mm de diarnetre.)

10.Certains hernatoloques preferent enregistrer Ie nombre de reticulocvtes sousforme de concentration de nombre(nombre de reticulocvtes par litre de sang),d'autres sous forme de fraction de nombre (proportion d'hernatiesqui sont des reticulocvtes), Selon la pratique suivie par Ie laboratoire ou la demande du rnedecin, procedercomme suit: *

(a) Concentration de nombre. Pour la calculer, on doit connaftre la concentration ervthrocvtaire totale. Si onI'exprime par C (compte non tenu du "x 1012/1") et par n Ie nombre de reticulocvtes observesen examinant

500 hernaties, la concentration reticulocvtalre est egale it C x 2n x 109/1 . Exemple:

concentration ervthrocvtaire = 4,5 x 1012/1nombre de reticulocvtes observesen examinant 500 hernaties = 6concentration reticulocvtaire = 4,5 (2 x 6) 109/1

= 4,5 x 12 x 109/ 1

= 54 x 109/1 (noter ce resultat),

(b) Fraction de nombre. Pour la calculer, on doit connaftre la concentration ervthrocvtalre. Si n est Ie nombrede reticulocvtes observesen examinant 500 hernaties, la fraction de nombre reticulocvtalre est egale it2n x 10-3. Exemple:

nombre de reticulocvtes observesen comptant 500 hernaties = 6fraction de nombre retlculocvtalre = (2 x 6) x 10-3 = 12x 10-3

•

Note: Si l'on examine plus de 500 hernaties dans un etalement de sang, Ie calcul devra i!tre rnodifie en consequence.

Resultats normaux

Concentrationretlculocvtaire t "

Fraction de nombrereticulocvtalre

Nouveau-nes

Adultes et enfants

100 x 109/1- 300 x 109/1

8 x 109/1- 110 x 109/1

20 X 10.3 - 60 X 10-3

2 X 10-3 - 20 X 10-3

"Ces calculs et les resultats norrnaux sont donnas en unites SI. Traditionnellement, Ie nombre de reticulocvtes etalt donne en pour-centages (soit en proportion d'hernaties, exprirnee en pourcentage, qui sont des reticulocvtes). Si I'on examine 500 hernatiesdans unetalement de sang et que n d'entre elles sont des reticulocvtes, on en calcule Iepourcentage en multipliant n par 0,2. Exemple: sur

500 hernaties examinees, 25 sont des reticulocvtes, Le pourcentage de rstlculocvtes est donc 25 x 0,2 = 5%. Les resultats normauxpour les nouveau-nes sont de 2,0% 116,0% et pour les adultes et les enfants de 0,2% 112,0%.

**Valeurs approximatives. La concentration retlculccvtalre est fonction de la concentration ervthrocvtaire: voir tableau page 369.



AUTRES ELEMENTS VISIBLES DANS UN ETALEMENT DE SANG

l.'etalement colore au bleu de cresvl brillant qui peut etre utilise pour la numeration reticulocvtaire peut aussi faireapparaitre les elements suivants:

Corps de I'hemog/obine H. lis se presentent comme des points bleu pale de taille variable; contrairement aureticulum des reticulocvtes, ils sont presents dans la plupart des hematies, lis apparaissent dans l'alpha-thalassemleou dans l'hemoqlobinose H.

Corps de Heinz. lis se presentent comme des granulations bleues, de taille variable, situees dans une seule partie duglobule, pres de la membrane. lis apparaissent dans les carences en glucose-6-phosphate deshvdroqenase, a la suitede I'absorption de certains medicaments.



31. Vitesse de sedimentation erythrocytaire (VS)

Principe

Du sangrecueilli sur anticoagulant est place dans unlong tube de verre gradue tenu en position verticale.

Les hernatles tombent au fond du tube, laissant surnagerune couche de plasma.

La hauteur de cette couche de plasma, apres 1 heured'attente, traduit la vitessede sedimentation deshernaties,

MATERIEL

Tubes de Westergren:- diarnetre Interieur 2,5 mm- graduations de 0 a 200 mm (souvent marquees

de 1 a 20, 1 correspondant a 10, 2 a 20, etc.)Support pour tubes de WestergrenAnticoagulant: solution de citrate trisodique a 3,8%(reactif No. 17) (a conserver au refrigerateur)Seringue graduee de 5 mlMinuterie.

-<{I ( i" i ( ~

METHODE

1. Placer dans un tube ou un flacon:- 0,4 ml de solution de citrate trisodique.

o .4ml

2. Prelever du sangveineux* en serrant Ie garrot Iemoins possible; piquer lrnrnediaternent la veine etrelacher Ie garrot.

Prelever a la seringue:- 2 ml de sang.

*On peut aussi util iser du sang conserve dans un flacon eontenantdu sel dipotassique de I'aeide EDTA.



3. Enlever I'aiguille de la seringue et ajouter 1,6 ml desangau flacon contenant I'anticoagulant (marque2,00 ml au total).

Agiter doucement.

La mesurede la VS devra commencer dans les 2heuresqui suivent ta ponction veineuse.

4. Aspirer Iesangcitrate dans Ie tube deWestergren(en utilisant, si possible, une poire en caoutchouc),jusqu'a la graduation O.

+

5. Fixer Ietube au support, en s'assurant qu'il estabsolument vertical.

Verifier qu'il n'y a pasde bulles d'air dans Ie tube.

La basedu support doit etre horizontale.

Attendre 1heure (mettre la minuterie) et noter lahauteur de la couche de plasma, en mm, a partir duzero du haut du tube.



RESULTATS

Le resultat s'exprime de la rnaniere suivante:VS mm/h.

Marge normale de variation

Hommes: 1 a 10 mm/hFemmes: 3 a 14 mm/h.

VS et anemias

Si Ie malade a un nombre insuffisant d'hernaties, lamesure de la VS n'a pas grand interet.

II ne sert a rien de determiner la VS chez des maladesqui ont une fraction de volume ervthrocvtalre inferieurea 0,3 (hernatocrite inferleure a 30%).

VS et deshydratation

Si Ie malade est deshvdrate, la mesure de la VS n'a pasgrand interet.

Augmentation de la VSToute maladie qui entrains des modifications dans lesproteines plasmatiques augmente la VS.

II en est de r n e me des affections chroniques.

On constate des VS tres elevees en cas de:tuberculose

- trypanosomiase- affections mal i gnes.

En outre, la VS augmente pendant la grossesse.

Temperature

La VS augmente avec la temperature (a partir de 23°C).

Dans les pays chauds, veiller a ne pas placer Ie supportdans un endroit chaud du laboratoire (par exempleau soleil),

Lavage des tubes de Westergren

Les rincer a I'eau, puis les faire tremper pendant12 heures dans de I'eau propre.

Les secher cornpleternent (si possible, a I'incubateura 37°C).

N'utiliser ni detergent, ni aeide, ni alcool,



32. Temps de saignement : methode de Duke

Principe

A I'aide d'un vaccinostyle, on pratique une petite

incision au lobe de I'oreille. Cette blessure saigne et

on mesure Ie temps necessaire pour que Ie saignement s'arrete,

Cette epreuve est pratiquee:pour Ie diagnostic de certaines maladies hernorraqiques

avant une intervention chirurgicale

- avant une ponction du foie ou de la rate.

MATERIEL

1 vaccinostyle steri le

Ether1 lamePapier-filtre (ou papier buvard)

1 chronornetre ou, a defaut, une montre avec

trotteuse.

METHODE

1. Nettoyer delicaternent (sans frotter) Ie lobe de

I'oreille avec I'ouate irnpreqnee d'ether,

Laisser secher,

2. Inciser protondernent Ie lobe de I'oreille.

Dectencher Ie chronornetre.

Le sang doit couler librement, sans que l'on doive

presser Ie lobe.

3. Au bout de 30 secondes:

Recueillir la 1ere goutte de sang sur un coin de

papier buvard.

Ne pas toucher la peau avec Ie buvard.



4. Attendre encore 30secondes:

Recueillir la 2eme goutte de sangde la rnemernaniere, un peu plus loin sur la bande de papier.

5. Continuer a recueillir une nouvelle goutte de sangtoutes les 30 secondes.

Les tachesde sangdiminuent peu a peu de dlamstre.

6. Quand I'incision cessede saigner, errster Ie chrono-metre (ou noter Ie temps a la montre).

On peut aussi compter Ie nombre de gouttes sur Iepapier buvard et Iemultiplier par 30 secondes.

Par exemple, il y a 7 gouttes.

Le temps de saignement est 7 x 30 secondes =3% minutes.

•••

RESULTATS

Noter Ietemps de saignement a 30 secondespres.

Mentionner egalement Ie temps de saignement normalpour la methode utllisee.

Exemple: temps de saignement 3% minutes (tempsnormal pour la methode de Duke 1 a 5 minutes).

Marge normale de variation

- 1 a 5 minutes

Si Ietemps de saignement seprolonge, examiner unetalement mince colore par I'un des colorants deRomanowsky (voir page391) pour voir si les plaquettessont peu nombreuses (utiliser du sangveineux).



33. Temps de coagulation du sang total:methode de Lee et White

Principe

On preleve du sang veineux dans un tube de verre.

On mesure Ie temps qu'il lui faut pour secoaguler.Cette epreuve n'a qu'une valeur llrnltee, car elle nepermet de deceler que les anomalies gravesde lacoagulation.

MATERIEL

2 petits tubes en verre ordinaire de 75 x 10 mm,propres, de rnernediametre, marques a 1 mlChronometre ou minuterieBain-marie a 37°C ou bouteille Thermos contenantde I'eau a 37°CMateriel pour ponction veineuse.

METHODE

1. A I'aide d'une seringue en plastique, prelever un peu

plus de 2 ml de sangveineux.

Effectuer la ponction veineuse rapidement etcorrectement.

Declencher Ie chronornetre des que Iesangpenetredans la seringue.

2. Enlever I'aiguille de la seringue et remplir chaquetube jusqu'a la marque 1 ml.

Boucher les 2 tubes avecdu coton carde.

Les mettre au bain-marie a 37°C (ou dans labouteille Thermos pleine d'eau et maintenue a cettetemperature) .



3. Apres 3 minutes retirer Ie 1er tube du bain-marie.

L'incliner a un angle de 45° pour voir si Ie sang est

coaqule,

4. Si ce n'est pas Ie cas, Ie remettre dans Ie bain-rnarie

et I'examiner toutes les 30 secondes pour voir si la

coagulation s'est faite.

5. Des que Ie sang du 1er tube est coaqule, examiner

Ie 2eme tube.

Celui-ci se coagule generalement tres peu de tempsapres Ie 1er. Arreter Ie chronornetre ou noter

I'heure.

Le temps de coagulation a indiquer est celui qui

correspond au 2eme tube.

RESULTATS

Noter Ie temps de coagulation en minutes, a 30 secondespres.

Marge norma Ie de variat ion

- 5a12minutes.

Un malade au temps de coagulation anormalement longdoit tHre adresse pour plus ample examen a un

specialists.



34. Retraction et temps de lyse du caillot

Principe

On mesure le.ternps de coagulation du sangtotal commeindique page423.

On conserve lestubes:pour obtenir la retraction du caillot

- pour mesurer Ie temps necessaire a la dissolution ducaillot (lyse).

Cet examen est utile:pour Iediagnostic de certaines maladieshem orraqiquesavant et apres une intervention chirurgicale.

METHODE

1. Laisser lestubes au bain-marie (ou a temperatureambiante).

Observer Ie caillot:au bout d'l tteureau bout de 2 heures

au bout de 3 heuresau bout de 4 heures.

Normalement, Iecaillot resteen bloc pendant les4 premieres heures, tout en comrnencant a seretracter generalement des la 1ere heure.

~I--_

2. Au bout de 4 heures, observer le caillot.

II s'est retracte en une masserouge, bien separeedu serum jaune.

RESULTATS

(a) Retraction normaIe

Le caillot rouge est bien separe: en surface, il adhereaux bords du tube. II peut y avoir au fond du tubeun petit culot d'hernaties sedirnenteesqui ne devraitpas mesurer plus de 5 mm d'epaisseur.



(b) Retraction anormale

1. On observe au fond du tube un petit caillot rouge,accroche ou non aux parois par sapartie superieure.II est entoure d'hematies qui ont sedirnente etrecouvert par Ie plasma-serumqui surnage.

- Le sangest pauvre en fibrinoqene.

2. Le caillot rouge reste presque cornpleternent attacheaux parois du tube; il n'est que peu ou pas retracte,Tres peu de serum a exsude,

- Le sangest pauvre en plaquettes.(Examiner un etalernent mince de sangveineuxprepare avec un des colorants de Romanowsky,voir page391.)

3. II y a un caillot jaune: c'est du plasma coaqule.Au-dessous, on observe un caillot rouge, malretracte.

Cette coagulation plasmatique est due a uneanomalie desproteines plasmatiques.

4. Le caillot fait totalement detaut ou s'est forme treslentement au-dessusdu culot d'hernaties,

Cela indique une anomalie grave de la coagula-tion, comme par exemple dans l'hernophilie,

qui est une maladie hernorraqique hereditairen'affectant que les hommes.

Indiquer que la retraction du caillot est:norma Ie

- anormale, avec description du caillot.

Temps de lyse

Examiner Ie caillot:au bout de 12 heures

au bout de 24 heuresau bout de 48 heuresau bout de 72 heures

jusqu'a la lyse, c'est-a-dire la dissolution complete ducaillot et Ie depot de toutes leshernaties au fond dutube.



Resultats

Temps normal de lyse du caillot 72 heures au moins.Temps reduit 1 a 48 heures.

En cas de fibrinolyse aique, Ie caillot peut se dissoudreen 1 a 4 heures.

Noter Ie temps de lyse en heures.

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